一種葡萄中赤霉素殘留的檢測(cè)方法技術(shù)

一種葡萄中赤霉素殘留的檢測(cè)方法，包括以下步驟：(1)樣品前處理：將待測(cè)樣品經(jīng)縮分后，將其切碎充分混勻，再粉碎制成待測(cè)樣，然后加入乙腈-1.5％醋酸提取液，無(wú)水硫酸鎂，高速勻漿、高速離心，靜置，接著取上清液加入C18、PSA和無(wú)水硫酸鎂，漩渦混勻，靜置，過(guò)有機(jī)微孔濾膜，待測(cè)；(2)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制；(3)液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定。本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)不僅可除去提取液中的干擾物，而且有助于去除對(duì)色譜柱性能有影響的雜質(zhì)，延長(zhǎng)色譜柱使用壽命；同時(shí)大大簡(jiǎn)化了樣品前處理步驟，節(jié)約了時(shí)間，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，靈敏度高。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專(zhuān)利技術(shù)涉及一種葡萄中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留的檢測(cè)方法，具體涉及一種葡萄中赤 霉素殘留的檢測(cè)方法。
技術(shù)介紹
赤霉素具有能加速植物的生長(zhǎng)發(fā)育，促進(jìn)細(xì)胞、莖伸長(zhǎng)，擴(kuò)大葉片;促進(jìn)單性結(jié)實(shí)， 使果實(shí)提早成熟，增加產(chǎn)量;打破種子休眠，促進(jìn)發(fā)芽;改變雌雄花比率，影響開(kāi)花時(shí)間，減 少花、果脫落等特點(diǎn)，是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中用途廣泛，用量最大的一種植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。近年來(lái)一 些種植者盲目追求高產(chǎn)，存在過(guò)度施用赤霉素現(xiàn)象，已知的赤霉素種類(lèi)至少有38種，作為大 環(huán)內(nèi)酯抗生素農(nóng)藥時(shí)，其主要成分是ga 3，也就是赤霉酸，我國(guó)制訂了《出口水果中赤霉素殘 留量的測(cè)定液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜法》（SN/T 0350-2012)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法，但在《食品安全 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥最大殘留限量》(GB 2763-2014)未規(guī)定其限量值，而美國(guó)、日本等國(guó)規(guī) 定蔬菜、水果中赤霉素最高殘留限量為〇.2mg/kg。 目前，赤霉素殘留分析一般采用熒光檢測(cè)技術(shù)，其樣品前處理常用液液萃取、薄層 分離、柱層層析法，這些方法操作繁瑣，且需使用大量有機(jī)溶劑。再則，現(xiàn)有技術(shù)中赤霉素的 提取劑一般為丙酮，甲醇，在樣品絞碎后呈漿狀，粘度大影響過(guò)濾的速度，回收率偏低。因 此，建立一種高回收率、簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確地測(cè)定葡萄中赤霉素殘留的方法，對(duì)于促進(jìn)食品的 安全性有著重要的指導(dǎo)意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專(zhuān)利技術(shù)所要解決的技術(shù)問(wèn)題是，提供一種高回收率、簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)葡萄 中赤霉素殘留的方法。 本專(zhuān)利技術(shù)解決其技術(shù)問(wèn)題采用的技術(shù)方案是，， 包括以下步驟： (1)樣品前處理:將待測(cè)樣品經(jīng)縮分后，將其切碎充分混勻，再粉碎制成待測(cè)樣，然 后加入乙腈-1.5%醋酸提取液，無(wú)水硫酸鎂，高速勻漿、高速離心，靜置，接著取上清液加入 C18、PSA和無(wú)水硫酸鎂，漩渦混勻，靜置，過(guò)有機(jī)微孔濾膜，待測(cè)； (2)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制:將空白樣品按照樣品預(yù)處理，用所得的樣品溶液將赤霉 素標(biāo)準(zhǔn)液逐級(jí)稀釋得到的濃度為5、10、20、50、lOOyg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液。 (3)液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定:將標(biāo)準(zhǔn)溶液按濃度由低到高注入配有液相色譜-質(zhì) 譜/質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)定，以定量離子峰面積-濃度作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)回歸方程;然后在相同條 件下將前處理的樣品液注入液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)定，采用外標(biāo)法計(jì)算待測(cè)赤霉素 殘留量的測(cè)定值。 進(jìn)一步，步驟（1)中，將待測(cè)樣品經(jīng)縮分后，將其切碎充分混勻，再粉碎制成待測(cè) 樣，然后稱(chēng)取10. 〇〇~10. 〇5g待測(cè)樣加入10mL乙腈-1.5 %醋酸提取液，無(wú)水硫酸鎂4g，高速 勾衆(zhòng)lmin后，于10000r/min下離心5min，靜置片亥丨」，吸取lmL上清液，加入25mg Cis、25mgPSA 和150mg無(wú)水硫酸鎂后，漩渦混勻lmin，靜置，過(guò)0.22μηι有機(jī)微孔濾膜，待測(cè)。 進(jìn)一步，步驟(3)中，所述液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜分析條件為:色譜條件色譜柱:HSS T3柱lOOmmX 2 · 1mm，1 ·8μηι，；柱溫:40°C;流動(dòng)相：乙腈與水的體積比為35/65，流速:0 · 4mL/ min;進(jìn)樣量:5yL; 質(zhì)譜條件：電噴霧離子源；掃描方式：負(fù)離子模式;檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；離子源 溫度：150°C;去溶劑氣溫度:350°C;去溶劑氣和錐孔氣均為高純氮?dú)猓魉俜謩e為650L/h和 50L/h;碰撞氣:高純氬氣，流速0.14mL/min。 