本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種液相色譜法檢測牛奶中磺胺類藥物殘留的樣品前處理方法，包括：取1至5克待測牛奶樣品，加入10至30mL乙腈，渦旋混合1至5分鐘，再于8000至10000轉(zhuǎn)/分鐘離心3至5分鐘，取上清液；并向離心后的殘?jiān)屑尤胍译嬷貜?fù)提取一次；合并兩次所得的上清液；將合并后的上清液在40至50℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干；再用0.1至0.2mol/L鹽酸水溶液2至5mL清洗兩次旋蒸瓶、正己烷3至5mL清洗兩次旋蒸瓶；合并清洗液并渦旋混合30至120秒，再離心；離心后棄正己烷層，取下層液；將下層液用MCX固相萃取柱凈化，得到凈化液；將凈化液于40至50℃氮?dú)獯蹈桑儆?.1%甲酸乙腈溶液1.0至5mL溶解。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種檢測牛奶中藥物殘留的樣品前處理方法及檢測方法，尤其適用于牛奶中磺胺類藥物的檢測。
技術(shù)介紹
目前，牛奶中磺胺類藥物殘留檢測方法以GB/T22966-2008《牛奶和奶粉中16種磺胺類藥物殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》的方法為主，因其檢測需要質(zhì)譜，價(jià)格昂貴，且對化驗(yàn)員的水平要求較高，無法在一般中、小企業(yè)中進(jìn)行推廣；該方法使用危險(xiǎn)性較高的藥品-高氯酸，因?yàn)楦呗人峥芍迹邚?qiáng)腐蝕性、強(qiáng)刺激性，可致人體灼傷，會給化驗(yàn)室?guī)戆踩[患。GB29694-2013《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)動物性食品中13種磺胺類藥物多殘留的測定-高效液相色譜法》中檢驗(yàn)方法適用于肌肉和肝臟組織的檢測，由于牛奶與肉類化學(xué)成分的差異，使用這種方法應(yīng)用于牛奶檢測時(shí)回收率無法滿足檢測要求。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是提供一種液相色譜法檢測牛奶中磺胺類藥物殘留的樣品前處理方法，安全性高，可較完全地提取牛奶樣品中的磺胺類藥物。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供一種液相色譜法檢測牛奶中磺胺類藥物殘留的方法，成本低，安全性高，檢測的回收率和精密度較好。本專利技術(shù)提供了一種液相色譜法檢測牛奶中磺胺類藥物殘留的樣品前處理方法，包括：取1至5克待測牛奶樣品，加入10至30mL乙腈，渦旋混合1至5分鐘，再于8000至10000轉(zhuǎn)/分鐘離心3至5分鐘，取上清液；并向離心后的殘?jiān)屑尤胍译?0至30毫升，渦旋混合1至5分鐘，再于8000至10000轉(zhuǎn)/分鐘離心3至5分鐘，取上清液；合并兩次所得的上清液；將合并后的上清液置于旋蒸瓶中，在40至50℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干；再依次用0.1至0.2mol/L鹽酸水溶液2至5mL、0.1至0.2mol/L鹽酸水溶液2至5mL、正己烷3至5mL和正己烷3至5mL分別清洗旋蒸瓶；所得清洗液合并至同一離心管中，渦旋混合30至120秒，再于8000至10000轉(zhuǎn)/分鐘離心3至5分鐘；離心后棄正己烷層，取下層液；將下層液用MCX固相萃取柱凈化，得到凈化液；以及將凈化液于40至50℃氮?dú)獯蹈桑儆?.1%甲酸乙腈溶液1.0至5mL溶解；其中0.1%甲酸乙腈溶液的配制方法為：取0.1%甲酸水溶液830mL，用乙腈溶解并稀釋至1000mL。在樣品前處理方法的一種示意性實(shí)施方式中，用MCX固相萃取柱凈化的步驟為：先將MCX固相萃取柱依次用甲醇2至5mL和0.1mol/L鹽酸水溶液2至5mL活化；將下層液過活化后的MCX固相萃取柱，控制流速1至2mL/分鐘；依次用0.1至0.2mol/L鹽酸水溶液1至2mL和50%甲醇乙腈溶液2至4mL淋洗MCX固相萃取柱；50%甲醇乙腈溶液的配制方法為：取甲醇50mL，用乙腈溶解并稀釋至100mL；以及最后用4mL洗脫液洗脫，洗脫液的配制方法為：取氨水5mL，用甲醇溶解并稀釋至100mL。