一種毛葉鐵線蕨的組培繁殖方法技術

本發明專利技術公開了一種毛葉鐵線蕨的組培繁殖方法，首先收集毛葉鐵線蕨孢子，進行消毒；然后將毛葉鐵線蕨孢子用無菌水配成懸浮液，加入到孢子萌發培養基中，培養7～15d后開始萌發，發育成片狀原葉體；之后將片狀原葉體轉接至增殖培養基中培養25~35d，再轉入孢子體誘導培養基中培養30~40d，形成幼孢子體；最后將幼孢子體團分離成單株幼孢子體或具4～5株幼孢子體的小叢，與多菌靈消毒液混合，然后將混合液均勻倒入土壤基質中培養。本發明專利技術無需孢子體繼代培養和生根培養兩個階段，縮短了培養周期，從孢子萌發到幼孢子體形成只需90d左右；短時間內獲得大量毛葉鐵線蕨種苗，且煉苗和移栽同步進行，幼孢子體苗成活率可達100%。

【技術實現步驟摘要】
一種毛葉鐵線蕨的組培繁殖方法
本專利技術涉及蕨類植物的繁殖方法，具體是一種毛葉鐵線蕨的組培繁殖方法。
技術介紹
鐵線蕨屬（Adiantum）植物有200多種，主要分布于熱帶和溫帶。此屬植物中許多具有較高的觀賞價值，其性耐陰，可作庭園綠化陰濕處點綴，也可作室內切葉或盆栽觀賞，毛葉鐵線蕨為其中一種，其高約20～40cm，葉簇生，葉柄深栗色，有光澤，密被棕色長柔毛，頂端分裂成2枝以上，小葉暗綠色，新葉黃綠色至淺紅色，四季常綠，耐陰性極強，可在立體綠化背陰面及室內綠化應用，具有良好的市場開發價值。目前關于鐵線蕨屬植物繁殖的研究多見于鐵線蕨、扇葉鐵線蕨以及荷葉鐵線蕨，未見關于毛葉鐵線蕨組培繁殖的研究。而組培繁殖是蕨類生產的主要途徑，其具有不受季節限制，繁殖速度快、數量巨大的優勢，許多鐵線蕨屬植物的孢子離體培養研究只能獲得大量原葉體，難以獲得幼孢子體。因此，建立毛葉鐵線蕨的組培繁育技術體系將有助于規模化生產，以促進其在園林綠化中的廣泛應用。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種能簡易快速繁殖毛葉鐵線蕨的方法。為達到上述目的，本專利技術采用以下技術方案：一種毛葉鐵線蕨的組培繁殖方法，所述方法包括以下步驟：S1、收集毛葉鐵線蕨孢子，進行消毒；S2、毛葉鐵線蕨孢子用無菌水配成懸浮液，加入到孢子萌發培養基中，培養25～35d，孢子萌發并發育成片狀原葉體；S3、將片狀原葉體轉接至增殖培養基中培養25~35d，再轉入孢子體誘導培養基中培養30~40d，形成幼孢子體；S4、將幼孢子體團分離成單株幼孢子體或具4～5株幼孢子體的小叢，與多菌靈消毒液混合，然后將混合液均勻倒入土壤基質中培養。進一步地，所述步驟S1的消毒具體為：將毛葉鐵線蕨孢子用濾紙包好，在無菌水里浸泡3～5min，再在升汞溶液中浸泡3～4min，最后用無菌水漂洗干凈。進一步地，所述孢子萌發培養基每升含6～7g瓊脂、20～25g蔗糖，其余為MS或Knop培養基，pH為5.8～6.0。進一步地，所述步驟S2、S3的培養條件都是：溫度25～30℃，光照強度2000～2500lx，光照時間12h/d。進一步地，所述增殖培養基每升含0.2～1mg6-BA、0.1～0.5mgNAA、6～7g瓊脂、20～25g蔗糖，其余為MS培養基，pH為5.8～6.0。6-BA是6-芐基腺嘌呤，NAA是萘乙酸。進一步地，所述孢子體誘導培養基每升含6～7g瓊脂、20～25g蔗糖，其余為MS培養基，pH為5.8～6.0。