本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種用于載玻片上生物樣品的染色模塊及其染色方法，所述染色模塊由上方開口的殼體、與殼體鉸接的模塊蓋，殼體內(nèi)橫置有一切片架，切片架上沿長度方向等間隔設(shè)有若干個用于水平夾住載玻片的彈簧夾；殼體內(nèi)沿長度方向等間隔設(shè)有若干個模塊槽；模塊槽的一側(cè)還設(shè)有若干個排水孔，排水孔與設(shè)置于模塊槽旁側(cè)的排水槽相連通，排水槽延伸至殼體底部且排水槽的出口設(shè)有一排水閥；殼體的底部緊帖有一用于加熱試劑的加熱板，加熱板的下方還設(shè)有一風(fēng)扇，加熱板、風(fēng)扇、排水閥經(jīng)一控制單元控制。本發(fā)明專利技術(shù)的有益效果在于：不僅靈活性高，而且節(jié)省試劑，確保染色結(jié)果的可靠性和穩(wěn)定性。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及醫(yī)療器械和科學(xué)儀器領(lǐng)域，特別是涉及免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)染色
，具體為一種。
技術(shù)介紹
1、免疫組化自動化概述自從1957年美國Technicon公司成功研發(fā)出世界上第一臺全自動生化分析儀以后，各種不同型號和功能的全自動生化分析儀相繼涌現(xiàn)，為繁瑣的臨床生化檢驗(yàn)工作者帶來了福音，極大地提高了工作效率和檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性。由于生化分析中液相-液相反應(yīng)技術(shù)相對較簡易成熟，所需控制關(guān)鍵細(xì)節(jié)較少，所以全自動發(fā)展較為迅速。而免疫組化染色主要是固相-液相反應(yīng)，它過程更加復(fù)雜，所需控制關(guān)鍵細(xì)節(jié)較多，涉及的機(jī)理(如抗原修復(fù)等)又并未完全明確，這導(dǎo)致了全自動免疫組化技術(shù)發(fā)展相對較為緩慢。從1941年免疫組化技術(shù)專利技術(shù)，直到1991年石善溶教授專利技術(shù)抗原修復(fù)技術(shù)以后，現(xiàn)代免疫組化技術(shù)才得到了空前的發(fā)展。近年來，免疫組化對于病理診斷的重要性得到廣泛認(rèn)可，備受病理同仁關(guān)注與青睞。隨著病理標(biāo)本大量增加，免疫組化染色量也呈爆發(fā)式增長，病理技術(shù)人員對自動化的需求也越來越大。目前，為滿足和解決臨床病理診斷的需要，免疫組化自動化已成為病理技術(shù)發(fā)展的必然趨勢。免疫組化自動化染色系統(tǒng)的出現(xiàn)代表著病理組織學(xué)
的重要進(jìn)展和創(chuàng)新。免疫組化實(shí)現(xiàn)自動化后，技術(shù)員從大量實(shí)驗(yàn)中解放出來，免疫組化染色過程中主要步驟所涉及的試劑滴加量、孵育時間和溫度等條件都由電腦軟件自動控制，減少人為操作誤差的可能性，從而提高了染色的一致性、可重現(xiàn)性和可靠性。2、免疫組化自動化原理免疫組化自動化的原理是利用計(jì)算機(jī)控制軟件模擬手工免疫組化操作步驟，通過條形碼、二維碼或芯片自動識別切片及試劑，加熱器件控制切片溫度，加樣排液系統(tǒng)自動加樣和排液，從而將免疫組化染色的部分或全部步驟轉(zhuǎn)移到儀器上，從而實(shí)現(xiàn)自動化操作。用于免疫組化自動化的最早期技術(shù)之一是基于DavidBrigati博士專利技術(shù)的毛細(xì)管虹吸原理，該技術(shù)的原理是兩張組織切片或一張組織切片和一張蓋玻片緊密靠近，使玻片間形成很小的間隙。染色時玻片底部或蓋玻片的一端接觸試劑，利用毛細(xì)管運(yùn)動來填充玻片間或玻片與蓋玻片間的間隙。孵育完成后利用吸水墊將玻片間隙中的液體吸干，每一步試劑和沖洗步驟都是借助這種毛細(xì)管的填充和吸干來完成，這一技術(shù)的主要缺陷是玻片間隙的毛細(xì)管運(yùn)動很大程度上取決于液體的表面張力，組織切片的厚度、折疊、卷起也會影響玻片間或蓋玻片與玻片的間隙，因此試劑有可能覆蓋不均勻，造成染色不均或染色減弱。