三萜皂苷類化合物及其制備方法和用途技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了三萜皂苷類化合物及其制備方法和用途，所述三萜皂苷類化合物為：6-O-β-D-吡喃葡萄糖基-達(dá)瑪-17α(H)-20(22)(E)–烯-3β,6α,12β,24S,25-五醇，其結(jié)構(gòu)式為：本發(fā)明專利技術(shù)采用質(zhì)譜和一維、二維核磁共振波譜技術(shù)，以及化學(xué)方法確定三萜皂苷類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。經(jīng)過體外抗腫瘤活性試驗(yàn)，表明具有明顯的抗腫瘤活性，為制備抗腫瘤藥物提供了新的來源。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于醫(yī)藥
，特別涉及三萜皂苷類化合物及其制備方法和用途。
技術(shù)介紹
三七Panax notoginseng為五加科植物三七的干燥根及根莖，另I」名山漆、金不換、 田漆、田三七、田七、參三七、血參、人參三七、滇三七等，主產(chǎn)于我國(guó)云南、廣西等地。本品性 溫，味甘、微苦，無(wú)毒。三七生品能消腫止痛，散瘀止血，熟品能補(bǔ)血活血。三七用于治療疾病 已有悠久的歷史，為我國(guó)常用的傳統(tǒng)名貴藥材之一。數(shù)千年來為中華民族的繁榮作出了巨 大的貢獻(xiàn)，并深受世界人民的關(guān)注與重視。 如今現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)飛速發(fā)展，導(dǎo)致了傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論的研究手段相對(duì)落后，從而 與現(xiàn)代科學(xué)理論相脫節(jié)，使三七的藥效資源開發(fā)較局限。皂苷作為三七的主要藥效物質(zhì)成 分，往往很難以初級(jí)皂苷形式直接被人體吸收，而是要經(jīng)過人體代謝成次級(jí)皂苷尤其是稀 有人參皂苷，才能被吸收進(jìn)入血液，發(fā)揮藥效作用。 生物轉(zhuǎn)化手段具有反應(yīng)較快、專屬性較強(qiáng)、副反應(yīng)較少的特點(diǎn)，利用了微生物體內(nèi) 復(fù)雜的酶系促使三七中原有的化學(xué)成分經(jīng)過結(jié)構(gòu)修飾或活性位點(diǎn)的改變，獲得活性更好、 毒性更小、藥用價(jià)值更大的先導(dǎo)化合物，用于新藥開發(fā)，從而更好地發(fā)揮三七藥材資源優(yōu) 勢(shì)，對(duì)開發(fā)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新藥具有了十分重要的研究意義和社會(huì)效益。 三七作為我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥材，同人參一樣作為早期的藥食同源植物，素有"參中 之王"的美譽(yù)。具有多種藥效物質(zhì)成分及較強(qiáng)的藥理作用，已被廣泛開發(fā)成多種產(chǎn)品用于臨 床疾病的治療。但是同時(shí)，三七作為一種傳統(tǒng)的中草藥，其中多種成分的用途都沒有被開發(fā) 利用。三七皂苷為其主要的活性成分，但依據(jù)人參皂苷在體內(nèi)的代謝規(guī)律及其構(gòu)效關(guān)系可 知，"人參皂苷"是通過胃腸道吸收后被腸道菌逐級(jí)代謝為次級(jí)皂苷及苷元吸收進(jìn)入血液循 環(huán)后發(fā)揮藥理作用的，表明，天然人參皂苷結(jié)構(gòu)并不是結(jié)構(gòu)最佳狀態(tài)。綜上所述，如何通過 合理的結(jié)構(gòu)修飾手段，將三七中原有的含量較高的人參皂苷進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾轉(zhuǎn)化成低糖鏈或 新的側(cè)鏈結(jié)構(gòu)的稀有人參皂苷成為本領(lǐng)域技術(shù)人員亟待解決的問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)為解決上述問題，提供了三萜皂苷類化合物及其制備方法和用途。 本專利技術(shù)的首要目的在于提供一種新的三萜皂苷類化合物。 本專利技術(shù)的另一目的是提供化合物作為制備抗腫瘤藥物的用途。 本專利技術(shù)的再一目的是解決現(xiàn)有技術(shù)中所存在的問題，提供一種上述三萜皂苷類化 合物的制備方法。 為解決上述問題，本專利技術(shù)采取如下技術(shù)方案： 三萜皂苷類化合物，所述三萜皂苷類化合物的結(jié)構(gòu)式為： UM 所述三萜皂苷類化合物為:6-(H3-D-吡喃葡萄糖基-達(dá)瑪-17α(Η)-20(22)(Ε)-烯_ 30，6a，120，24S，25-五醇。進(jìn)一步的，所述的三萜皂苷類化合物是從三七轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中提取得到的。 