EGFR抗體綴合物制造技術(shù)

將美登素類通過不可切割的接頭與作為完全EGFR拮抗物的EGFR抗體，諸如西妥昔單抗或帕尼單抗共價連接。結(jié)果獲得具有在癌細胞中增強但在正常細胞中不增強的細胞毒性的抗癌劑。在作為部分拮抗物的EGFR抗體中或未被溶酶體加工的毒素中沒有觀察到這種益處。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】【專利說明】EGFR抗體綴合物 專利
本專利技術(shù)涉及一種免疫綴合物，其靶向表達EGFR的癌細胞群體并包括與微管損傷劑 諸如美登素類(maytansinoid)綴合的抗EGFR抗體，諸如帕尼單抗(panitumumab)或西妥昔 單抗（cetuximab) 〇 專利技術(shù)背景 細胞結(jié)合蛋白（諸如抗體)與有效的細胞殺傷劑的綴合增強它們的抗癌活性，并提 供所謂的"魔術(shù)子彈(magic bullets)"，具有混合的臨床結(jié)果。 相對于裸露抗體，免疫綴合物通常顯示增強的細胞殺傷功效，這增加它們抗擊表 達抗體靶向抗原的癌細胞的活性。但是，在表達相同抗原的正常細胞中也觀察到功效的相 同增加。特別關(guān)注的是增加的抗快速增殖組織(諸如皮膚)的細胞毒性。例如，由美登素類和 CD44v6抗體組成的CD44v6靶向免疫綴合物非常活躍的抗擊癌細胞，但因為嚴重的皮膚毒性 (諸如毒性表皮壞死溶解，其作為增強免疫綴合物抗擊也表達CD44v6的皮膚細胞的活性的 結(jié)果而發(fā)生（Tijinket al. ,Clin Cancer Res,2006,12:6064))而被中止。 另一種細胞表面蛋白，表皮生長因子受體或EGFR，是開發(fā)抗癌免疫綴合物的有吸 引力的靶標，因為許多腫瘤表達該抗原及其快速的內(nèi)化。但是，因為皮膚組織也表達EGFR， EGFR靶向藥劑，諸如抗體西妥昔單抗和帕尼單抗，也顯示皮膚毒性水平，這或者要求劑量降 低或者在一些情況下是如此嚴重導致治療的中止。 通過免疫綴合物，這些抗體的毒性利用綴合有效的細胞毒素得到擴大。這加劇了 對正常細胞已經(jīng)具有固有毒性的抗體的問題。例如，當通過CD44v6抗體遞送時，與毒性美登 素類的綴合造成嚴重的針對皮膚細胞的毒性。因此由于對這類免疫綴合物增強的皮膚毒性 的顧慮，還沒有進行基于批準的抗EGFR抗體的抗EGFR免疫綴合物的開發(fā)。正在使用其他策 略來開發(fā)抗EGFR免疫綴合物。 現(xiàn)在正在設計抗EGFR免疫綴合物來專門解決這些安全性顧慮。這些綴合物基于針 對EGFR的突變但天然存在的形式(稱為EGFRvIII)或EGFR的構(gòu)象形式的抗體，這兩種都在腫 瘤細胞而非皮膚細胞上占優(yōu)勢（分別見US7628986和US 7589180)。例如，抗EGFR抗體MAb806 是革El向只在癌細胞上發(fā)現(xiàn)的EGFR表位的抗體，有可能提供超過現(xiàn)有EGFR抗體的優(yōu)點，這些 現(xiàn)有EGFR抗體對正常器官諸如人的皮膚都顯示顯著的結(jié)合。關(guān)于這種特異性，應該意識到 "與現(xiàn)有EGFR抗體相比MAb 806最重要的優(yōu)點是MAb 806可以直接綴合到細胞毒性劑"，該方 法不適用于其他EGFR抗體，因為"細胞毒性綴合幾乎是必然誘導嚴重的毒性"（US 7589180)。包括與抗微管負載連接的EGFR MAb 806的免疫綴合物目前正處于晚期實體瘤患 者的臨床I期試驗中。 還在嘗試篩選裸露抗EGFR抗體及其免疫綴合物，以鑒定具有抗EGFR的部分拮抗活 性和降低的抗角質(zhì)形成細胞活性的那些抗體(參見US2012/0156217)，基于"掩蔽"的抗EGFR 抗體(其優(yōu)先在腫瘤微環(huán)境中活化）的免疫偶聯(lián)物(W0 2009/025846)，和基于中等親和力的 抗體(其優(yōu)先在腫瘤而非正常組織中積聚）的免疫綴合物(W0 2012/100346)。所有這些策略 的目的在于降低針對皮膚和表達EGFR的其他器官的毒性，因為目前批準的抗EGFR抗體被認 為不適合開發(fā)成免疫綴合物。 本專利技術(shù)的目的是提供一種用于治療EGFR+疾病細胞包括EGFR+癌細胞和包括它們 的腫瘤的免疫綴合物。本專利技術(shù)的另一個目的是提供一種選擇性增強EGFR抗體針對疾病細胞 的細胞毒性的方法。通過這種方法，基本上避免了針對正常細胞的毒性的增強。 專利技術(shù)概述本專利技術(shù)源自以下預料不到的最初發(fā)現(xiàn):抗EGFR抗體西妥昔單抗與毒性美登素類通 過不可切割的接頭的綴合產(chǎn)生一種免疫綴合物，其顯示增強的抗癌細胞的細胞毒性而抗皮 膚細胞的細胞毒性沒有相應增加。