3、免疫組化自動化面臨的挑戰(zhàn)隨著科技的發(fā)展，各種先進(jìn)技術(shù)應(yīng)用于免疫組化自動化過程中，各種新型儀器層出不窮。但免疫組化自動染色系統(tǒng)最根本的原理始終離不開抗原-抗體的免疫反應(yīng)，僅僅是利用機(jī)械自動化控制來取代復(fù)雜的手工染色操作以減輕技術(shù)員的勞動強(qiáng)度和保證免疫組化染色過程的標(biāo)準(zhǔn)化。在這一過程中需要克服很多技術(shù)挑戰(zhàn)，主要包括以下幾個方面:(I)脫蠟(加熱、非二甲苯脫蠟液的選擇)(2)抗原修復(fù)(高溫、特殊抗原修復(fù)液的選擇)(3)切片及試劑自動識別系統(tǒng)(4)靈活簡便的染色程序(5)染色時間和試劑用量的優(yōu)化(6)防止切片干片或染色不均現(xiàn)象(7)切片沖洗及廢液排放在以上眾多挑戰(zhàn)中，最關(guān)鍵、最為困難的步驟是抗原修復(fù)。目前組織固定最常用的固定劑為甲醛，在組織固定過程中甲醛會與蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián)反應(yīng)，形成一種亞甲基橋交聯(lián)結(jié)構(gòu)，從而使組織中抗原決定簇被屏蔽。石善溶教授發(fā)現(xiàn)，加熱可以破壞甲醛固定引起的蛋白交聯(lián)，使被屏蔽的抗原決定簇重新暴露出來，從而能與相應(yīng)抗體結(jié)合。目前，手工免疫組化染色過程中抗原修復(fù)方式和試劑種類的選擇比較靈活，常用的熱引導(dǎo)抗原修復(fù)方式有:高壓、水煮、微波、水浴等;常用的抗原修復(fù)液有檸檬酸(pH6.0)、EDTA(pH 9.0)、Tris-HCl(pH9.0-10)等。由于各實(shí)驗(yàn)室在抗原修復(fù)操作及試劑選擇上存在較大差異，如在加熱器件的選擇，加熱溫度和時間的控制，抗原修復(fù)液種類、濃度及pH值的選擇等各個環(huán)節(jié)都可能存在差異，而且不同實(shí)驗(yàn)室在免疫組化染色其它步驟的各個環(huán)節(jié)也存在較大差異。因此，各實(shí)驗(yàn)室在免疫組化染色結(jié)果上不可避免會存在差異，即室間差異。目前市場上的全自動化染色儀(抗原修復(fù)自動化完成)常采用加熱塊的形式對玻片進(jìn)行加熱，由于都是在常壓下操作，所以抗原修復(fù)液加熱溫度都低于100°C。也有廠家在抗原修復(fù)液中添加沸點(diǎn)較高的物質(zhì)，使抗原修復(fù)的共沸點(diǎn)超過100°C，從而實(shí)現(xiàn)高溫修復(fù)。也有廠家采用單獨(dú)的抗原修復(fù)儀進(jìn)行抗原修復(fù)，屬于半自動化儀器，其原理是采用一種密閉的容器進(jìn)行加熱，只不過可以定時和設(shè)置溫度。因此，目前全自動染色儀領(lǐng)域還沒有與手工的抗原修復(fù)方式相同的處理方式。研究證實(shí)，不同的抗體對抗原修復(fù)液的pH值、離子濃度、離子種類以及抗原修復(fù)的時間、溫度的要求都有所差異。對于部分特殊抗原，不同來源的組織對抗原修復(fù)的要求也不盡相同。免疫組化自動化過程中熱引導(dǎo)抗原修復(fù)方式及抗原修復(fù)液往往比較局限，加熱方式通常是利用半導(dǎo)體加熱板控制抗原修復(fù)液溫度。由于全自動免疫組化染色系統(tǒng)通常無法密封加壓，因此，抗原修復(fù)溫度無法超過常壓下抗原修復(fù)液的沸點(diǎn)(100°C)。現(xiàn)在部分免疫組化自動化系統(tǒng)通過向抗原修復(fù)液中添加高沸點(diǎn)物質(zhì)來提高抗原修復(fù)液的整體沸點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)在常壓下提高抗原修復(fù)的溫度，從而保證抗原修復(fù)更加完全徹底。4、免疫組化自動化優(yōu)勢與劣勢從本質(zhì)上來說，免疫組化自動化染色系統(tǒng)只是高度模擬手工免疫組化操作的所有步驟。