一種上述的三萜皂苷類化合物的制備方法，具體步驟如下：步驟一:三七轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的制備： A種子液制備： 取靈芝種子培養(yǎng)液液體培養(yǎng)基于壓力蒸汽滅菌器中于121°C滅菌處理30分鐘，冷 卻后在無(wú)菌操作臺(tái)中接入斜面菌種，于恒溫振蕩培養(yǎng)箱中于27~29°C，160轉(zhuǎn)/分鐘下培養(yǎng)， 得澄清星芒狀菌球，即得種子液備用； B轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的制備： 取三七藥材粉末，加入碳酸鈣生長(zhǎng)因子和水，混勻，密封并滅菌，于室溫下冷卻，在 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)接入所述步驟A制備的所述種子液，避光培養(yǎng)，至容器底部布滿菌絲體為止， 取出干燥，即得三七轉(zhuǎn)化產(chǎn)物； 步驟二:提取： 取所述步驟B制備的所述三七轉(zhuǎn)化產(chǎn)物，加入4~8倍重量份的70%的乙醇，回流提 取3-5次，每次1~3小時(shí)，過濾并合并提取液，壓縮得稠膏；將所述稠膏加水分散，依次用等 體積的石油醚、乙酸乙酯、水飽和正丁醇溶液萃取，共萃取6~8次，后對(duì)萃取液分別減壓干 燥，得石油醚部分、乙酸乙酯部分和水飽和正丁醇部分； 步驟三:分離純化： 取所述步驟二制備的所述乙酸乙酯部分上硅膠柱色譜，以體積比100:0~0:100的 二氯甲烷-甲醇混合溶劑洗脫，薄層色譜檢識(shí)，收集二氯甲烷-甲醇100:10部分的洗脫液，合 并含所述三萜皂苷類化合物的流分為157~165的洗脫液，回收溶劑至干，所得物再經(jīng)反相 RP-C18柱層析，以體積比100:50的甲醇-水混合溶劑洗脫，減壓回收溶劑至干，得到含有所 述三萜皂苷類化合物粗品，再經(jīng)半制備型高效液相色譜分離純化，用58 %甲醇-水洗脫，得 到所述三萜皂苷類化合物純品。 進(jìn)一步的，三萜皂苷類化合物的制備方法，其特征在于，所述靈芝種子培養(yǎng)液液體 培養(yǎng)基包括以下重量百分?jǐn)?shù)的組分:葡萄糖為1%~4%，蛋白胨為0.2%~1 %，酵母粉為 0· 1 %~3%，磷酸二氫鉀為0· 1 %~3%，硫酸鎂為0· 1 %，水為95%~99%。 進(jìn)一步的，所述靈芝種子培養(yǎng)液液體培養(yǎng)基包括以下重量百分?jǐn)?shù)的組分為：葡萄 糖為2%，蛋白胨為0.5%，酵母粉為0.2%，磷酸二氫鉀為0.1%，硫酸鎂為0.1%，水為 97.1%〇進(jìn)一步的，所述步驟B中：所述三七藥材粉末過10目篩；加入的所述碳酸鈣生長(zhǎng)因 子的重量為所述三七藥材粉末重量的〇. 〇 1倍量，加水量為所述三七藥材粉末重量的1.5倍； 混均后的所述三七藥材粉末中含水量為60%。進(jìn)一步的，所述步驟B中：滅菌條件為：于立式壓力蒸汽滅菌器中滅菌處理1小時(shí)； 避光培養(yǎng)條件為:29~31°C，65%RH。進(jìn)一步的，所述步驟B中，所述種子液與所述三七藥材的重量比為:2:1。上述的三萜類化合物的用途，所述三萜皂苷類化合物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng) 用。 一種抗腫瘤藥物，包含上述的三萜皂苷類化合物。 本專利技術(shù)的有益效果為： (1)提供了一種新的三萜皂苷類化合物;更好地發(fā)揮三七藥材資源優(yōu)勢(shì)，對(duì)開發(fā)具 有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的新藥具有了十分重要的研究意義和社會(huì)效益。 (2)運(yùn)用體外抗腫瘤活性篩選體系對(duì)此新的三萜皂苷類化合物進(jìn)行活性評(píng)價(jià)，結(jié) 果表明，所述的化合物具有較好的抗腫瘤作用。經(jīng)過體外抗腫瘤活性試驗(yàn)，表明具有明顯的 抗腫瘤活性，為制備抗腫瘤藥物提供了新的來源。【附圖說明】圖1是本專利技術(shù)所述三萜皂苷類化合物的h-NMR譜圖；圖2是本專利技術(shù)所述三萜皂苷類化合物的13C_NMR譜圖；圖3是本專利技術(shù)所述三萜皂苷類化合物的HMQC譜圖；圖4是本專利技術(shù)所述三萜皂苷類化合物的HMBC譜圖；圖5是本專利技術(shù)所述三萜皂苷類化合物的GC色譜圖（D-Glu); 圖6是本專利技術(shù)所述三萜皂苷類化合物的GC色譜圖（Sample)。【具體實(shí)施方式】 下文將結(jié)合具體實(shí)施例詳細(xì)描述本
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
。應(yīng)當(dāng)注意的是，下述實(shí)施例中描述 的技術(shù)特征或者技術(shù)特征的組合不應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為是孤立的，它們可以被相互組合從而達(dá)到更 好的技術(shù)效果。 實(shí)施例1: 一、本專利技術(shù)涉及的一種三萜皂苷類化合物結(jié)構(gòu)式如下： 其化學(xué)名稱為:所述三萜皂苷類化合物是從三七轉(zhuǎn)化產(chǎn)物中首次分離得到的新化 合物，命名為人參皂苷:6-(H3-D-吡喃葡萄糖基-達(dá)瑪-17α(Η)-20(22)(Ε)_烯_3β，6α，12β， 24S，25-五醇。本專利技術(shù)三萜皂苷類化合物的命名為人參皂苷ST-7。本專利技術(shù)所述三萜皂苷類化合物物理化學(xué)常數(shù)如下：白色粉末（甲醇），ESI-MS:m/z 677.42( + )，結(jié)合氫譜與碳譜推測(cè)其分子式為 C36H62O9。10 %硫酸乙醇溶液顯紫紅色，Mo 1 i sh反應(yīng)陽(yáng)性，Li ebermann-Bur char本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
三萜皂苷類化合物，其特征在于，所述三萜皂苷類化合物的結(jié)構(gòu)式為：所述三萜皂苷類化合物為：6?O?β?D?吡喃葡萄糖基?達(dá)瑪?17α(H)?20(22)(E)–烯?3β,6α,12β,24S,25?五醇。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：邱智東，徐偉，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：吉林;22