本發(fā)明專利技術(shù)涉及植物保護領(lǐng)域，具體提供了一種煙粉虱成蟲的室內(nèi)生測方法，采用將成蟲置于-18℃冰箱內(nèi)30s的方法，使煙粉虱成蟲凍僵2-3min，操作簡便，且能夠減少生測過程中濕度及人為操作對供試煙粉虱產(chǎn)生的損傷及誤差。然后采用potter噴霧塔作為施藥工具施藥，施藥精確，能夠充分模擬田間施藥方式。本發(fā)明專利技術(shù)提供的煙粉虱成蟲室內(nèi)生物測定方法，能夠了解煙粉虱田間種群對不同作用機理藥劑的抗性水平及其分布，進而更科學(xué)地指導(dǎo)田間用藥。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中植物保護領(lǐng)域，特別是涉及一種煙粉虱成蟲的室內(nèi)生測方 法。
技術(shù)介紹
煙粉虱Bemi sia tabaci (Gennadius )是屬于同翅目（Homoptera)粉虱科 (Aleyrodidae)的多食性昆蟲，目前廣泛分布于100多個國家和地區(qū)，危害的寄主植物已 超過600種。煙粉虱除直接刺吸植物汁液、分泌蜜露引發(fā)霉污病外，更主要的是可傳播110 多種植物病毒并引發(fā)多種植物病毒病。當(dāng)前，煙粉虱的防治仍以化學(xué)防治為主，但其抗藥性 發(fā)展迅速，已對常用化學(xué)農(nóng)藥產(chǎn)生了高水平的單一抗性和交互抗性。 害蟲抗藥性監(jiān)測是害蟲抗性有效治理的重要基礎(chǔ)。生物測定作為害蟲抗藥性監(jiān)測 的重要技術(shù)手段，它不僅能反映害蟲對哪些殺蟲藥劑產(chǎn)生了抗性，而且能準(zhǔn)確給出抗性程 度，對于及時調(diào)整抗性治理策略具有重要的實踐意義。 關(guān)于煙粉虱生物測定技術(shù)主要有內(nèi)吸法、瓊脂保濕浸葉法、玻璃瓶藥膜法、黃粘膠 卡法等。其中內(nèi)吸法要求操作人員有較高的技術(shù)，因此應(yīng)用不多。瓊脂保濕浸葉法，只能測 定胃毒活性，不能測定觸殺活性。黃粘膠卡法溶劑昂貴、體積大、操作復(fù)雜。玻璃瓶藥膜法， 雖然操作簡便，但只能測定觸殺毒性，不能測定胃毒抗性。 目前關(guān)于檢測藥劑對煙粉虱成蟲生物活性的方法，主要是用C02麻醉成蟲后，轉(zhuǎn)移 到養(yǎng)蟲盒中的葉片上，這種方法不易操作，釋放C0 2的濃度和時間不易把握，對操作人員的 經(jīng)驗有較高的要求，稍有不慎則造成煙粉虱成蟲的非藥劑毒力死亡，這容易造成對所測試 藥劑的毒力水平的誤判。
技術(shù)實現(xiàn)思路
為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本專利技術(shù)的目的是提供一種煙粉虱成蟲室內(nèi)生物 測定的方法。為了實現(xiàn)本專利技術(shù)目的，本專利技術(shù)的技術(shù)方案如下： 一種煙粉虱成蟲室內(nèi)生物測定的方法，其特征在于，所述方法步驟包括準(zhǔn)備塑料養(yǎng)蟲 盒、在盒中放入試蟲、冷凍、噴施藥劑、在人工氣候箱內(nèi)觀察。 