本發明專利技術提供了一種芝麻粕陽離子多肽(Cationic?Peptides?of?Sesame?Pomace，CPSP)的制備方法，以及該多肽在制備功能性食品中的應用。其制備方法是將芝麻粕粉碎，加入蛋白提取液提取，隨后加入硫酸銨沉淀多肽，再經過脫鹽,陰離子交換層析等步驟獲得純的芝麻粕陽離子多肽。本發明專利技術提供的芝麻粕陽離子多肽，具有很好的抗氧化活性，并且能顯著地延長秀麗隱桿線蟲的健康壽命，可以作為一種功能因子，應用在抗衰老功能性食品中。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及植物來源的功能多肽制備和應用，具體屬于一種芝麻柏陽離子多肽的制備方法，以及制備的芝麻柏陽離子多肽在制備抗衰老功能性食品中的應用。技術背景芝麻是胡麻科(Pedecliecease)胡麻屬(Sesamum.1ndicum.L)植物，是我國四大油料作物之一。中國古代，芝麻歷來被視為延年益壽食品。《抱樸子》記載，芝麻“耐風濕，補衰老”。每年約有50%的芝麻用于榨油，產生副產品一芝麻柏約15萬噸，后者主要用做農業肥料或者飼料，農業附加值比較低。近年來醫學及食品營養學等方面的研究表明，芝麻柏含很多的生物活性成分，比如蛋白質，芝麻素，氨基酸等，其中蛋白質及多肽的含量最高，大約38%-50%。芝麻柏中所含的芝麻素，促進酒精代謝以及脂肪酸β-氧化，加速排除酒精等有害化學物質，降低肝功能損傷及肝腫瘤的產生概率;芝麻素舒張血管肌肉，增加血管直徑，順暢血液流動，維持血壓穩定;芝麻素抑制血膽固醇的合成與吸收，改善血液流動性;此外，芝麻素抗氧化，抑制流感病毒、仙臺病毒和結核桿菌的生長，對殺蟲劑除蟲菊酯有增效作用。因此，基于農業副產物重復利用的巨大潛能，芝麻柏受到越來越多人們的關注。延長壽命，延緩衰老是人類永恒的追求。目前已經提出幾種衰老理論，其中自由基理論最為普遍的。該理論認為自由基在體內的積累和對機體造成的氧化損傷是衰老的根本原因。清除自由基或阻礙過度自由基的合成是抗氧化劑發揮延緩衰老并延長壽命的主要機制。植物或植物源膳食中存在著較多的抗氧化活性物質，可以通過降低體內自由基水平來發揮抗衰老功能。比如，白藜蘆醇可以提高急性熱應激能力和急性氧化應激能力來發揮抗衰老活性;槲皮素具有顯著的抗氧化性，可以通過直接清除體內的游離自由基，延緩秀麗隱桿線蟲衰老;其它一些抗氧化物質，如維生素Ε、姜黃素、藍莓提取物、銀杏葉提取物等，也能延緩線蟲衰老，顯著延長秀麗隱桿線蟲的健康壽命。多肽是一種分子量較小，由多個氨基酸通過肽鍵連接的一類化合物，許多的功能多肽具有特殊的生物活性，如降血壓、抗疲勞、增強機體免疫力及降低膽固醇等，而這些活性大多與其抗氧化性質有關。因此，利用農業副產物芝麻柏進一步發現并制備活性多肽，明確其功能性功能的作用機理，開發出有價值的功能性食品，對于提高農產品的附加值具有顯著的經濟價值及社會價值。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種芝麻柏陽離子多肽的制備方法，以及該多肽在制備抗衰老功能性食品中的應用。本專利技術提供的一種芝麻柏陽離子多肽，來源于芝麻柏，其分子量4kD左右。本專利技術提供的一種芝麻柏陽離子多肽，可以通過如下方法制得:將干燥的芝麻柏，粉碎后，按每克芝麻柏加入10-15mL pH 4.5-5.5的乙酸銨-乙酸緩沖液(20mM)，室溫抽提6-8h，8000rpm離心30min除去沉淀，收集上清液;將上清液用細紗布過濾，除去麩皮，加入固體硫酸銨，至80 %的飽和度，室溫攪拌4h ； 8000rpm離心30min，收集沉淀；用少量pH 5.0的乙酸錢-乙酸緩沖液重新溶解沉淀，12000rpm離心30min，上清液上樣于HiPrep?26/10脫鹽柱，除去硫酸銨，收集蛋白峰得到芝麻柏陽離子多肽粗提物；將粗提物進一步上樣于HiTrap?DEAE FF弱陰離子交換柱進行分離，收集穿透峰，真空冷凍干燥，得到芝麻柏陽離子多肽干粉。采用基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜技術，通過與標準分子量比對，該芝麻柏陽離子多肽的實際分子量為4kD左右。本專利技術提供的一種芝麻柏陽離子多肽具有很好的體外抗氧化活性。本專利技術提供的一種芝麻柏陽離子多肽延長秀麗隱桿線蟲的平均壽命約17.6%。實驗表明，該芝麻柏陽離子多肽顯著地延長秀麗隱桿線蟲的健康壽命。用終濃度為12.5ug/mL的該多肽處理秀麗隱桿線蟲10d，明顯降低線蟲體內褐脂質的積累。并且，相同濃度的該多肽處理秀麗隱桿線蟲2d，提高了線蟲的運動能力約15.9 %，咽抽速率約23.2 %。