本發明專利技術公開了一種耐熱保護劑、豬瘟耐熱保護劑活疫苗及其制備方法，屬于生物技術領域。一種耐熱保護劑，組方成分包括蔗糖10～15%，聚乙烯吡咯烷酮2～6%，聚賴氨酸2～4%，酶解明膠0.5～3%，檸檬酸鈉0.2～1%，硫脲2～10%，牛血清白蛋白2～6%，蘆布若爾1～4%，余量為水；將半成品病毒液與耐熱保護劑混合，冷凍干燥，制成豬瘟耐熱保護劑活疫苗。本發明專利技術通過添加耐熱保護劑，降低了病毒在冷凍和真空干燥過程中損傷，提高了產品在保存和使用中的穩定性；本發明專利技術方法制備的豬瘟耐熱保護劑活疫苗，實現了儲運過程中冷藏保存，保存期延長到2～8℃保存36個月。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及，屬于生物技 術領域。
技術介紹
豬瘟俗稱〃爛腸瘟〃，是一種具有高度傳染性的疫病，其特征是急性呈敗血性變化， 實質器官出血，壞死和梗死;慢性呈纖維素性壞死性腸炎。豬瘟是威脅養豬業的主要傳染病 之一，一年四季都可發生，常給養豬業造成毀滅性損失，預防豬瘟最有效的方法就是接種豬 瘟疫苗。 市場上常用的豬瘟疫苗主要有兩種:豬瘟細胞苗和豬瘟脾淋苗。這兩種疫苗在儲 運時均需在_15°C的條件下冷凍保存，在使用的終端很難達到保存條件的要求，疫苗容易失 活，造成免疫效果參差不齊，從而引起免疫失敗導致疫病爆發。其中豬瘟脾淋苗還存在高溫 季節生產技術難度大、半成品保存期短(_15°C以下保存僅有15日）和溶解不佳等問題。因 此，研發一種半成品保存期長、保護功能強的豬瘟活疫苗耐熱凍干保護技術顯得尤為重要。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是克服已有技術之缺陷，提供一種耐熱保護劑、豬瘟 耐熱保護劑活疫苗及其制備方法，添加耐熱保護劑的豬瘟活疫苗具有耐熱性能好、保護功 能強的特點。 本專利技術的目的通過以下技術方案實現的： 一種耐熱保護劑，是由以質量體積百分含量計的下列組分制成： 蔗糖10~15%，聚乙烯吡咯烷酮2~6%，聚賴氨酸2~4%，酶解明膠0.5~3%，檸檬酸鈉0.2 ~1%，硫脲2~10%，牛血清白蛋白2~6%，蘆布若爾1~4%，余量為水。 上述耐熱保護劑，所述耐熱保護劑分為保護劑A和保護劑B，所述保護劑A是將蔗 糖、聚乙烯吡咯烷酮、酶解明膠和蘆布若爾溶解于水中，除菌后備用;所述保護劑B是將聚賴 氨酸、檸檬酸鈉、硫脲、牛血清白蛋白溶解于水中，除菌后備用。 -種豬瘟耐熱保護劑活疫苗的制備方法，使用如上述的耐熱保護劑，并按以下步 驟制備： a. 病毒儲存液制備:將新鮮的制苗用脾淋組織半成品在2~10°C下搗碎至勻漿，用稀釋 液稀釋勻漿，勻漿與稀釋液的質量體積比為1:1，將稀釋的勻漿與部分保護劑B按體積比4:1 ~4:2混合，混合液于2~8°C的條件下放置分層，下層液體為病毒儲存液，將病毒儲存液分 裝，置-15°C以下保存； b. 疫苗制備:將病毒儲存液室溫放置，至完全融化，用稀釋液將病毒儲存液稀釋1~4 倍，然后按稀釋的病毒液與耐熱保護劑體積比1:1加入保護劑A和剩余的保護劑B，充分混 勻，定量分裝，冷凍干燥，制成豬痕耐熱保護劑活疫苗。 -種豬瘟耐熱保護劑活疫苗的制備方法，使用如上述的耐熱保護劑，并按以下步 驟制備： a. 病毒儲存液制備:將豬瘟細胞毒半成品病毒液與部分保護劑B按體積比4:1~4:2混 合，制成病毒儲存液，置-15°C以下保存； b. 疫苗制備:將病毒儲存液室溫放置，至完全融化，用稀釋液將病毒儲存液稀釋至10萬 ~100萬RID/ml，然后按稀釋的病毒液與耐熱保護劑體積比1:1加入保護劑A和剩余的保護 劑B，充分混勻后，進行定量分裝，冷凍干燥，制成豬痕耐熱保護劑活疫苗。 上述豬瘟耐熱保護劑活疫苗的制備方法，所述稀釋液為乳漢液、漢克氏液或PBS 液。 -種豬瘟耐熱保護劑活疫苗，它按照上述方法生產的豬瘟耐熱保護劑活疫苗。 與現有技術相比，本專利技術具有以下有益效果： 本專利技術在半成品病毒液儲存時加入保護劑，有效延長半成品的保存期，保證半成品病 毒在常溫狀態下生物活性的維持，實現了常溫直接融化疫苗半成品，生產工序更簡化，且降 低了能耗。 耐熱保護劑中添加表面活性劑蘆布若爾、氨基酸聚合物聚賴氨酸，并與酶解明膠、 聚乙烯吡咯烷酮等最適配比，降低了病毒在冷凍和真空干燥過程中損傷，且提高了產品在 保存和使用中的穩定性。 