在樣品前處理方法的一種示意性實(shí)施方式中，磺胺類藥物包括：磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺異噁唑、磺胺甲噁唑、苯酰磺胺和磺胺二甲氧噠嗪。本專利技術(shù)還提供了一種液相色譜法檢測牛奶中磺胺類藥物殘留的方法，其特征在于，先根據(jù)上述的樣品前處理方法對待測牛奶樣品進(jìn)行前處理，再用液相色譜法進(jìn)行檢測。在液相色譜法檢測牛奶中磺胺類藥物殘留的方法的一種示意性實(shí)施方式中，液相色譜的色譜條件為：柱溫箱：30至45℃；紫外檢測器檢測波長：270nm；進(jìn)樣量：20至50μL；色譜柱：C18或C8，規(guī)格為250×4.6mm，5μm；流動相：0.1%甲酸水溶液和乙腈；流速：1.0至1.5mL/分鐘；洗脫梯度：時(shí)間，min0.1%甲酸水溶液，%乙腈，%0.0078至8812至225.0078至8812至2210.0075至8515至2522.3055至6535至4522.405至1585至9530.005至1585至9531.0078至8812至2248.0078至8812至22本專利技術(shù)提供的一種液相色譜法檢測牛奶中磺胺類藥物殘留的樣品前處理方法，操作過程中無需使用危險(xiǎn)性較高的高氯酸，安全性較高，且可較完全地提取牛奶樣品中的磺胺類藥物。使用該樣品前處理方法進(jìn)行牛奶中磺胺類藥物殘留的液相色譜法檢測，安全性高，檢測的回收率和精密度較好。由于本專利技術(shù)的檢測方法無需使用質(zhì)譜檢測器，也降低了檢測成本。具體實(shí)施方式為了對專利技術(shù)的技術(shù)特征、目的和效果有更加清楚的理解，現(xiàn)結(jié)合以下實(shí)施例說明本專利技術(shù)的具體實(shí)施方式。雖然以下實(shí)施例采用了帶有紫外檢測器的色譜系統(tǒng)，但目的是便于說明本專利技術(shù)的技術(shù)方案、便于比較檢測的效果，并非用于限定本專利技術(shù)。本領(lǐng)域的技術(shù)人員可以用質(zhì)譜檢測器或其他適合磺胺藥物的檢測器代替紫外檢測器，也可以實(shí)施本專利技術(shù)的檢測方法。實(shí)施例1。一、試劑：0.1%甲酸溶液：取甲酸1mL，用水溶解并稀釋至1000mL；0.1%甲酸乙腈溶液：取0.1%甲酸水溶液830mL，用乙腈溶解并稀釋至1000mL；洗脫液：取氨水5mL，用甲醇溶解并稀釋至100mL；50%甲醇乙腈溶液：取甲醇50mL，用乙腈溶解并稀釋至100mL。二、樣品前處理方法：1、取1克待測牛奶樣品，加入30mL乙腈，渦旋混合5分鐘，再于10000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，取上清液；2、向離心后的殘?jiān)屑尤胍译?0毫升，渦旋混合5分鐘，再于10000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，取上清液；合并兩次所得的上清液；3、將合并后的上清液置于旋蒸瓶中，在40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干；再依次用0.2mol/L鹽酸水溶液2mL、0.2mol/L鹽酸水溶液2mL、正己烷3mL和正己烷3mL分別清洗旋蒸瓶；所得清洗液合并至同一離心管中，渦旋混合30秒，再于8000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘；離心后棄正己烷層，取下層液；4、將下層液用MCX固相萃取柱凈化，得到凈化液，具體步驟如下：4.1先將MCX固相萃取柱依次用甲醇5mL和0.1mol/L鹽酸水溶液2mL活化；4.2將下層液過活化后的MCX固相萃取柱，控制流速1mL/分鐘；4.3依次用0.2mol/L鹽酸水溶液1mL和50%甲醇乙腈溶液2mL淋洗MCX固相萃取柱；4.4最后用4mL洗脫液洗脫；5、將凈化液于40℃氮?dú)獯蹈桑儆?.1%甲酸乙腈溶液1mL溶解，濾膜過濾，得到待測液，供高效液相色譜測定。三、高效液相色譜法（HPLC）檢測。使用戴安公司高效液相色譜儀，配紫外檢測器。