一種抗刺激隱核蟲珍珠龍膽石斑魚苗種的生產(chǎn)方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種抗刺激隱核蟲珍珠龍膽石斑魚苗種的生產(chǎn)方法，屬于抗病性魚苗生產(chǎn)領(lǐng)域，具體為抗刺激隱核蟲魚苗生產(chǎn)領(lǐng)域。首次采用變溫感染和變溫養(yǎng)殖的方式來生產(chǎn)抗病性的珍珠龍膽石斑魚苗種，感染時(shí)的水溫與感染后10天內(nèi)的養(yǎng)殖水溫保持一定溫差，從而增強(qiáng)刺激隱核蟲活幼蟲的免疫效果，進(jìn)而與輪換養(yǎng)殖結(jié)合，獲得了有效免疫保護(hù)期較長(zhǎng)的抗刺激隱核蟲珍珠龍膽石斑魚苗種，免疫后第8個(gè)月還具有58％的相對(duì)保護(hù)率，第9個(gè)月仍有32％的相對(duì)保護(hù)率。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種抗刺激隱核蟲珍珠龍膽石斑魚苗種的生產(chǎn)方法，包括以下四個(gè)步驟：(1)刺激隱核蟲活幼蟲的收集和濃度計(jì)算利用專門的刺激隱核蟲傳代系統(tǒng)對(duì)刺激隱核蟲進(jìn)行傳代和收集，其傳代宿主為卵形鯧鲹，采集發(fā)育良好的刺激隱核蟲包囊，置于消過毒的干凈燒杯中孵化，孵化用水為高壓滅菌的、加入適量青霉素和鏈霉素的自然海水；收集孵出2小時(shí)內(nèi)的刺激隱核蟲幼蟲液，充分混勻后取50μL蟲液，加10μL甲醛將幼蟲殺死，在顯微鏡下計(jì)數(shù)，記算出幼蟲液的活蟲濃度。(2)珍珠龍膽石斑魚苗種馴養(yǎng)、感染購(gòu)置13g左右的珍珠龍膽石斑魚苗種，感染前2周對(duì)魚苗進(jìn)行試養(yǎng)馴化，直至其進(jìn)食、活動(dòng)正常，在整個(gè)養(yǎng)殖過程中，飼養(yǎng)用水用600目的濾網(wǎng)過濾，其鹽度在30‰左右，pH為8左右，溶氧量在5.6mg/L以上；將珍珠龍膽石斑魚苗種分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組(第1?9組)共十個(gè)小組，實(shí)驗(yàn)組每組魚苗用孵出2小時(shí)內(nèi)的刺激隱核蟲幼蟲感染，感染時(shí)水溫第1?3組為24℃、第4?6組為27℃、第7?9組為30℃，感染用水量為1L海水/尾魚，感染劑量為8000個(gè)幼蟲/尾魚；感染6小時(shí)后分別把魚苗放入不同的輪養(yǎng)池中，其中第1、4、7組水溫控制在24℃，第2、5、8組水溫控制在27℃，第3、6、9組水溫控制在30℃；對(duì)照組不進(jìn)行刺激隱核蟲感染，養(yǎng)殖水溫為27℃。輪養(yǎng)池長(zhǎng)40米，寬1.5米，高1米，池中間用密封隔板將養(yǎng)殖池一分為二，保證兩側(cè)水不互通，感染后的魚苗全部放置在池的一側(cè)，加入終濃度為2ppm的聚維酮碘溶液(有效碘含量為10％)預(yù)防繼發(fā)感染。(3)感染后珍珠龍膽石斑魚苗種的輪換養(yǎng)殖為了保證珍珠龍膽石斑魚苗種不被脫落的刺激隱核蟲包囊孵出的幼蟲再次感染，每2天要將苗種置換到干凈的池中養(yǎng)殖，對(duì)照組魚種按同樣方法換池；?具體方法為：將輪養(yǎng)池中間的密封隔板拔出，采用誘食和驅(qū)趕方法將全部魚苗集中到池的另一側(cè)，插上密封隔板，加入終濃度為2ppm的聚維酮碘溶液(有效碘含量為10％)預(yù)防繼發(fā)感染；排凈原來養(yǎng)魚一側(cè)的海水，加入30cm深的淡水，浸泡8小時(shí)，即可殺滅所有粘附于池底的刺激隱核蟲包囊，刷洗后排凈淡水，加注干凈海水待下一次使用；按上述方法輪換養(yǎng)殖5次，魚體上的刺激隱核蟲全部脫落，整個(gè)輪換養(yǎng)殖過程均保持以上的控溫方式；此后將免疫過的魚苗全部放入干凈的養(yǎng)殖池中養(yǎng)殖，不必控溫，保持自然水溫。(4)致死劑量的測(cè)定和有效免疫保護(hù)期的測(cè)定珍珠龍膽石斑魚致死劑量的測(cè)定在攻毒前兩周進(jìn)行，從空白對(duì)照組隨機(jī)取50尾魚，分為10組，每組5尾，在塑料桶內(nèi)分開喂養(yǎng)。在幼蟲脫包高峰期，收集和計(jì)數(shù)2小時(shí)內(nèi)脫包的活躍幼蟲，分別用設(shè)定好的劑量梯度感染10組魚，感染用水量為1L海水/尾魚。統(tǒng)計(jì)一周內(nèi)各組魚的死亡數(shù)，能使5尾珍珠龍膽石斑魚全部死亡的最低感染劑量就是該魚的刺激隱核蟲致死劑量；攻毒：每30天從對(duì)照組和每組免疫過的魚苗中各取50尾魚，用致死劑量的刺激隱核蟲幼蟲攻毒。攻毒時(shí)空白對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組混養(yǎng)在一起，海水用量仍為每尾魚1L，同時(shí)用致死劑量的幼蟲進(jìn)行感染攻毒，統(tǒng)計(jì)各個(gè)實(shí)驗(yàn)組7天內(nèi)實(shí)驗(yàn)魚的死亡情況，計(jì)算免疫9個(gè)月內(nèi)的相對(duì)保護(hù)率，刺激隱核蟲攻毒后實(shí)驗(yàn)魚的相對(duì)保護(hù)率(RPS)，RPS＝(對(duì)照組死亡率?免疫組死亡率)/對(duì)照組死亡率×100％；最后，根據(jù)有效免疫保護(hù)期的測(cè)定結(jié)果，選擇能讓珍珠龍膽石斑魚獲得最長(zhǎng)有效免疫保護(hù)期的變溫感染、養(yǎng)殖方法，來生產(chǎn)抗刺激隱核蟲的珍珠龍膽石斑魚苗種；采用該方法可生產(chǎn)出免疫保護(hù)力高達(dá)8個(gè)月以上的抗刺激隱核蟲的珍珠龍膽石斑魚苗種。...

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：但學(xué)明，李安興，李言偉，莫澤權(quán)，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，中山大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：廣東;44