進一步地，所述土壤基質由泥炭土、珍珠巖和蛭石按體積比1：1：1混合得到。進一步地，所述步驟S4的混合液為每200mL濃度為0.1wt%的多菌靈消毒溶液中含2塊幼孢子體團的分離物。可以按照以下步驟繁殖毛葉鐵線蕨：（1）孢子采集及消毒處理：收集毛葉鐵線蕨孢子用濾紙包好，在無菌水里浸泡3～5min，再在1g/L升汞溶液中浸泡3～4min，最后用無菌水漂洗干凈，最好漂洗4~5次，備用；（2）孢子接種及誘導萌發：消毒過的毛葉鐵線蕨孢子用無菌水配成懸浮液，加入到孢子萌發培養基中，培養25～35d后，孢子萌發，并從綠色絲狀體再發育成大約0.3~0.4cm的片狀原葉體；培養條件是：溫度為25～30℃，光照強度2000～2500lx，光照時間12h/d；孢子萌發培養基每升含6～7g瓊脂、20～25g蔗糖，其余為MS或Knop培養基，pH為5.8～6.0；（3）原葉體增殖培養：將片狀原葉體轉接至增殖培養基中培養25~35d，所得增殖原葉體團直徑為1cm左右；培養條件是：溫度為25～30℃，光照強度2000～2500lx，光照時間12h/d；所述增殖培養基每升含0.2～1mg6-BA、0.1～0.5mgNAA、6～7g瓊脂、20～25g蔗糖，其余為MS培養基，pH為5.8～6.0；（4）幼孢子體誘導：將增殖原葉體轉入孢子體誘導培養基中培養30~40d，形成幼孢子體，且生長1～3片幼孢子葉；培養條件是：溫度為25～30℃，光照強度2000～2500lx，光照時間12h/d；所述孢子體誘導培養基每升含6～7g瓊脂，20～25g蔗糖，其余為MS培養基，pH為5.8～6.0；（5）組培苗移栽管理：將幼孢子體團從瓶內取出，分離成單株幼孢子體或具4～5株幼孢子體的小叢，與多菌靈消毒液混合，混合液為每200mL濃度為0.1wt%的多菌靈消毒溶液中含2塊1～1.5cm幼孢子體團的分離物，然后將混合液均勻倒入土壤基質中培養，并覆蓋薄膜保濕，栽植后15d內保持覆膜，以后可打開薄膜透氣，30d后可完全揭開薄膜，但每天噴霧保濕；土壤基質由泥炭土、珍珠巖和蛭石按體積比1：1：1混合得到，并用0.1wt%多菌靈消毒液澆透。本專利技術具有以下有益效果：本專利技術通過將消毒過的毛葉鐵線蕨孢子在孢子萌發培養基中進行培養得到片狀原葉體，然后將片狀原葉體在增殖培養基中進行激素刺激誘導，再轉回不含激素的孢子體誘導培養基中培養，即可獲得大量幼孢子體苗，隨后出瓶移植。全過程只需要轉接兩次，無需孢子體繼代培養和生根培養兩個階段，縮短了培養周期，從孢子萌發到幼孢子體形成只需90d左右；本專利技術投入少，培養基成分簡單，短時間內獲得大量毛葉鐵線蕨種苗，且煉苗和移栽同步進行，幼孢子體苗成活率可達100%，可使毛葉鐵線蕨成為優良觀葉植物。具體實施方式下面結合具體實施例對本專利技術做進一步的說明：以下實施例所用MS培養基，1L培養基里包含NH4NO31650mg，KNO31900mg，KH2PO4170mg，MgSO4·7H2O370mg，CaCl2·2H2O440mg，MnSO4·4H2O22.3mg，ZnSO4·7H2O8.6mg，H3BO36.2mg，KI0.83mg，Na2MoO4·2H2O0.25mg，CuSO4·5H2O0.025mg，CoCl2·6H2O0.025mg，FeSO4·7H2O27.8mg，Na2EDTA37.3mg，甘氨酸2mg，VB10.4mg，VB60.5mg，煙酸0.5mg，肌醇100mg。