一種苦杏仁苷的制備方法技術

本發明專利技術公開了一種D-苦杏仁苷和/或L-苦杏仁苷的制備方法，采用從桃仁或苦杏仁中提取苦杏仁苷，用有機溶劑萃取，采用色譜分離D-苦杏仁苷和L-苦杏仁苷異構體并檢測兩種異構體的純度，核磁共振檢測兩種異構體的結構。本發明專利技術通過使用反向色譜技術，并結合NMR技術，真正實現了高精度地分離制備苦杏仁苷的D-苦杏仁苷或L-苦杏仁苷任意一種差向異構體。本發明專利技術不僅分離操作工藝簡單易操作易重復，分離周期短，效率高；而且成本低，環境友好，適合大規模工業化生產；并且制備的D-苦杏仁苷和L-苦杏仁苷的純度和收率較高。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及，尤其涉及一種D-苦杏仁苷或L-苦杏仁苷的 制備方法。
技術介紹
苦杏仁苷是苦杏仁的一種主要成分，具有鎮咳平喘，抗腫瘤降血壓以及抗凝血等 作用，已經作為祛痰止咳，輔助性抗癌藥物廣泛用于醫藥領域;此外它還對氣滯，腸燥便秘， 水腫脹滿等病癥具有良好的臨床治療效果。目前用來制備苦杏仁苷的方法主要是采用水提取法，乙醇回流法，超聲波提取法， 以及樹脂分離純化等工藝。盡管已有報道對上述工藝進行了改進并研究了其最佳條件，以 制得純度或收率較高的苦杏仁苷，例如，對苦杏仁苷的分離提取采用"滅酶保苷"的工藝以 防止苦杏仁中的苦杏仁苷酶將苦杏仁苷水解;采用不同的溶劑以及不同濃度和用量以提高 苦杏仁苷的純度和收率。但是，根據以上方法制備的苦杏仁苷中均存在不同程度的D-苦杏仁苷 (Amygdalin)和L-苦杏仁苷(Neoamygdalin)差向異構體(見圖13A和圖13B)(吳軍等從補陽 還五湯水煎液的正丁醇萃取部分分離得到苦杏仁苷，發現其為一對D、L差向異構體KD-苦 杏仁苷是一種重要的氰苷類化合物，具有前述苦杏仁苷的祛痰鎮咳等功效，主要存在于中 藥桃仁和杏仁中。L-苦杏仁苷可能具有與D-苦杏仁苷完全不同的藥理活性，已有研究報道 L-苦杏仁苷對癌癥治療無效，說明該差向異構體的存在影響了苦杏仁苷藥物的療效;并且 苦杏仁藥對配伍配比時，兩個異構體，隨配伍的不同而發生變化，說明該差向異構體在中藥 配伍規律和作用機制的方面具有研究意義。目前尚沒有單獨制備D-苦杏仁苷或L-苦杏仁苷差向異構體的方法，從而大大限制 了苦杏仁藥物后期的深入研究。因此，如何分別制備藥物級高純度高收率的D-苦杏仁苷和 L-苦杏仁苷，實現易操作低成本的大規模制備，已成為本領域面臨的問題。
技術實現思路
為解決現有存在的以上技術問題，本專利技術目的在于提供一種苦杏仁苷的制備方 法。 本專利技術提供的一種制備D-苦杏仁苷和/或L-苦杏仁苷的方法，包括如下步驟：1，提取:在桃仁或苦杏仁中加水，煮沸進行提取，并濃縮，得到粗提物；2，萃取:對粗提物用有機溶劑進行萃取，并濃縮得到萃取物； 3，對于萃取物，利用反向色譜分離L-苦杏仁苷和/或D-苦杏仁苷并檢測純度;色譜 觀察到峰值時進行洗脫，接收，濃縮，結晶，過濾。其中，步驟1所述桃仁或苦杏仁的量為20克~2千克，所述水的量為桃仁或苦杏仁 的5~8倍量(w/w);所述煮沸進行提取的時間為1~2小時，并重復提取2~3次合并提取液， 優選的，所述煮沸進行提取的時間為2小時，重復提取3次;所述濃縮為減壓濃縮。通過步驟1 從而能夠簡單快速地獲得苦杏仁苷的粗提物。其中，步驟2所述萃取為用乙酸乙酯萃取2~3次，優選的，為萃取3次;再用正丁醇 萃取3次;所述乙酸乙酯萃取的體積比為1:1，所述正丁醇萃取的體積比為1:1，所述濃縮為 減壓濃縮。通過步驟2從而能夠獲得苦杏仁苷的萃取物進而用于異構體分離步驟。其中，步驟3所述反向色譜分離的條件為:Ci8色譜柱:50mm*250mm，ΙΟμL?，檢測波長： 210nm，流動相：（質量百分比）11%~15%乙腈-(質量百分比）0.2~0.5%甲酸水，流速： 30ml/min~100ml/min，柱溫:室溫，pH值:2.0-5.0，進樣量：2000-5000yL;所述色譜分離包 括觀察色譜圖中L-苦杏仁苷與D-苦杏仁苷的峰時進行洗脫，共運行40~60分鐘，并接收L-苦杏仁苷和/或D-苦杏仁苷洗脫液;其中，優選的，所述流動相為15 %乙腈-0.5 %甲酸水，所 述流速 30ml/min，pH值:2.0，進樣量:2000yL。其中，步驟3所述的濃縮為減壓濃縮，所述結晶為二氯甲烷甲醇重結晶，所述過濾 為抽濾。