本發明專利技術提供了一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的檢測試劑盒，其特征在于：包括試劑1和試劑2；所述試劑1包括：10-100?mmol/L的緩沖液、0.1-1%w/v的增濁劑、0.01-0.05%w/v的防腐劑；所述試劑2包括：0.1-0.5%w/v標記有抗人中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的致敏膠乳顆粒、0.1-5%w/v的穩定物質、10-100?mmol/L的緩沖液、0.01-0.05%w/v的防腐劑。所述的膠乳顆粒包括兩種不同粒徑的膠乳顆粒，且兩種粒徑的膠乳顆粒以合適的比例混合。該試劑盒靈敏度高、線性范圍廣、精密度好，適用于全自動生化分析儀。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物檢測領域，具體而言，涉及檢測一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的檢測試劑盒。
技術介紹
隨著人民生活水平的不斷提高，以及生活習慣和飲食習慣的逐漸改變，腎臟疾病的發病率逐年增高。腎臟疾病大多繼發于糖尿病、高血壓、免疫傷害和細菌感染，其病因復雜、病程遷延，并且增加心血管疾病的危險性，已經成為全球性公共健康問題。腎臟疾病可分為兩個主要的癥候群——急性腎損傷（acutekidneyinjury，AKI)和慢性腎臟病(chronickidneydisease，CKD)。AKI是指突發(1-7d)和持續(＞24h)的腎功能下降的一組臨床綜合征，表現為氮質血癥、水電解質和酸堿平衡紊亂以及全身各系統癥狀，可伴有少尿或無尿，是臨床常見的急危重癥之一。AKI的總體發病率約為1%，而住院病人的發病率高達15%，每年引起全球200萬人死亡。越來越多的AKI遠期預后研究顯示，AKI與隨后發生的CKD具有顯著地相關性，AKI可能導致CKD的發生。2012年，王海燕教授等在《柳葉刀》雜志上發表的首個全國性CKD橫斷面調查表明，中國CKD患病率高達10.8%，患者預計近1.2億，但知曉率卻僅為12.5%，且多數為腎功能明顯受損時才發現。因此尋找一種可靠的生物標志物，在腎臟疾病發展早期進行有效診斷，對其治療和預后具有十分重要的臨床意義。1993年，Kjeldsen等人在研究人類中性粒細胞明膠酶時，從活化的中性粒細胞的上清液中分離純化了一種25kD的蛋白質，并命名為中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白（neutrophilgelatinase-associatedlipocalin，NGAL）。后期的研究發現，NGAL具有多種重要的生理作用，其異常表達對腎臟疾病的早期診斷和預后判斷具有非常重要的意義。NGAL主要由成熟粒細胞的前體細胞中幼粒細胞和晚幼粒細胞合成，存在于中性粒細胞特殊顆粒中，除中性粒細胞外，NGAL在人類多種組織（如子宮、前列腺、唾液腺、肺、氣管、胃、結腸和腎等）的上皮細胞中均存在不同程度的表達。在正常腎組織中NGAL呈低水平表達，當接觸腎毒性物質或發生缺血性損傷后，皮質腎小管、血液、尿液中會出現NGAL大量蓄積，并可在損傷后3小時的尿液和血清中檢測到NGAL。雖然AKI在早期常常是可逆的，而且治療上也取得了很大的進步，然而發病率和病死率依然沒有顯著改善，原因就是無法早期發現腎損傷。目前，腎臟疾病的診斷主要依賴血清肌酐（serumcreatinine，Scr），但Scr相對AKI是一種不敏感且比較滯后的標志物。當AKI發展至Scr升高時，很可能就錯過了治療的關鍵時期。這就促使人們尋找更敏感的標志物，而NGAL則是眾多新標志物中最有潛力的一種。NGAL參與腎臟的發生和發育，是急性腎損傷（Acutekidneyinjury，AKI）的早期標志物。特別是在急診科監測尿NGAL水平比依賴Scr水平升高能更好地評估AKI患者的病情，可幫助臨床醫師決定是否需要腎臟專科醫師會診、收住ICU、行腎臟替代治療（RRT）等處理，甚至可以預測患者的病死率。研究顯示，AKI患者血漿和尿NGAL水平比SCr提前一天達到高峰，在全身嚴重性多發傷的患者中，創傷發生1天后檢測尿NGAL發現，發生AKI的多發傷患者尿NGAL濃度顯著高于未發生AKI的患者，且這種高水平可持續2天。NGAL和Scr的受試者ROC曲線預測AKI時，NGAL的曲線下面積（AUC）顯著高于Scr。血漿NGAL高峰濃度隨著AKI嚴重程度的增加而增加。從急診科收入院的患者，檢測其血NGAL濃度還有助于預測在院期間的病死率。在一項多中心前瞻性研究中，從急診科收入院患者，連續采集血液標本，NGAL的AUC較Scr和腎小球濾過率(GFR)更高。連續監測NGAL有較高的陰性預測值（98%），能在患者到達急診科6小時內排除。隨著NGAL研究進一步深入，研究人員發現NGAL不僅是AKI的血清標志物，還與慢性腎臟疾病（CKD）的進展有關。