本發(fā)明專利技術(shù)屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及溶瘤病毒載體ZD55攜帶并過表達(dá)人AChE基因在制備治療腫瘤制劑中的用途，本發(fā)明專利技術(shù)構(gòu)建的ZD55-hAChE進體內(nèi)外試驗證實，通過把hAChE基因?qū)氚┘?xì)胞內(nèi)讓細(xì)胞自身生產(chǎn)AChE(EC?1.1.7)酶蛋白，產(chǎn)生的AChE酶蛋白能提高癌細(xì)胞膜內(nèi)外微環(huán)境中的AChE濃度和活性，由此加速降價乙酰膽堿，從而發(fā)揮多途徑聯(lián)合抗癌效應(yīng)。如有效引起癌細(xì)胞和癌組織的升高的線粒體膜電位下降，下調(diào)關(guān)鍵凋亡因子前體的表達(dá)水平，上調(diào)裂解的PARP水平，導(dǎo)致核染色體濃縮或破碎；抑制癌細(xì)胞克隆和腫瘤干細(xì)胞生存能力，癌細(xì)胞凋亡,達(dá)到治療癌癥的目的。所述的腫瘤選自胃癌，食道癌，結(jié)腸癌，肝癌，胰腺癌或子宮頸癌。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及，尤其涉及溶瘤病毒載體ZD55攜帶并過表達(dá)人AChE (hAChE)基因在制備治療腫瘤制劑中的用途，所述的腫瘤選自胃癌，食道癌，結(jié)腸癌，肝癌，胰腺癌或子宮頸癌。
技術(shù)介紹
流行病學(xué)調(diào)查和實驗室研究證明自然界和人為制造的空氣食品污染，神經(jīng)毒，各種殺蟲劑,重金屬，物理,化學(xué),生物,藥物,社會,精神,情緒,心理等惡性刺激，以及酗酒抽煙，營養(yǎng)不良，營養(yǎng)不平衡，不良生活習(xí)慣，衰老，等等，都是癌癥和多種其他疾病的危險因素。這些危險因素同時也危害廣泛大量分布于人和動物體內(nèi)血，組織和細(xì)胞中的膽堿脂酶(ChE)包括乙酰膽堿脂酶(AChE)和假性膽堿脂酶(BChE)蛋白酶結(jié)構(gòu)，類型，和活性及其基因功能結(jié)構(gòu)的完整性。AChE的作用是極其快速地水解神經(jīng)源性和非神經(jīng)源性乙酰膽堿(Ach)，研究顯示，每分子AChE每秒鐘可以降解約25，000分子的Ach接近于彌漫底物的程度；由于人體血和受累組織細(xì)胞中的AChE蛋白及其基因逐漸被危險因素抑制破壞，組織細(xì)胞為了存活就釋放過量乙酰膽堿(Ach),功能和結(jié)構(gòu)受損的AChE無法快速充分水解Ach,導(dǎo)致AChE和Ach平衡失調(diào)，Ach在受累組織細(xì)胞內(nèi)外過剩。通常，業(yè)內(nèi)認(rèn)為Ach只是一種神經(jīng)介質(zhì)，主要存在于神經(jīng)組織和神經(jīng)肌肉接頭處，近年來非神經(jīng)性的ACh已經(jīng)被證實存在，幾乎分布于每個細(xì)胞，屬于體內(nèi)自分泌旁分泌激素，具有強大的促生長和求生存作用。研究證實煙草中的尼古丁和其他有害成分具有Ach作用并可以強烈刺激Ach分泌。過剩的Ach能異常激活廣泛分布在細(xì)胞膜上的Ach受體，鈣，鉀通道，cAMP, cGMP等一系列第二信號系統(tǒng)及其因子，達(dá)到刺激癌細(xì)胞生長和轉(zhuǎn)移。近年來Ach濃度和/或Ach合成酶，輸送酶及其mRNA表達(dá)水平在人和/或?qū)嶒炇业姆危危Y(jié)腸腫瘤細(xì)胞，組織，腫瘤動物模型中證實是顯著升高的，而hAchE/hBChE基因和/或mRNA表達(dá)改變，酶活性水平明顯下降，酶蛋白型，酶糖化型，等等多種改變在惡性實體瘤包括長在腦(腦膜瘤，腦膠質(zhì)瘤)，呼吸道(多種肺癌)，消化道(食道，胃，腸，肝，胰腺)，生殖泌尿系統(tǒng)(腎，膀胱，宮頸，卵巢，乳房，前列腺)，皮膚，軟組織，和血液系統(tǒng)腫瘤(白血病，淋巴細(xì)胞腫瘤等等)均有報道。平衡失調(diào)的AChE和Ach系統(tǒng)可引起受累組織細(xì)胞的代謝，信號傳導(dǎo)，細(xì)胞周期，凋亡，染色體和其基因等的正常調(diào)控失調(diào)，導(dǎo)致正常細(xì)胞慢慢轉(zhuǎn)化成癌細(xì)胞和癌組織并生長轉(zhuǎn)移最后奪取生命。本申請的專利技術(shù)人于2008年在國際首次以醫(yī)學(xué)假說形式提出了有關(guān)AChE和Ach上游平衡失調(diào)引起疾病以及用補充AChE/BChE來預(yù)防和治療疾病的認(rèn)知。目前主流科學(xué)人員仍然側(cè)重對受體及其激動劑和拮抗劑對疾病治療的研究。有研究在2012年報道了有關(guān)2例非病毒載體攜帶AChE基因質(zhì)粒在裸鼠皮下肝癌的動物模型。用溶瘤病毒ZD55作為攜帶和過表達(dá)hAChE基因質(zhì)粒目前在國際上尚未見報道。與本專利技術(shù)有關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)有下述參考文獻:1.Shen，ZX.Rat1nale for diagnosing deficiency of ChEs and for applyingexogenous HuChEs to thetreatment of diseases.