提供了特異地結合CD38的抗體，以及包括融合到致弱干擾素α-2B蛋白質上的這樣的抗體結構。抗-CD38-致弱干擾素α-2b融合結構可以用于抑制表達CD38和IFN-α2b受體的癌癥細胞的增殖，以及誘導這樣的細胞凋亡。抑制癌癥細胞增殖和誘導癌癥細胞凋亡可以充當治療潛在癌癥的基礎。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】抗-CD38抗體和與致弱干擾素α-2B的融合體序列表參考本申請包括電子方式提交的序列表，其作為名稱為抗-CD38_抗體_ST25的文本文件，創建于2013年4月29日，大小為462,000字節。該序列表通過援引并入本文。
本公開大體上涉及抗體工程領域。更具體地說，本專利技術涉及特異地結合CD38的抗體，以及包括這樣的抗體和致弱干擾素-α配體(attenuatedinterferon-alphaligands)的結構，和使用這些結構的治療方法。在這些結構中，該抗體指導該配體到表達CD38和該配體的受體的細胞，并且該致弱干擾素-α降低不表達CD38的細胞中的干擾素信號。
技術介紹
貫穿整個說明書，引用了各種公開物，包括專利，公開的申請，技術文章，學術文章，和基因或蛋白質的訪問號(geneorproteinaccessionnumbers)。每個這些材料以其全部為任何目的在此通過援引并入本文。CD38是46kDaII類跨膜糖蛋白。它具有20個氨基酸的短N-端胞漿區(N-terminalcytoplasmictail)、單個跨膜螺旋和256個氨基酸的長胞外域。它被表達在許多免疫細胞表面和相當比例的正常骨髓前體細胞上，該免疫細胞包括CD4和CD8陽性T細胞、B細胞、NK細胞、單核細胞、漿細胞(plasmacells)。在有些情況下，淋巴細胞中CD38的表達可能依賴于細胞的分化和激活狀態，例如，對CD38表達來說，休眠T和B細胞可呈陰性，而不成熟的和激活的淋巴細胞可明顯地呈陽性。已經在非造血器官中檢測到CD38mRNA表達，比如胰臟、大腦、脾臟和肝臟(Koguma,T.(1994)Biochim.Biophys.Acta1223:160)。CD38是參與跨膜信號和細胞粘附的多能胞外酶。它還被公知為循環ADP核糖水解酶，因為它能依賴細胞外pH將NAD+和NADP+轉化成cADPR、ADPR和NAADP。這些產物誘導細胞內的Ca2+-動員(Ca2+-mobilization)，這會導致酪氨酸磷酸化和細胞激活。CD38也是能與配體CD31相互作用的受體。通過CD31的受體激活導致細胞內事件，包括Ca2+-動員、細胞激活、增殖、分化和遷移。在T-和B-系急性淋巴細胞性白血病(T-andB-lineageacutelymphoblasticleukemias)、一些急性髓細胞性白血病(acutemyelocyticleukemias)、濾泡性中心細胞性淋巴瘤(follicularcentercelllymphomas)和T淋巴細胞性淋巴瘤的大多數情況下，CD38在多發性骨髓瘤細胞上被高水平表達。CD38還被表達在B-系慢性淋巴細胞性白血病(B-CLL)細胞上。在一些情況下，具有CD38+克隆的B-CLL病人的特點是不順利的較高階段疾病的臨床病程，對化學治療反應性差以及生存時間短。已經提議使用針對CD38的抗體治療CD38-表達癌癥和惡性血液病。因此，提供具有想要的制造、穩定性和免疫原性屬性的供選擇的針對CD38的抗體可能是有利的。已經描述了許多肽和多肽類配體通過與細胞表面的受體相互作用發揮其功能，由此刺激、抑制或另外調節生物應答，通常涉及具有所述受體的細胞內的信號傳導通路。這樣的配體的實施例包括肽和多肽類激素、細胞因子、趨化因子、生長因子和促細胞凋亡因子。由于這樣的配體的生物活性，許多具有作為治療劑的潛在用途。幾個肽或多肽類配體已經被管理機構批準作為治療產品，其包括，例如，人生長激素、胰島素、干擾素(IFN)-α2b、IFN-α2a、IFNβ、紅細胞生成素、G-CSF和GM-CSF。雖然這些和其他配體已經證明在治療應用中有潛能，但當向人類病人給予時它們也顯示出毒性。毒性的一個原因是大多數這些配體引發各種細胞上的受體，包括除介導想要的治療效果的那些細胞以外的細胞。配體的這樣的“脫靶(offtarget)”活性的后果是許多配體當前不適合用作治療試劑，因為該配體不能以足夠高的劑量給藥以在介導治療效果的靶細胞上產生最大或最佳治療效果。例如，從1980年代中期已經知道干擾素，尤其是，IFN-α能夠增加細胞凋亡并且減少某些癌細胞的增殖。已經被FDA批準的IFN-α用于治療幾種癌癥，包括黑色素瘤、腎細胞癌、B細胞淋巴瘤、多發性骨髓瘤、慢性骨髓性白血病(chronicmyelogenousleukemia)(CML)和毛細胞白血病。IFN-α對腫瘤細胞的直接效果是通過IFN-α直接結合這些細胞上的I類IFN受體并且刺激細胞凋亡、最終分化或降低的增殖所介導。