本發明專利技術涉及一種中藥制劑的指紋圖譜的測定方法，具體涉及一種醒腦靜注射液的液相指紋圖譜測定方法，包括以下步驟：供試品溶液的制備、對照品溶液的制備、液相色譜儀測定及對數據和圖譜的處理，以及由該方法得到的醒腦靜注射液液相指紋圖譜。本發明專利技術方法簡便、快捷、準確、穩定、可靠，可用與醒腦靜注射液氣相指紋圖譜結合，用于醒腦靜注射液樣品的質量控制，能更加全面、客觀、科學地評價醒腦靜注射液質量，保證產品的有效性。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及中藥指紋圖譜分析方法，具體涉及醒腦靜注射液液相指紋圖譜測定方法，及其所得到的醒腦靜注射液液相指紋圖譜。
技術介紹
我國傳統中藥制劑成分復雜，一般質量標準中含量測定只涉及處方中君藥的I?3個成分，難以有效的控制其內在質量，從而無法保證用藥的安全性、有效性，尤其是經靜脈途徑用藥的中藥注射劑，現行質量標準已無法保證其安全性。故只有不斷進行科學的質量標準研究，才能逐步符合中藥及中藥發展的要求，真正的做到“安全、有效、穩定、可控”。醒腦靜注射液是由麝香、冰片、郁金和梔子經水蒸氣蒸餾提取精制而成的復方中藥注射液，始創于上世紀70年代，組方由中醫名方安宮牛黃丸化裁而得，具有清熱解毒，涼血活血，開竅醒腦功效。其質量標準國家食品藥品監督管理局國家藥品標WS3-B-3353-98-2003，其中鑒別包括麝香的鑒別，含量測定僅有冰片的檢測。已有的醒腦靜注射液質量控制的文獻報道，全部是以麝香酮和/或龍腦為質控指標，檢測方法主要為氣相色譜法(GC)和氣質聯用法(GC-MS)，僅有I篇文獻采用HPLC法測定醒腦靜中麝香酮的含量。且專利(專利申請號200910186698.X)僅建立一種氣相測定的指紋圖譜方法，在該指紋圖譜中，麝香酮和龍腦的總含量占到總峰面積的90%之上，其他成分的信息掩蓋較多；而液相色譜法可有效排除了麝香酮和龍腦含量過高造成的不利影響。而且理論上，所有化學成分都應具有某些藥理活性，而且往往微量成分的作用在整個處方或制劑中的作用舉足輕重。基于此，本專利技術首次采用高效液相法建立了醒腦靜注射液的指紋圖譜，對該注射液的化學成分概貌有一個全面的認識。同時生產過程中，氣相指紋圖譜與液相指紋圖譜共同運用，可進一步提高制劑的質量可控性需求，滿足制劑的“安全、有效、穩定、可控”。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種醒腦靜注射液液相指紋圖譜的測定方法及其標準指紋圖譜。本專利技術通過對醒腦靜注射液液相指紋圖譜的研究，提供了一種快速評價該制劑中成分質量的方法，彌補了現有質量控制技術的不足的缺點，使醒腦靜注射液質量控制技術更為完善，也更為科學。本專利技術所述的一種醒腦靜注射液的液相指紋圖譜測定方法，包括以下步驟—種醒腦靜注射液的有效成分含量測定方法，包括以下步驟:I)供試品溶液的制備:取醒腦靜注射液3?5支，傾出內容物，混勻，精密吸取5?1mL，通過固相萃取小柱，流出液棄去，用I?5mL有機溶劑洗脫，收集洗脫液，置I?5mL量瓶中，加有機溶劑至刻度，搖勻，作為供試品溶液；2)對照品溶液的制備:分別稱取優香芹酮、樟腦、莪術二酮、吉馬酮、姜黃烯酮、莪術酮和莪術烯醇對照品適量，置于容量瓶中，加有機溶劑溶解并稀釋至刻度，制成混合對照品溶液；3)測定方法:分別吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，得到色圖譜，根據色譜圖計算供試品溶液中的有效成分含量；其中的色譜系統條件:色譜柱:C18柱;流動相:乙腈(A)-甲酸水溶液(B)梯度洗脫，流速I.0?2.0mL/min ；檢測波長254nm ；柱溫30?40°C，洗脫條件-Ο-δπ?η,ΑΟ^ΑΑ-δΟπ?η,ΑΟ^-ΘΟ^ΑΑΟ-ΘΟπ?ηΑΟ^-ΙΟΟ^ΑΑΟ-θδπ?η,ΙΟΟ^ΑΑδ.ΟΙ-Τδπ?η,^^Α。其中，步驟I)中所用的固相萃取小柱選自C18或C8的固相萃取小柱。其中，步驟I)和步驟2)所用的有機溶劑選自:甲醇、乙醇、乙腈、正己烷等有機溶劑。其中，步驟3)甲酸水溶液濃度為0.01?0.05%。優選的，測定方法，包括以下步驟:I)供試品溶液的制備:取醒腦靜注射液3?5支，傾出內容物，混勻，精密吸取5mL，通過C8固相萃取小柱，流出液棄去，用ImL甲醇洗脫，收集洗脫液，置ImL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；2)對照品溶液的制備:分別稱取優香芹酮、樟腦、莪術二酮、吉馬酮、姜黃烯酮、莪術酮和莪術烯醇對照品適量，置于同一容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，制成優香芹酮、樟腦、莪術二酮、吉馬酮、姜黃烯酮、莪術酮和莪術烯醇經適當稀釋后得最終質量濃度介于0.lmg/mL?I.0mg/mL的單個對照品溶液；3)測定方法:分別吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，得到色圖譜，根據色譜圖計算供試品溶液中的有效成分含量；其中，液相色譜系統條件:色譜柱:C18(4.6mm