所用Knop培養基，1L培養基里包含KNO3125mg，KH2PO4125mg，MgSO4·7H2O125mg，Ca（NO3）2·4H2O500mg。實施例1按照以下步驟繁殖毛葉鐵線蕨：（1）孢子采集及消毒處理：當毛葉鐵線蕨的孢子囊開始呈現褐色，將其孢子葉剪下，于室內陰晾，待孢子散落收集待用。收集毛葉鐵線蕨孢子用濾紙包好，在超凈工作臺上用無菌水里浸泡3min，再在1g/L升汞溶液中浸泡3min，最后用無菌水漂洗4次，備用。（2）孢子接種及誘導萌發：將MS培養基、6g瓊脂和20g蔗糖配制成pH5.8～6.0的孢子萌發培養基1L，分裝至200mL培養瓶中，每瓶約加入培養基20mL，室溫冷卻后待用。將消毒過的毛葉鐵線蕨孢子用無菌水配成懸浮液，用無菌的移液槍吸取1mL加入到準備好的培養瓶中，輕微晃動培養瓶，使孢子均勻分布在萌發培養基上。培養條件是：溫度為25～30℃，光照強度2000～2500lx，光照時間12h/d。培養7d后孢子開始萌發，培養基顯綠，孢子形成綠色絲狀體，培養30d后從綠色絲狀體發育成致密的、大約0.3~0.4cm的片狀原葉體。（3）原葉體增殖培養：將MS培養基、6g瓊脂、20g蔗糖、0.2mg6-BA、0.1mgNAA配制成pH5.8～6本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種毛葉鐵線蕨的組培繁殖方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：S1、收集毛葉鐵線蕨孢子，進行消毒；S2、毛葉鐵線蕨孢子用無菌水配成懸浮液，加入到孢子萌發培養基中，培養25～35d，孢子萌發并發育成片狀原葉體；S3、將片狀原葉體轉接至增殖培養基中培養25~35d，再轉入孢子體誘導培養基中培養30~40d，形成幼孢子體；S4、將幼孢子體團分離成單株幼孢子體或具4～5株幼孢子體的小叢，與多菌靈消毒液混合，然后將混合液均勻倒入土壤基質中培養。

【技術特征摘要】
1.一種毛葉鐵線蕨的組培繁殖方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：S1、收集毛葉鐵線蕨孢子，進行消毒；S2、毛葉鐵線蕨孢子用無菌水配成懸浮液，加入到孢子萌發培養基中，培養25～35d，孢子萌發并發育成片狀原葉體；所述孢子萌發培養基每升含6～7g瓊脂、20～25g蔗糖，其余為MS或Knop培養基，pH為5.8～6.0；S3、將片狀原葉體轉接至增殖培養基中培養25～35d，再轉入孢子體誘導培養基中培養30～40d，形成幼孢子體；所述增殖培養基每升含0.2～1mg6-BA、0.1～0.5mgNAA、6～7g瓊脂、20～25g蔗糖，其余為MS培養基，pH為5.8～6.0；所述孢子體誘導培養基每升含6～7g瓊脂、20～25g蔗糖，其余為MS培養基，pH為5.8～6.0；S4、將幼孢子體團分離成...

【專利技術屬性】
技術研發人員：蔡靜如，許建新，張壽洲，楊建云，王佳，錢瑭璜，沈彥會，劉建華，
申請(專利權)人：深圳市鐵漢生態環境股份有限公司，深圳市仙湖植物園管理處，
類型：發明
國別省市：廣東;44