IFN-α對非腫瘤細胞的進一步間接效果是刺激免疫系統，這可以通過引起免疫系統抵制腫瘤產生額外的抗癌效果。這些生物活性由癌細胞表面上的I類干擾素受體介導，當被刺激時，該受體啟動導致增殖減少和/或誘導最終分化或細胞凋亡的各種信號傳導通路。但是該I類干擾素受體也出現在大多數非癌細胞上。由IFN-α在非癌細胞上激活該受體引起大量促炎性細胞因子和趨化因子的表達，導致毒性和不良反應。這樣的毒性可引起嚴重的類似感冒的癥狀，這阻止了將IFN-α以對癌細胞發揮最大抗增殖和促凋亡活性的水平向個體配量。當IFN-α2b被用于治療多發性骨髓瘤時，其效用至少部分在于它結合到骨髓瘤細胞上的I類干擾素受體上，其反過來引發細胞凋亡和/或增殖降低，因此限制疾病進程。不幸的是，但是這個IFN還結合到體內的健康細胞上，引發各種其它細胞反應，有些反應是有害的。Ozzello的公開物(BreastCancerResearchandTreatment25:265-76,1993)描述了將人IFN-α化學偶聯到腫瘤-靶向抗體，由此將IFN-α的直接抑制活性定位到腫瘤，作為降低IFN-α腫瘤生長速率的方法，并且證明了這樣的偶聯物在人類癌癥的異種移植模型中具有抗腫瘤活性。觀察到的抗癌活性的機理歸因于IFN-α對腫瘤細胞的直接效果，因為實驗中使用的人IFN-α沒有明顯地與鼠I類IFN受體相互作用，這會導致間接抗腫瘤效果。因為沒有將人IFN-α結合到鼠細胞上，沒有評估抗體-IFN-α偶聯物相對于游離IFN-α的毒性。抗體和IFN-α也可以以融合蛋白的形式連接到一起。例如，WO01/97844描述了人IFN-α直接融合到對腫瘤抗原CD20特異的IgG的重鏈C-端上。通常，IFN可被靶向癌細胞。雖然這種方法可導致IFN針對癌細胞活性的增加，但是它沒有完全解決IFN對健康細胞的不想要的活性問題。將IFN-α融合到IgG的重鏈C端上可以延長IFN-α的半衰期，導致不想要的不利事件。因此需要減小基于配體的藥物的脫靶活性，同時保持這樣的配體的“靶向(on-target)”治療效果。
技術實現思路
本公開的特載新的抗-CD38抗體和包括抗-CD38抗體和致弱IFN-α的結構。包括它們重鏈和/輕鏈可變區的一個或多個突變的該抗體保持特異結合CD38的能力，包括在細胞表面上表達的CD38。該抗體可以融合到，例如，致弱形式的干擾素α以形成抗-CD38抗體-致弱干擾素融合結構。在一些方面，特異地結合CD38的分離的抗體包括包括氨基酸序列SEQIDNO:559的重鏈可變區，和包括氨基酸序列SEQIDNO:664的輕鏈可變區。在一些方面，特異地結合CD38的分離本文檔來自技高網...
【技術保護點】
特異地結合CD38的分離的抗體，其包括包括氨基酸序列SEQ?ID?NO:659的重鏈可變區和包括氨基酸序列SEQ?ID?NO:664的輕鏈可變區，但是重鏈可變區氨基酸序列排除氨基酸序列SEQ?ID?NO:13，并且輕鏈可變區氨基酸序列排除氨基酸序列SEQ?ID?NO:14。
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】1.一種抗-CD38抗體-致弱人干擾素α-2b融合蛋白，其包括特異地結合CD38并且包括重鏈可變區氨基酸序列SEQIDNO:156和輕鏈可變區氨基酸序列SEQIDNO:185的抗體，所述抗體融合到致弱人干擾素α-2b上，所述致弱人干擾素α-2b包括在對應于氨基酸序列SEQIDNO:648的位置145處的丙氨酸被甘氨酸或丙氨酸被天冬氨酸取代。2.根據權利要求1所述的蛋白，其中所述抗體包括人IgG1重鏈恒定區。3.根據權利要求1所述的蛋白，其中所述抗體包括人IgG4重鏈恒定區。4.根據權利要求3所述的蛋白，其中所述人IgG4重鏈恒定區包括根據EU編號體系在位置228處的脯氨酸。5.根據權利要求3所述的蛋白，其中所述人IgG4重鏈恒定區包括根據EU編號體系在所述恒定區的位置252處的酪氨酸、位置254處的蘇氨酸和位置256處的谷氨酸。6.根據權利要求4所述的蛋白，其中所述人IgG4重鏈恒定區包括根據EU編號體系在所述恒定區的位置252處的酪氨酸、位置254處的蘇氨酸和位置256處的谷氨酸。7.根據權利要求1到6任一項所述的蛋白，其中所述致弱人干擾素α-2b包括SEQIDNO:649的氨基酸序列。8.根據權利要求1到6任一項所述的蛋白，其中所述致弱人干擾素α-2b包括SEQIDNO:651的氨基酸序列。9.根據權利要求1到6任一項所述...
【專利技術屬性】
技術研發人員：亞當·克拉克，馬修·波拉德，安東尼·杰拉德·道爾，科萊特·貝倫斯，津田·山岸，小大衛·S·威爾遜，莎拉·L·波格，哲野·田浦，
申請(專利權)人：泰華制藥澳大利亞公司，
類型：發明
國別省市：澳大利亞;AU
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