(2008)Medical Hypotheses70: (1)43-51.2.Greenstein, J.P.B1logy of cancer，Academic Press, New YorkCity, (1947).3.Greenstein, J.P.Enzymology of cancer, J.Nat1nal Cancer Institute，(1943)p419-447.4.Kaufer，D，F(xiàn)riedman，A，Seidman，S，Soreq，H.Acute stressfacilitates long-lasting changes in cholinergic gene express1n.Nature (1998)393(6683)373-7.5.Soreq H，Lapidot-Lifson Y,Zakut H.A role for cholinesterases intumorigenesis ? (1991)Cancer Cells 3:511-6.6.Calaf GM，Parra E,Garrido F.Cell proliferat1n and tumor format1ninduced by eserine，an acetylcholinesterase inhibitor,in rat mammary gland.(2007)Oncol Rep.; 17⑴:25-33.7.Lai, A，Ames, B.N.Associat1n of chromosome damage detected asmicronuclei with hematological diseases and micronutrient status.(2011)Mutagenesis.26(1):57-62.8.http://en.wikipedia.0rg/wiki/Acetylcholinesterase9.SchullerHM:1scancertriggeredbyalteredsignalingofnicotinicacetylcholine receptors ? (2009)NatRevCancer9:195-205.10.Song, P.Sekhon，H.S.Fu，X.ff.et al.，Activated cholinergic signalingprovides a target in squamous cell lung carcinoma.(2008)Cancer Res68(12):4693-70011.Lau，J.K.，Brown, K.C.，Thornhill, B.A.，et al.，Inhibit1n of cholinergicsignaling causes apoptosis in human bronch1alveolar carcinoma.(2013)CancerRes 73(4):1328-39.12.Montenegro，M.F.，Nieto-Ceron，S.，Ruiz-Espejo，F(xiàn).，et al.，Cholinesteraseactivityandenzymecomponents inhealthyandcanceroushumancolorectalsect1ns.(2005)ChemB1lInteract 157-158:429-430.13.Xie, G.，Cheng, K.，Shant，J.，Raufman，J.P.Acetyl c ho line-1n ducedactivat1n of M3 muscarinic receptors stimulates robust matrixmetalloproteinase gene express1n in human colon cancer cells.(2009)Am JPhys1lGastrointest liver 本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
攜帶人AChE基因的溶瘤病毒載體ZD551，其特征在于，通過下述方法構(gòu)建包裝，a)用AChE基因正向引物5’?ATCGAAGCTTATGAGGCCCCCGCAGT?3’和反向引物5’?GTACTCTAGATCACAGGTCTGAGCAGC?3’經(jīng)PCR擴增；b)PCR所得片段用HindIII和XbaI切割后插入到pCA13竄梭質(zhì)粒形成pCA13?AChE；c)在pCA13?hAChE的CMV?AChE?SV40用BglII切割后插入到pZD55竄梭質(zhì)粒，產(chǎn)生pZD55?hAChE。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：沈正萱，劉新垣，朱依諄，
申請(專利權(quán))人：復(fù)旦大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：上海;31
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