進一步地，所述方法包括如下步驟： ① 按照比例配制不同濃度梯度的藥劑； ② 制備1%瓊脂，將瓊脂平鋪在塑料養(yǎng)蟲盒底部； ③ 將黃瓜葉片背面朝上置于瓊脂上，以保持葉片新鮮； ④ 將煙粉虱成蟲輕輕拍入塑料養(yǎng)蟲盒，迅速用保鮮膜封口、扎緊，用解剖針扎數(shù)孔； ⑤ 將裝有煙粉虱成蟲的塑料養(yǎng)蟲盒置于-18 °C冰箱內(nèi)，使煙粉虱成蟲凍僵2-3 min卻 對死亡率沒有明顯影響； ⑥ 將步驟⑤塑料養(yǎng)蟲盒迅速置于potter噴霧塔下噴施藥劑，然后用保鮮膜重新封口， 扎緊； ⑦將步驟⑥塑料養(yǎng)蟲盒放入人工氣候箱內(nèi)，在光周期16: 8，溫度27°C，濕度70 %條件 下，分別飼養(yǎng)48 h后觀察、記載塑料養(yǎng)蟲盒內(nèi)煙粉虱的死亡情況，同時每天觀察葉片保鮮及 合成培養(yǎng)基的發(fā)霉情況。 進一步地，所述瓊脂的配制需加入硝酸鈣Ca(N03)2 4g、磷酸二氫鉀KH2P〇4 0.5g、硫 酸鎂MgS〇4 0.5g、硫酸鏈霉素50 mg以為葉片保鮮； 進一步地，所述成蟲置于_18°C冰箱內(nèi)30 s; 進一步地，所述potter噴霧塔的壓力和噴施劑量分別為68.9 Kpa和2ml; 本專利技術(shù)的有益效果在于:采用將成蟲置于_18°C冰箱內(nèi)30s的方法，使煙粉虱成蟲凍僵 2-3min，操作簡便，且能夠減少生測過程濕度及人為操作對供試煙粉虱產(chǎn)生的損傷及誤差。 然后采用poter噴霧塔作為施藥工具施藥，施藥精確，能夠充分模擬田間施藥方式。本專利技術(shù) 提供的煙粉虱成蟲室內(nèi)生物測定方法，能夠了解煙粉虱田間種群對不同作用機理藥劑的抗 性水平及其分布，進而更科學(xué)地指導(dǎo)田間用藥。 本專利技術(shù)提供的技術(shù)方案，既保證了煙粉虱的對照存活率，又保證了施藥的精確，同 時操作簡便，且免除了開放外界環(huán)境不確定因素對實驗結(jié)果的影響，符合生物實驗保持單 一變量的原則。【具體實施方式】 以下實施例用于說明本專利技術(shù)，但不用來限制本專利技術(shù)的范圍。 實施例1 啶蟲脒對田間煙粉虱的室內(nèi)毒力水平評估 1、研究對象:設(shè)施溫室內(nèi)黃瓜植株上的煙粉虱成蟲。 2、方法:供試藥劑為濃度大于20%的啶蟲脒制劑，采用potter噴霧塔法噴施煙粉 虱成蟲和葉片，進行室內(nèi)毒力測定。 2.1不同濃度藥液的配制及稀釋:在預(yù)試驗的基礎(chǔ)上用純凈水將倍內(nèi)威制劑稀釋6 個濃度，溶液中加入0.1% Trixon-100作為乳化劑，用含同等體積的Trixon-100清水為對 照。 2.2生物測定葉片的選擇及1%瓊脂的制備：制備含有硝酸鈣〇8(勵3)248、磷酸二氫 鉀KH 2P〇4 0.5g、硫酸鎂MgS〇4 0.5g、硫酸鏈霉素50 mg的1%瓊脂，將瓊脂平鋪在塑料養(yǎng)蟲盒底 部。將黃瓜葉片背面朝上置于瓊脂上。 2.3毒力測定供試煙粉虱的選擇:選用設(shè)施溫室內(nèi)黃瓜葉片上煙粉虱成蟲，將煙粉 虱成蟲輕輕拍入塑料養(yǎng)蟲盒內(nèi)，每個養(yǎng)蟲盒內(nèi)大約拍入20頭成蟲。迅速用保鮮膜封口、扎 緊，用解剖針扎數(shù)孔以透氣。 