在CKD患者中血漿NGAL水平顯著升高，且和Scr及估算的腎小球濾過率（eGFR）相關性較強，是反映CKD進展的獨立風險因素。有研究證明，腎小管在CKD的發生及發展中起到關鍵作用——引起進行性腎功能破壞的致病機制的一個共同特點是作用于腎小管間質途徑的腎小管萎縮和缺氧，腎小管周圍毛細血管損傷和間質纖維化，最終演化為不可逆的終末期尿毒癥。根據這一觀點，腎小管間質的損傷與腎小球病變的嚴重程度相比，能夠更準確的反映腎臟損傷的速率及程度。損傷的腎小管上皮細胞表達的NGAL可誘導腎小管間質中浸潤的中性粒細胞發生凋亡以保護腎組織免受炎細胞的損害。同時誘導腎間充質細胞向腎小管上皮細胞轉化，促進腎小管上皮細胞再生，抑制腎臟纖維化等，這可能是機體在腎臟缺血再灌注損傷后啟動的一種保護機制，所以在腎臟損傷的早期NGAL水平保護性升高。在缺血和腎毒性損害的動物腎臟模型中，應用基因芯片技術分析發現，NGAL是出現最早和表達最顯著的基因和蛋白之一，很容易在血液和尿液標本中檢測到其升高，因此NGAL可作為CKD早期篩查的指標。至今，早期CKD診斷仍然主要靠GFR相關實驗室檢查給予臨床醫生提示。然而，如以現有的腎功能檢測手段發現異常，大多數病人已經丟失了50%以上的腎功能，以至于很多患者錯過了最佳的治療時機。為此，尋求簡便、快速、準確的GFR實驗室檢測方法或指標勢在必行。NGAL能迅速、靈敏、特異的反映腎臟損傷及修復過程。NGAL相對其他指標能夠更準確的評估CKD患者的GFR，反映CKD的病情進展及嚴重程度。為了更好地研究NGAL的生物學功能，建立高靈敏、高特異性的NGAL檢測方法是一件非常有意義的事情。NGAL的檢測最初采用WesternBlot法，但由于該方法靈敏度和精密度低、操作復雜、重復性差等缺點現在已很少用于NGAL的定量研究。2005年丹麥BioPorto公司首先推出ELISA商品試劑盒，可用于血清(漿)、尿液的NGAL檢測，標本量需100μL，檢測周期約4h，檢測限達到0.1ng/ml。但是ELISA的方法因手工操作，不只是檢測步驟繁瑣、樣本周轉時間長，而且影響因素較多，重復性也不夠好，更與操作人員的熟練程度和手法的一致性有很大的關系，逐漸被自動化的化學發光檢測系統替代，如美國雅培公司的Architecti2000SR全自動免疫分析儀測定尿液NGAL(化學發光微粒子免疫分析法)，標本量需150μL，檢測周期約28min；美國博適公司的Triage分析儀檢測EDTA抗凝血漿或全血(雙抗體夾心免疫熒光層析法)，15min即可完成NGAL的本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的檢測試劑盒，其特征在于：包括試劑1和試劑2；所述試劑1包括：10?100?mmol/L的緩沖液、0.1?1%w/v的增濁劑、0.01?0.05%w/v的防腐劑；所述試劑2包括：0.1?0.5%w/v標記有抗人中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白抗體的致敏膠乳顆粒、0.1?5%w/v的穩定物質、10?100?mmol/L的緩沖液、0.01?0.05%w/v的防腐劑；所述的膠乳顆粒包括兩種不同粒徑的膠乳顆粒，且兩種粒徑的膠乳顆粒以合適的比例混合。
【技術特征摘要】
1.一種中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的檢測試劑盒，其特征在于：包括試劑1和
試劑2；所述試劑1包括：10-100mmol/L的緩沖液、0.1-1%w/v的增濁劑、0.01-0.05%w/v的防
腐劑；所述試劑2包括：0.1-0.5%w/v標記有抗人中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白抗體
的致敏膠乳顆粒、0.1-5%w/v的穩定物質、10-100mmol/L的緩沖液、0.01-0.05%w/v的防腐
劑；所述的膠乳顆粒包括兩種不同粒徑的膠乳顆粒，且兩種粒徑的膠乳顆粒以合適的比例
混合。
2.根據權利要求1所述的中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的檢測試劑盒，其特征
在于：所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、HEPES緩沖液、MES中的一種
或多種；所述緩沖液pH值為6.5-8.5。
3.根據權利要求1所述的中性粒細胞明膠酶相關脂質運載蛋白的檢測試劑盒，其特征
在于：所述增濁劑是聚乙二醇2000、聚乙二醇6000，或者兩種組合。
4.根據權利要求1...
【專利技術屬性】
技術研發人員：梅義武，劉興，葉佳穎，
申請(專利權)人：浙江卓運生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：浙江;33
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