步驟3在特定的色譜條件下從而高效穩定并且直觀地對異構體L-苦杏仁苷和/或D-苦杏仁苷進行分離，進而提純獲得高純度的單一異構體。進一步地，可以采用核磁共振的方式檢測L-苦杏仁苷和/或D-苦杏仁苷的結構。其 中，所述的核磁共振為氫譜(h-NMR)和碳譜（13C-NMR)，通過NMR對L-苦杏仁苷和/或D-苦杏 仁苷異構體的結構進行檢測并確認。本專利技術所述方法通過使用動態軸向壓縮色譜制備技術，并結合NMR技術，真正實現 了高精度地分離制備苦杏仁苷的D-苦杏仁苷或L-苦杏仁苷任意一種差向異構體。不僅分離 操作工藝簡單易操作易重復，分離周期短，效率高;而且成本低，環境友好，適合大規模工業 化生產；并且制備的D-苦杏仁苷和L-型苦杏仁苷均比較穩定，并且純度較高（純度可高達 98%以上），這將為后期苦杏仁苷的深入研究提供有效的技術支持。【附圖說明】圖1為本專利技術實施例1之L-苦杏仁苷HPLC圖譜；圖2為本專利技術實施例1之D-苦杏仁苷HPLC圖譜； 圖3為本專利技術實施例1之D-苦杏仁苷核磁共振碳譜； 圖4為本專利技術實施例1之D-苦杏仁苷核磁共振氫譜；圖5為本專利技術實施例1之L-苦杏仁苷核磁共振碳譜；圖6為本專利技術實施例1之L-苦杏仁苷核磁共振氫譜；圖7為本專利技術實施例2之L-苦杏仁苷HPLC圖譜；圖8為本專利技術實施例2之D-苦杏仁苷HPLC圖譜；圖9為本專利技術實施例2之D-苦杏仁苷核磁共振碳譜；圖10為本專利技術實施例2之D-苦杏仁苷核磁共振氫譜；圖11為本專利技術實施例2之L-苦杏仁苷核磁共振碳譜；圖12為本專利技術實施例2之L-苦杏仁苷核磁共振氫譜；圖13A為本專利技術之D-苦杏仁苷結構式；圖13B為本專利技術之L-苦杏仁苷結構式?！揪唧w實施方式】 以下結合具體實施例對本專利技術做進一步說明，但本專利技術并不限于以下實施例。下 述實施例涉及的方法如無特別說明，均為常規方法。本專利技術所述方法先采取水煮提取獲得粗提物、再醇提獲得萃取物，然后再通過利 用反向色譜技術(HPLC)分離出L-苦杏仁苷和/或D-苦杏仁苷，并利用核磁共振技術(NMR)進 行結構確認。以下的實施例，給出了具體的做法。 實施例1 1，提取，將20克苦杏仁(市售品）加入5倍量的水，煮沸進行提取1小時，重復2次，合 并提取液，并進行減壓濃縮，得到苦杏仁苷粗提物。 2,萃取，用乙酸乙酯以體積比為1:1的比例萃取步驟1所得粗提物，重復2次，然后 用正丁醇以體積比1:1的比例萃取3次。收集正丁醇萃取液，減壓濃縮得到苦杏仁苷萃取物。 3，動態軸向壓縮反向色譜分離(DAC-HB80江蘇漢邦科技有限公司）。取上述萃取物 用壓縮色譜進行分離，使用Ci8色譜柱(250mmX50mm，10ym)，以質量百分比15%乙腈-0.5% 甲酸水為流動相進行洗脫，流速:30ml/min，柱溫：室溫，pH值：2.0，檢測波長:210nm，進樣 量：2000yL。觀察色譜圖中出現L-苦杏仁苷峰和D-苦杏仁苷峰時進行洗脫(共運行約50分 鐘，在約42.5~43.8分鐘為L-苦杏仁苷的色譜峰，44.0~46.5分鐘為D-苦杏仁苷色譜峰）， 并接收L-苦杏仁苷和/或D-苦杏仁苷洗脫液(見圖1和2)。圖1為L-苦杏仁苷的HPLC圖譜；圖2 為D-苦杏仁苷的HPLC圖譜。純度檢測。將洗脫組分進行減壓濃縮，二氯甲烷甲醇重結晶，抽濾，分別得D-苦杏 仁苷粉末500mg(純度98.5 % )和L-苦杏仁苷粉末1OOmg(純度98.2 % )。 4,核磁共振氫譜（4-匪R)和核磁共振碳譜（13C_匪R)檢測。將收集的洗脫液進本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種苦杏仁苷異構體的制備方法，包括如下步驟：在桃仁或苦杏仁中加水，煮沸進行提取，并濃縮，得到粗提物；對粗提物進行萃取，用有機溶劑進行萃取，并濃縮，得到萃取物；對萃取物通過反向色譜分離L?苦杏仁苷和/或D?苦杏仁苷異構體并檢測純度，色譜觀察到峰值時進行洗脫，接收，濃縮，結晶，過濾。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：蕭偉，謝雪，宋亞玲，溫建輝，趙祎武，王雪晶，羅鑫，倪付勇，黃文哲，王振中，
申請(專利權)人：江蘇康緣藥業股份有限公司，
類型：發明
國別省市：江蘇;32