2.4試蟲的冷凍處理:將裝有煙粉虱成蟲的塑料養(yǎng)蟲盒置于-18°C冰箱內(nèi)，使煙粉 虱成蟲凍僵2_3min，卻對死亡率沒有明顯影響； 2.5 potter噴霧塔法噴施煙粉虱成蟲和葉片:將步驟2.4冷凍處理的塑料養(yǎng)蟲盒打開， 迅速置于potter噴霧塔下噴施藥劑2ml，所用壓力為68.9 Kpa，然后用保鮮膜重新封口，扎 緊； 2.6結(jié)果檢查及死亡標(biāo)準(zhǔn)判斷:48h后檢查結(jié)果，用毛筆輕觸煙粉虱，只有一條腿動或 者完全不動的記為死亡，以對照死亡率小于10%為有效測定。每個濃度4次重復(fù)，數(shù)據(jù)采用 POLO分析軟件，計算LC5Q。（結(jié)果如表1)。表1啶蟲脒對田間煙粉虱的室內(nèi)毒力測定結(jié)果從表1結(jié)果可以看出，利用本專利技術(shù)的生物測定方法，對照煙粉虱成蟲的死亡率小于10%， 說明-18°c處理煙粉虱成蟲2-3min的方法對煙粉虱成蟲的死亡率影響甚微。所使用的含有 硝酸鈣Ca(N03)2、磷酸二氫鉀KH 2P〇4、硫酸鎂MgS〇4和硫酸鏈霉素的1%瓊脂，能夠長時間有效 地保持黃瓜葉片的新鮮度，沒有發(fā)霉和腐爛，該方法同樣具有操作簡便，重復(fù)性好，結(jié)果準(zhǔn) 確等優(yōu)點。 實施例2 采用瓊脂保濕浸葉法評估啶蟲脒對田間煙粉虱的毒力水平 1、研究對象:設(shè)施溫室內(nèi)黃瓜植株上的煙粉虱成蟲。 2、方法:供試藥劑為濃度大于20%的啶蟲脒制劑，采用瓊脂保濕浸葉法處理葉片 飼喂煙粉虱成蟲，進行室內(nèi)毒力測定。 2.1不同濃度藥液的配制及稀釋:在預(yù)試驗的基礎(chǔ)上用純凈水將倍內(nèi)威制劑稀釋6 個濃度，溶液中加入0.1% Trixon-100作為乳化劑，用含同等體積的Trixon-100清水為對 照。 2.2生物測定葉片的選擇及1%瓊脂的制備:制備1%的瓊脂，將瓊脂平鋪在塑料養(yǎng)蟲 盒底部。將黃瓜葉片用各濃度的藥液浸漬處理10 s，晾干，背面朝上置于瓊脂上。 2.3毒力測定供試煙粉虱的選擇:選用設(shè)施溫室內(nèi)黃瓜葉片上煙粉虱成蟲，將煙粉 虱雌成蟲用C02短暫麻醉后，轉(zhuǎn)移到養(yǎng)蟲盒中的小圓葉片上，每養(yǎng)蟲盒20-30只雌成蟲，迅 速用保鮮膜封口、扎緊，用解剖針扎數(shù)孔以透氣。當(dāng)煙粉虱從麻醉狀態(tài)恢復(fù)過來后，將養(yǎng)蟲 盒倒置于(25 ± 1) °C、相對濕度65%、光照14:10 (L: D)的培養(yǎng)箱中。 2.4結(jié)果檢查及死亡標(biāo)準(zhǔn)判斷：48h后檢查結(jié)果，用毛筆輕觸煙粉虱，只有一條腿 動或者完全不動的記為死亡，以對照死亡率小于10%為有效測定。每個濃度4次重復(fù)，數(shù)據(jù) 采用POLO分析軟件，本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
一種煙粉虱成蟲室內(nèi)生物測定的方法，其特征在于，所述方法步驟包括準(zhǔn)備塑料養(yǎng)蟲盒、在盒中放入試蟲、冷凍、噴施藥劑、在人工氣候箱內(nèi)觀察。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王澤華，魏書軍，宮亞軍，陳金翠，金桂華，康總江，朱亮，
申請(專利權(quán))人：北京市農(nóng)林科學(xué)院，
類型：發(fā)明
國別省市：北京;11
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