本專利技術(shù)人證明，一些抗EGFR抗體針對癌癥和角質(zhì)形成細 胞的活性通過連接美登素類和其他細胞殺傷劑而顯著增強，但是美登素類綴合的西妥昔單 抗的活性只針對癌細胞但不針對角質(zhì)形成細胞增強。在這些研究中發(fā)現(xiàn)，與預期一致，西妥 昔單抗與除抗微管毒素以外的細胞殺傷劑(諸如皂草素）的綴合具有伴隨的和顯著增強的 針對角質(zhì)形成細胞的毒性。 還證明另一種具有針對EGFR的完全拮抗物活性的抗體，即帕尼單抗，當與抗微管 負載諸如美登素類綴合時，也顯示針對EGFR+細胞的選擇性增強，顯示對EGFR+癌細胞的毒 性而不影響EGFR+正常細胞諸如角質(zhì)形成細胞。 基于本專利技術(shù)公開的這些和其他發(fā)現(xiàn)，本專利技術(shù)能夠篩選產(chǎn)生免疫綴合物必需的組 分，所述免疫綴合物包括EGFR抗體和毒性負載，所述毒性負載增強針對癌細胞但不針對正 常細胞諸如角質(zhì)形成細胞的抗體活性。具有所述特性的免疫綴合物要求篩選作為完全拮抗 物的EGFR抗體，作為抗微管物質(zhì)的毒素，和最優(yōu)選不可切割的接頭。通過使用這些標準，提 供一種基于EGFR抗體的免疫綴合物，其具有顯著的抗EGFR+癌細胞的治療活性，但抗EGFR+ 正常細胞包括皮膚細胞諸如角質(zhì)形成細胞的毒性沒有相應增加。缺乏抗皮膚細胞的毒性的 額外增強是至關(guān)重要的，因為裸露EGFR靶向抗體的特征在于高發(fā)生率的皮膚毒性，不增強 這些副作用是有益的。 因此，在一個一般方面，提供一種免疫綴合物，包括具有對EGFR的完全拮抗物活性 的抗體和與其通過不可切割接頭綴合的毒素，所述免疫綴合物相對于裸露形式的抗體具有 對EGFR+角質(zhì)形成細胞基本上未增強的細胞毒性作用。所述免疫綴合物對EGFR+癌細胞的細 胞毒性作用期望是增強的。毒性負載期望是抗微管毒素。 在另一個一般方面，提供一種用于增強EGFR抗體的抗癌活性但不增強其對正常 EGFR+細胞的作用的方法，所述方法包括： (i)選擇用于綴合EGFR抗體，所述抗體是完全EGFR拮抗物并與西妥昔單抗競爭結(jié) 合EGFR; (i i)選擇通過EGFR抗體遞送的抗微管毒素； (iii)選擇用于偶聯(lián)所選EGFR抗體和抗微管毒素的接頭;和 產(chǎn)生一種免疫綴合物，其在抗體和毒素之間摻入接頭，從而提供具有細胞毒性的 免疫綴合物，所述細胞毒性針對EGFR+疾病細胞增強，但針對正常EGFR+角質(zhì)形成細胞基本 上不增強。 在一個具體方面，提供一種包括西妥昔單抗和與其綴合的毒素的免疫綴合物，所 述免疫綴合物相對于裸露西妥昔單抗具有細胞毒性作用，所述細胞毒性作用（1)針對EGFR+ 癌細胞增強，和（2)針對EGFR+角質(zhì)形成細胞基本上未增強，其中所述免疫綴合物包括西妥 昔單抗和通過不可切割接頭綴合的抗微管毒素諸如美登素類DM-I。在選擇性實施方案中， 西妥昔單抗是西妥昔單抗的等同物，諸如西妥昔單抗的EGFR結(jié)合片段，或西妥昔單抗的 EGFR結(jié)合變體，其在抗體恒定區(qū)或框架區(qū)摻入1個或2個或更多個良性取代，但不影響抗體 與受體的結(jié)合或抗體綴合介導的細胞殺傷。例如，可以使用標準方法將嵌合的西妥昔單抗 進一步人源化以產(chǎn)生更像人形式的抗體。可選的，通過對人Fab文庫篩選可以結(jié)合并強烈抑 制EGFR和與西妥昔單抗競爭受體結(jié)合的抗體，開發(fā)出完整的人抗EGFR抗體，諸如 necitumumab，也稱為IM本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種用于增強EGFR抗體或其EGFR結(jié)合片段對EGFR+疾病細胞的細胞毒性但不增強其對正常EGFR+細胞的細胞毒性的方法，所述方法包括：(i)選擇用于綴合的EGFR抗體，或所述抗體的EGFR結(jié)合片段，所述抗體是完全EGFR拮抗物并與西妥昔單抗競爭結(jié)合EGFR；(ii)選擇通過EGFR抗體或其片段遞送的抗微管毒素；(iii)選擇用于偶聯(lián)所選EGFR抗體和抗微管毒素的接頭；和產(chǎn)生一種免疫綴合物，其在抗體和毒素之間摻入接頭，從而提供具有細胞毒性的免疫綴合物，所述細胞毒性針對EGFR+疾病細胞增強，但針對EGFR+角質(zhì)形成細胞基本上不增強。

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：I·A·蒂霍米羅夫，
申請(專利權(quán))人：形成生物產(chǎn)品有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：加拿大;CA