本專利技術獲得的抗氧化活性的芝麻柏陽離子多肽經體內抗衰老活性檢測，顯著延長秀麗隱桿線蟲的健康壽命。該多肽可以在抗衰老功能性食品中應用。與現有技術相比，本專利技術首次從農業副產物一芝麻柏中分離制備出一種芝麻柏陽離子多肽，顯著延長秀麗隱桿線蟲的健康壽命。這一多肽的發現，對于芝麻柏資源的深度開發及綜合利用具有巨大的經濟價值，同時也為抗衰老功能性食品的開發提供技術支持。【附圖說明】圖1是芝麻柏陽離子多肽的SDS-PAGE分析圖和基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜圖圖2是芝麻柏陽離子多肽的.0H自由基清除能力圖3是芝麻柏陽離子多肽對秀麗隱桿線蟲壽命的影響圖4是芝麻柏陽離子多肽對線蟲咽抽速率、運動能力、褐脂質積累的影響【具體實施方式】實施例1:芝麻柏陽離子多肽的制備將干燥的芝麻柏，粉碎后，收集粉末;稱取10g粉末，加入100mLpH 5的20mM的乙酸銨-乙酸緩沖液，室溫提取8h，8000rpm離心30min除去沉淀，收集上清液;將上清液用細紗布過濾，除去麩皮，緩慢、均勻地加入固體硫酸銨，至80 %的飽和度，室溫攪拌4h; 8000rpm離心30min，收集沉淀；用30mL pH 5.0的乙酸銨-乙酸緩沖液重新溶解沉淀，12000rpm離心30min，上樣于HiPrepTM26/10脫鹽柱，除去硫酸銨，收集蛋白峰得到芝麻柏陽離子多肽粗提物;將粗提物上樣于HiTrap? DEAE FF弱陰離子交換柱進行分離純化，收集穿透峰，真空冷凍干燥，得到芝麻柏陽離子多肽干粉。采用Folin-酚法測定多肽濃度，經計算采用該方法制得50mg芝麻柏陽離子多肽，經SDS-PAGE分析，芝麻柏陽離子多肽表觀分子量為1kD左右，純度為95%以上(見圖1中B)。基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜測定，芝麻柏陽離子多肽的實際分子量為4kD左右(見圖1中A)。實施例2:芝麻柏陽離子多肽的.0H自由基清除能力實施例1制備的芝麻柏陽離子多肽，配成不同濃度梯度，按以下方法進行實驗。在I OmL試管中依次加入6mmol/L硫酸亞鐵溶液2.0mL，不同質量濃度的芝麻柏陽離子多肽溶液2.0mL，6mmol/L雙氧水溶液2.0mL，搖勾后靜置1min，再加入6mmol/L水楊酸溶液2.0mL，搖勾，靜置30min后于波長510nm處測定其吸光度。重復測定3次。清除率/%= (I — (As—Ax)/A。)X 100式中:Ao為不加樣品液的本底吸光度;As為加入樣品溶液反應后的吸光度;Ax為不加水楊酸溶液酶解液的吸光度。實驗表明，隨著芝麻柏陽離子多肽質量濃度的不斷增大，.0H自由基清除能力升高，說明芝麻柏陽離子多肽具有一定的清除.0H自由基能力(見圖2)。實施例3:芝麻柏陽離子多肽對秀麗隱桿線蟲壽命的影響用五氟尿嘧啶(FUDR)的方法測定芝麻柏陽離子多肽對模式生物一秀麗隱桿線蟲壽命的影響。具體操作如下:多肽用藥組濃度為12.5ug/mL，設對照組。每組培養基中均含75mMFUDR以抑制線蟲子代的孵育。挑取同步化的L4期線蟲到各組培養基中，每組含60條，于20°C培養。從轉移時刻起開始計算線蟲存活天數，轉移當天記為壽命實驗第4天。隔天檢查線蟲，記錄存活線蟲數，剔除逃逸、意外死亡和袋樣蟲。實驗結果表明:12.5yg/mL的芝麻柏陽離子多肽延長秀麗隱桿線蟲的平均壽命約17.6%本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種芝麻粕陽離子多肽的制備方法，其特征在于包括如下步驟：將干燥的芝麻粕，粉碎后，按每克芝麻粕加入10?15mL?pH?4.5?5.5的20mM乙酸銨?乙酸緩沖液，室溫抽提6?8h，8000rpm離心30min除去沉淀，收集上清液；將上清液用細紗布過濾，除去麩皮，加入固體硫酸銨，至80?％的飽和度，室溫攪拌4h；8000rpm離心30min，收集沉淀；用少量pH?4.5?5.5的20mM乙酸銨?乙酸緩沖液重新溶解沉淀，12000rpm離心30min，上清液上樣于HiPrepTM26/10脫鹽柱，除去硫酸銨，收集蛋白峰得到芝麻粕陽離子多肽粗提物；將粗提物進一步上樣于HiTrapTM?DEAE?FF弱陰離子交換柱進行分離，收集穿透峰，真空冷凍干燥，得到芝麻粕陽離子多肽干粉。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：崔曉東，王轉花，馬曉麗，
申請(專利權)人：山西大學，
類型：發明
國別省市：山西;14
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