因此，我們必須清醒地認(rèn)識到，當(dāng)免疫組化手工對照是由操作熟練、經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)員完成，且所有試劑都與免疫組化自動化染色系統(tǒng)使用的試劑相同時，免疫組化自動化染色結(jié)果從染色質(zhì)量上很難超過手工免疫組化染色結(jié)果。A.優(yōu)勢與手工免疫組化染色相比，自動化染色的優(yōu)勢主要體現(xiàn)在以下四個方面:(I)染色結(jié)果良好的一致性和可重現(xiàn)性，利于操作程序標(biāo)準(zhǔn)化和質(zhì)量控制；(2)運(yùn)行時間短，處理量較大，工作效率高；(3)技術(shù)員接觸有毒試劑的幾率低，安全性高；(4)對操作員的專業(yè)知識背景和技術(shù)水平的要求相對較低；手工免疫組化染色過程通常非常復(fù)雜，所涉及的注意事項(xiàng)和細(xì)節(jié)繁多，包括組織前處理、切片質(zhì)量、烤片時間和溫度、脫蠟、抗原修復(fù)、試劑滴加、試劑孵育溫度和時間控制以及所有沖洗步驟等眾多因素。而免疫組化染色全過程是一種鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，任何一步操作不當(dāng)都會對染色結(jié)果造成影響。一般情況下，一個技術(shù)員一次染色50張以上的切片時，試劑孵育時間就較難控制。而目前國內(nèi)中等以上三甲醫(yī)院病理科平均每天免疫組化切片量都超過300張，大型醫(yī)院病理科平均每天切片量甚至超過1000張。對于如此巨大的工作量，手工操作出現(xiàn)人為錯誤和不穩(wěn)定性的幾率會大大增加，此時自動化的優(yōu)勢就會充分得以體現(xiàn)。另夕卜，國內(nèi)絕大部分醫(yī)院病理科的免疫組化檢測指標(biāo)和組織類型通常比較固定，更適合開展自動化。而一些科研機(jī)構(gòu)由于檢測指標(biāo)通常為非常用抗體且多樣化，組織來源一般為實(shí)驗(yàn)動物，操作靈活性要求較高，此時自動化的優(yōu)勢并不能充分得以體現(xiàn)。B.劣勢任何事物都具有兩面性。相對于自動化的優(yōu)勢，其劣勢則主要體現(xiàn)在以下幾個方面:(I)試劑選擇的靈活性較差；(2)抗原修復(fù)操作的靈活性相對較差，且抗原修復(fù)效果通常不如手工；(3)試劑用量較大；(4)成本較高；(5)需要定期維護(hù)維修；由于自動化染色系統(tǒng)自身成本較高，且所需的部分或全部試劑通常本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種用于載玻片上生物樣品的染色模塊，其特征在于：包括一上方開口的殼體、蓋設(shè)于殼體上方開口處且與所述殼體鉸接的模塊蓋，所述殼體內(nèi)沿橫向連續(xù)設(shè)有一個以上用于儲蓄試劑的模塊槽，所述模塊槽一端開口且相連通，并且每個模塊槽內(nèi)分別設(shè)有一用于放置載玻片且水平的支撐臺；所述殼體內(nèi)且位于模塊槽開口處橫置有一切片架，所述切片架上沿橫向間隔設(shè)有一個以上用于夾持載玻片的彈簧夾，每個載玻片分別經(jīng)彈簧夾一一對應(yīng)放置于模塊槽內(nèi)的支撐臺上；所述殼體內(nèi)一側(cè)且位于模塊槽旁側(cè)沿橫向設(shè)有排水槽，所述排水槽兩端還分別設(shè)有排水孔，所述排水孔與所述排水槽相連通且延伸至殼體底部外側(cè)；所述排水槽與模塊槽的出水口相連通，并且所述模塊槽出水口設(shè)有一排水閥；所述殼體的底部緊帖有一用于加熱試劑的加熱板，所述加熱板的下方還設(shè)有一用于冷切的風(fēng)扇，所述加熱板、風(fēng)扇、排水閥經(jīng)一控制單元控制。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王小亞，阮寶淇，蔣祺樑，王偉檳，林齊心，陳贊烽，熊玉林，
申請(專利權(quán))人：福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：福建;35
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