本專利技術方法制備的豬瘟耐熱保護劑活疫苗可實現疫苗儲運過程中的冷藏保存，延 長了保存期，由原來-15°C以下保存24個月提高到2~8°C保存36個月，37°C保存期可達15 天，在降低了產品儲運要求和成本的同時提高產品質量和使用的便捷性。【具體實施方式】 下面結合【具體實施方式】做進一步的說明。 實施例1耐熱保護劑的制備 蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮(K30)和酶解明膠等耐熱保護劑組方原料均為常規試劑，市場上 有售。 ⑴配制耐熱保護劑1 配制1000 ml耐熱保護劑，稱取蔗糖100g、聚乙烯吡咯烷酮(K30) 60g、聚賴氨酸20g、 酶解明膠5g、檸檬酸鈉10g、硫脲100g、牛血清白蛋白20g和蘆布若爾10g。配制時將蔗糖、聚 乙烯吡咯烷酮(K30)、酶解明膠、蘆布若爾加入去離子水中并定容到500ml，充分溶解，配成 保護劑A，除菌后備用;將聚賴氨酸、檸檬酸鈉、硫脲、牛血清白蛋白加入去離子水中并定容 到500ml，充分溶解，配成保護劑B，除菌后備用。 (2)配制耐熱保護劑2 配制1000ml耐熱保護劑，稱取蔗糖150g、聚乙烯吡咯烷酮(K30) 20g、聚賴氨酸40g、 酶解明膠30g、檸檬酸鈉2g、硫脲20g、牛血清白蛋白60g和蘆布若爾40g。配制時將蔗糖、聚 乙烯吡咯烷酮(K30)、酶解明膠、蘆布若爾加入去離子水中并定容到500ml，充分溶解，配成 保護劑A，除菌后備用;將聚賴氨酸、檸檬酸鈉、硫脲、牛血清白蛋白加入去離子水中并定容 到500ml，充分溶解，配成保護劑B，除菌后備用。實施例2制備豬瘟耐熱保護劑活疫苗(豬瘟脾淋苗） 豬瘟脾淋組織半成品由瑞普(保定)生物藥業有限公司提供，按照2000版《中華人民共 和國獸用生物制品規程》（以下簡稱"規程"）制備，病毒毒種購自中國獸醫藥品監察所。 (1)病毒儲存液的制備 將兩份相同體積的新鮮的豬瘟脾淋組織半成品（l〇〇g)，在2~10°C下搗碎至勻漿，分別 用100mL漢克氏液稀釋勻漿，兩份稀釋的勻漿分別加入耐熱保護劑1的保護劑B和耐熱保護 劑2的保護劑B混合均勻，稀釋的勻漿(200ml)與保護劑B的體積比(V:V)為4:2(稀釋的勻漿 200ml加入保護劑B 100ml)，混合液置于2~8°C放置4小時，固液分離出下層液體，制成病毒 儲存液1和病毒儲存液2，分別分裝，置-15°C保存。同時設立不添加保護劑的空白對照。將三 組病毒儲存液保存0、0.5、2、4和8個月時分別測定病毒含量。測定結果如表1所示， 表1不同保存期病毒儲存液病毒含量檢測結果 單位：lg(RID/ml)' 添加耐熱保護劑^和耐熱保護劑2的兩組豬瘟病毒儲存液在-i5°C保存8個月，病毒含 下降僅為0.3 lg(RID/ml)，滿足"規程"要求（制苗用半成品病毒含量應25.0 lg(RID/ ml));對照組-15°C保存其病毒含量迅速下降，僅能儲存0.5個月，保存2個月病毒含量不合 格。因此，添加本專利技術的保護劑B有效延長了半成品病毒液保存期(至8個月），為生產高效價 的豬瘟脾淋苗提供保障。 (2)疫苗制備 將兩種病毒儲存液(300ml)室溫放置至完全融化，然后用漢克氏液將病毒儲存液稀釋2 倍(至600ml)，將稀釋的病毒液(不計保護劑B體積，即500ml)與耐熱保護劑按體積比1:1(V: V)補充保護劑A( 250ml)和剩余的保護劑B( 150ml)，充分混勻后，定量分裝，冷凍干燥，制成 豬瘟耐熱保護劑活疫苗1和豬瘟耐熱保護劑活疫苗2。同時按照農業部443號公告(豬瘟耐熱 保護劑活疫苗(兔源）制造及檢驗試行規程、同類耐熱苗行業標準)方法制備同類耐熱苗作 為對照本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種耐熱保護劑，其特征在于，是由以質量體積百分含量計的下列組分制成：蔗糖10～15%，聚乙烯吡咯烷酮2～6%，聚賴氨酸2～4%，酶解明膠0.5～3%，檸檬酸鈉0.2～1%，硫脲2～10%，牛血清白蛋白2～6%，蘆布若爾1～4%，余量為水。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：何平有，鄒立宏，劉濤，柳珊，韓佳麗，鄭朝朝，郁宏偉，朱秀同，梁武，楊保收，
申請(專利權)人：瑞普保定生物藥業有限公司，
類型：發明
國別省市：河北;13
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