X 250mm，5μπι);流動相:乙腈(A)-0.02 %甲酸水溶液(B)梯度洗脫，洗脫條件:0-511^11，40%八；5-5011^11，40%-60%八；50-6011^11，60%-100%八；60-6511^11，100%A;65.01-75min，40%A;流速 1.01111711^11;檢測波長25411111;柱溫35°(3;進樣量:2(^1^。本專利技術進一步提供一種醒腦靜注射液液相標準圖譜的建立方法，步驟如下:I)取多批次合格的醒腦靜注射液，傾出內容物，混勻，精密吸取5mL，通過C8固相萃取小柱，流出液棄去，用ImL甲醇洗脫，收集洗脫液，置ImL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；2)吸取供試品溶液，注入液相色譜儀，得到色圖譜，根據所得到的多批合格產品的色譜圖，用指紋圖譜軟件歸一成一個醒腦靜注射液標準對照液相指紋圖譜，其中吸收峰總計為11個；其中，所述液相色譜的色譜條件如下:色譜柱:C18(4.6mm X 250mm，5μπι)；流動相:乙腈(A)-0.02%甲酸水溶液(B)梯度洗脫，洗脫條件:0-511^11，40%八；5-5011^11，40%-60%八；50-6011^11，60%-100%八；60-6511^11，100%A;65.01-75min，40%A;流速 1.01111711^11;檢測波長25411111;柱溫35°(3;進樣量:2(^1^。本專利技術的測定方法是經過篩選獲得的，篩選過程如下:1.儀器與試劑1.1儀器日本島津LC-20AT高效液相色譜儀(SIL-20A自動進樣器、CT0-10AS柱溫箱、檢測器:SPD-M20A)，LabsOlut1ns色譜工作站；1/10萬電子分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司，5爵士)。1.2試劑莪術二酮(批號E-009-110603)和吉馬酮(批號111665-201103)購自成都彼斯特生物科技有限公司。樟腦(批號Z-018-140801)購自成都瑞芬思生物科技有限公司。優香芹酮(2，6，6_三甲基-2，4-環庚烯-1-酮)、姜黃烯酮、莪術烯醇和莪術酮均由本實驗室自制，經NMR和MS確定結構。以上對照品經HPLC測定純度>98%。2.色譜系統條件:色譜柱:C18(4.6mmX 250mm,5μπι)；流動相:乙腈(A)-0.02%甲酸水溶液(B)梯度洗脫，洗脫條件:0-511^11，40%八；5-5011^11，40%-60%八；50-6011^11，60%-100%八；60-6511^11，100%A;65.01-75min，40%A;流速 1.01111711^11;檢測波長25411111;柱溫35°(3;進樣量:2(^1^。3.供試品溶液制備取醒腦靜注射液3?5支，傾出內容物，混勻，精密吸取5mL，通過C8固相萃取小柱，流出液棄去，用ImL甲醇洗脫，收集洗脫液，置ImL量瓶中，加甲醇至刻度，搖本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種醒腦靜注射液的有效成分含量測定方法，包括以下步驟：1)供試品溶液的制備：取醒腦靜注射液3～5支，傾出內容物，混勻，精密吸取5～10mL，通過固相萃取小柱，流出液棄去，用1～5mL有機溶劑洗脫，收集洗脫液，置1～5mL量瓶中，加有機溶劑至刻度，搖勻，作為供試品溶液；2)對照品溶液的制備：分別稱取優香芹酮、樟腦、莪術二酮、吉馬酮、姜黃烯酮、莪術酮和莪術烯醇對照品適量，置于容量瓶中，加有機溶劑溶解并稀釋至刻度，制成混合對照品溶液；3)測定方法：分別吸取對照品溶液與供試品溶液，注入液相色譜儀，得到色圖譜，根據色譜圖計算供試品溶液中的有效成分含量；其中的色譜系統條件：色譜柱：C18柱；流動相：乙腈(A)?甲酸水溶液(B)梯度洗脫，流速1.0～2.0mL/min；檢測波長254nm；柱溫30～40℃，洗脫條件：0?5min，40％A；5?50min，40％?60％A；50?60min，60％?100％A；60?65min，100％A；65.01?75min，40％A。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉薇薇，甘國峰，李春，楊立新，馮偉紅，
申請(專利權)人：無錫濟民可信山禾藥業股份有限公司，
類型：發明
國別省市：江蘇;32
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