設(shè)定色譜條件如下：柱溫箱：30℃；紫外檢測器檢測波長：270nm；進(jìn)樣量：20μL；色譜柱：C8，規(guī)格為250×4.6mm，5μm；流動相：0.1%甲酸水溶液和乙腈；流速：1mL/分鐘；洗脫梯度：時(shí)間（min）0.1%甲酸水溶液（%）乙腈（%）0.0083175.00831710.00802022.30604022.40109030.00109031.00831748.008317檢測目標(biāo)物質(zhì)：磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺噁唑本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種液相色譜法檢測牛奶中磺胺類藥物殘留的樣品前處理方法，其特征在于，包括：取1至5克待測牛奶樣品，加入10至30?mL乙腈，渦旋混合1至5分鐘，再于8000至10000轉(zhuǎn)/分鐘離心3至5分鐘，取上清液；并向離心后的殘?jiān)屑尤胍译?0至30毫升，渦旋混合1至5分鐘，再于8000至10000轉(zhuǎn)/分鐘離心3至5分鐘，取上清液；合并兩次所得的上清液；將合并后的所述上清液置于旋蒸瓶中，在40至50℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干；再依次用0.1至0.2mol/L鹽酸水溶液2至5mL、0.1至0.2mol/L鹽酸水溶液2至5mL、正己烷3至5mL和正己烷3至5mL分別清洗旋蒸瓶；所得清洗液合并至同一離心管中，渦旋混合30至120秒，再于8000至10000轉(zhuǎn)/分鐘離心3至5分鐘；離心后棄正己烷層，取下層液；將所述下層液用MCX固相萃取柱凈化，得到凈化液；以及將所述凈化液于40至50℃氮?dú)獯蹈桑儆?.1%甲酸乙腈溶液1.0至5mL溶解；其中所述0.1%甲酸乙腈溶液的配制方法為：取0.1%甲酸水溶液830mL，用乙腈溶解并稀釋至1000mL。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種液相色譜法檢測牛奶中磺胺類藥物殘留的樣品前處理方法，其特征在于，包括：
取1至5克待測牛奶樣品，加入10至30mL乙腈，渦旋混合1至5分鐘，再于8000至10000轉(zhuǎn)/分鐘離心3至5分鐘，取上清液；并向離心后的殘?jiān)屑尤胍译?0至30毫升，渦旋混合1至5分鐘，再于8000至10000轉(zhuǎn)/分鐘離心3至5分鐘，取上清液；合并兩次所得的上清液；
將合并后的所述上清液置于旋蒸瓶中，在40至50℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干；再依次用0.1至0.2mol/L鹽酸水溶液2至5mL、0.1至0.2mol/L鹽酸水溶液2至5mL、正己烷3至5mL和正己烷3至5mL分別清洗旋蒸瓶；所得清洗液合并至同一離心管中，渦旋混合30至120秒，再于8000至10000轉(zhuǎn)/分鐘離心3至5分鐘；離心后棄正己烷層，取下層液；
將所述下層液用MCX固相萃取柱凈化，得到凈化液；以及
將所述凈化液于40至50℃氮?dú)獯蹈桑儆?.1%甲酸乙腈溶液1.0至5mL溶解；其中所述0.1%甲酸乙腈溶液的配制方法為：取0.1%甲酸水溶液830mL，用乙腈溶解并稀釋至1000mL。
2.如權(quán)利要求1所述的樣品前處理方法，其中，所述用MCX固相萃取柱凈化的步驟為：
先將MCX固相萃取柱依次用甲醇2至5mL和0.1mol/L鹽酸水溶液2至5mL活化；
將所述下層液過活化后的MCX固相萃取柱，控制流速1至2mL/分鐘；
依次用0.1至0.2mol/L鹽酸水溶液1至2m...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王偉，張鵬飛，王丹慧，李梅，
申請(專利權(quán))人：內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)集團(tuán)股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：內(nèi)蒙古;15
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