基質(zhì)效應(yīng)主要由基質(zhì)成分和目標(biāo)化合物在電噴霧離子源進(jìn)行離子化時(shí)相互競(jìng)爭(zhēng) 造成，包括基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)和基質(zhì)抑制效應(yīng)。在液相色譜-質(zhì)譜的定性定量分析中，基質(zhì)效應(yīng) 影響儀器的靈敏度和重復(fù)性，是影響準(zhǔn)確定性及定量的重要因素。因此，在建立檢測(cè)方法時(shí) 應(yīng)考慮基質(zhì)效應(yīng)的影響并采取措施進(jìn)行消除。本專(zhuān)利技術(shù)采用同一來(lái)源的空白樣品配制標(biāo)準(zhǔn)樣 品，以抵消基質(zhì)效應(yīng)對(duì)方法精密度及結(jié)果準(zhǔn)確度造成的影響。本專(zhuān)利技術(shù)采用QuEChERS前處理方法結(jié)合液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法建立了葡萄中赤霉 素殘留的快速檢測(cè)，采用乙腈為提取劑，PSA吸附劑和ODS吸附劑與無(wú)水硫酸鎂組合的提取、 凈化方法，不僅可除去提取液中水分、色素、蛋白質(zhì)、脂肪、臘質(zhì)等干擾物，而且有助于去除 對(duì)色譜柱性能有影響的雜質(zhì)，延長(zhǎng)色譜柱使用壽命。提取液凈化后不需濃縮處理，過(guò)濾膜后 直接進(jìn)樣檢測(cè)，操作簡(jiǎn)便、快速，大大簡(jiǎn)化了樣品前處理步驟，節(jié)約了時(shí)間。采用液相色譜質(zhì) 譜/質(zhì)譜檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，靈敏度高，方法的準(zhǔn)確度和精密度均符合殘留分析的要求。 實(shí)驗(yàn)證明，本專(zhuān)利技術(shù)回收率均達(dá)90 %以上，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD%低于10 %，在5~100μ g/L范圍內(nèi)線(xiàn)性良好，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.99，方法最低檢出限0.004yg/kg，完全滿(mǎn)足農(nóng)藥殘留 的檢測(cè)要求。【附圖說(shuō)明】 圖1為赤霉素的線(xiàn)性范圍。【具體實(shí)施方式】 下面結(jié)合實(shí)施例和附圖對(duì)本專(zhuān)利技術(shù)作進(jìn)一步說(shuō)明。 1、儀器與試劑 UPLC-MS/MS XEVO TQ超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(美國(guó)Waters公司）；立式大容 量高速離心機(jī)（日本Hitachi公司）;Milli-Q全自動(dòng)超純水制水機(jī)(美國(guó)Millipore公司）、天 平、漩渦混勻器。乙腈（HPLC級(jí)，美國(guó)Fi sher Sci ent if ic公司）；乙酸（HPLC級(jí)，美國(guó) J·T·Baker公司）；C18吸附劑（30~40μπι，天津博納艾杰爾有限公司）；PSA(粒徑范圍40~60μ m，天津博納艾杰爾有限公司）；無(wú)水硫酸鎂、氯化鈉(優(yōu)級(jí)純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公 司；氯化鈉140°C烘4~5h;實(shí)驗(yàn)用水為超純水(經(jīng)Milli-Q超純水機(jī)制備）。赤霉素標(biāo)樣為 Sigma公司產(chǎn)品，根據(jù)需要用甲醇配成合適的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，于-20°C冰箱中保存。 實(shí)施例1:葡萄中赤霉素殘留的檢測(cè) 1、樣品預(yù)處理 取代表性的待測(cè)樣品，經(jīng)縮分后，將其切碎，充分混勻放入食品加工器粉碎，均勻 分散，制成待測(cè)樣，備當(dāng)前第1頁(yè)1 2 本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種葡萄中赤霉素殘留的檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)樣品前處理：將待測(cè)樣品經(jīng)縮分后，將其切碎充分混勻，再粉碎制成待測(cè)樣，然后加入乙腈?1.5％醋酸提取液，無(wú)水硫酸鎂，高速勻漿、高速離心，靜置，接著取上清液加入C18、PSA和無(wú)水硫酸鎂，漩渦混勻，靜置，過(guò)有機(jī)微孔濾膜，待測(cè)；(2)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：將空白樣品按照樣品預(yù)處理，用所得的樣品溶液將赤霉素標(biāo)準(zhǔn)液逐級(jí)稀釋得到的濃度為5、10、20、50、100μg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液。(3)液相色譜?質(zhì)譜/質(zhì)譜測(cè)定：將標(biāo)準(zhǔn)溶液按濃度由低到高注入配有液相色譜?質(zhì)譜/質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)定，以定量離子峰面積?濃度作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)回歸方程；然后在相同條件下將前處理的樣品液注入液相色譜?質(zhì)譜/質(zhì)譜儀進(jìn)行測(cè)定，采用外標(biāo)法計(jì)算待測(cè)赤霉素殘留量的測(cè)定值。

【技術(shù)特征摘要】

【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李海飛，聶繼云，閆震，徐國(guó)鋒，毋永龍，李靜，李志霞，匡立學(xué)，李明強(qiáng)，程楊，沈友明，關(guān)棣凱，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹(shù)研究所，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：遼寧;21