一種布魯氏菌Omp10蛋白抗原表位多肽及其應用制造技術

本發明專利技術公開一種布魯氏菌Omp10蛋白抗原表位多肽及其應用。本發明專利技術的多肽是：其氨基酸序列中含有SEQ?ID?N0.1或/和SEQ?ID?N0.2或/和SEQ?ID?N0.3或/和SEQ?ID?N0.4或/和SEQ?ID?N0.5，或者由前述序列經過一個或/和幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失形成的序列形成的多肽，也可以是前述序列和添加有具有布魯氏菌免疫源性功能的衍生的多肽。本發明專利技術的多肽可以構成的重組載體或表達盒或轉基因細胞或重組菌。而本發明專利技術所涉及的各多肽可在制備診斷或預防或治療布魯氏菌引起的疾病的試劑或藥物中的應用。本發明專利技術篩選多肽為化學合成，經刺激DC后可釋放出高濃度的IL-4，可作為目的抗原檢測檢測布魯氏菌病感染的血清，或制備Omp10蛋白單克隆抗體的抗原。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種多肽，確切講是一種布魯氏菌Omp10蛋白抗原表位多肽及其應用。
技術介紹
布魯氏菌（Brucella)，革蘭氏陰性兼性細胞內寄生菌，是嚴重的人獸共患病，廣泛感染家畜、野生動物和人，家畜動物布魯氏菌主要感染羊、牛和豬，其中對人致病的主要有馬耳他布魯氏菌和流產布魯氏菌；布魯氏菌病感染家畜引起公畜的附睪炎和懷孕家畜的流產、胎盤炎癥和不育；對于人類，布魯氏菌病課引起急性炎癥和許多類似流感感染的癥狀，包括波浪熱、多汗、背疼和體質虛弱，在一些病人身上，急性臨床癥狀可持續一年以上最終導致慢性的持續性感染，慢性臨床癥狀包括不規則的發熱、關節疼、乏力，并發引起關節炎、區部末梢神經炎癥、脊柱炎、骨髓炎和粘液囊炎，布魯氏菌病的流行不僅危害著畜牧業的發展，造成了巨大的經濟損失，而且嚴重威脅著人類的健康和公共衛生安全。目前，全世界用于預防布魯氏菌病的有效疫苗均為減毒的活疫苗，各種疫苗的使用不僅干擾著疫苗免疫和自然感染的鑒別診斷，而且所有的疫苗株不同程度的對人有致病毒力，甚至有些疫苗對人為強致病力，安全可靠的滅活疫苗研究效果差，不能起到免疫保護作用?；蚬こ桃呙绲难芯拷鼛资陙硪恢北蝗澜缪芯咳藛T所關注和努力，但由于布魯氏菌本身免疫抗原多樣化，結構復雜，未能發現可用于田間試驗的疫苗抗原，尋找存在于各種布魯氏菌種間保守存在且具有很好免疫功能的蛋白，研制預防保護力高的亞單位疫苗是解決這一問題的有效辦法?，F有技術中大多數表達工具只能表達一種蛋白，而布魯氏菌存在多種與免疫相關的蛋白，研究表明單個蛋白的表達不能形成有效的保護疫苗用抗原，表達制備多個防控作用的亞單位疫苗成本高，且組合成分復雜；而決定免疫蛋白功能的成分是位于蛋白上微小的抗原決定簇，對免疫相關蛋白免疫抗原表位的挖掘和鑒定，可以有效的提取布魯氏菌中有效的免疫抗原成分，同時也對蛋白的結構和功能研究提供直接的指導，表位抗原成分的確定，可為檢測、預防或治療能提供良好的抗原組分。因此篩選獲得免疫蛋白上這些抗原決定簇多肽為解決現有技術存在的不足提供了一種思路和途徑。
技術實現思路
本專利技術提供一種布魯氏菌Omp10蛋白抗原表位多肽及其應用。本專利技術的布魯氏菌Omp10蛋白抗原表位多肽氨基酸序列中含有SEQIDN0.1或/和SEQIDN0.2或/和SEQIDN0.3或/和SEQIDN0.4或/和SEQIDN0.5。本專利技術的布魯氏菌Omp10蛋白抗原表位多肽可以是其氨基酸序列為SEQIDN0.1或/和SEQIDN0.2或/和SEQIDN0.3或/和SEQIDN0.4或/和SEQIDN0.5所示的序列經過一個或/和幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失形成的序列形成的多肽；或者是其氨基酸序列由SEQIDN0.1或/和SEQIDN0.2或/和SEQIDN0.3或/和SEQIDN0.4或/和SEQIDN0.5所示的序列，和添加有具有其它布魯氏菌免疫源性功能的衍生的多肽。由SEQIDN0.1或/和SEQIDN0.2或/和SEQIDN0.3或/和SEQIDN0.4或/和SEQIDN0.5可構成的重組載體或表達盒或轉基因細胞或重組菌。本專利技術所述的多肽在制備診斷或預防或治療布魯氏菌引起的疾病的試劑或藥物中的應用。本專利技術的SEQIDN0.1或/和SEQIDN0.2或/和SEQIDN0.3或/和SEQIDN0.4或/和SEQIDN0.5構成的多肽可以形成一種用于治療或預防布魯氏菌的藥物組合物。布魯氏菌Omp10免疫蛋白為第一組外膜蛋白組分，是布魯氏菌脂多糖組成成分，與布魯氏菌陽性血清能發生強烈反應，具有免疫功能。本專利技術利用生物信息學的手段，對布魯氏菌Omp10免疫蛋白氨基酸的組成和功能進行分析，并模擬構建出蛋白的高級結構模型，綜合上述結果發掘出的蛋白上潛在的具有免疫功能的抗原多肽，化學合成這些多肽后，通過實驗驗證手段最終獲得功能多肽，制備出的布魯氏菌Omp10免疫蛋白多肽為布魯氏菌病的檢測、疫苗、防控提供新的思路，這也對于提高我國動物布魯氏菌病的防治技術水平，保證養殖業健康發展、提供農牧民收入、保證公共衛生和畜產品安全同樣具有重大的社會效益。本專利技術的有益效果為：1）本專利技術篩選多肽為化學合成，而不是活的布魯氏菌上提取，因此在生產過程中完全避免了人為的制毒、散毒等安全隱患。2）本專利技術采用生物信息學工具與試驗驗證相結合篩選抗原多肽，縮小的篩選抗原多肽的范圍，提高了篩選效率。3）本專利技術在樹突狀細胞上篩選抗原多肽，由于樹突狀細胞具有強大的抗原加工和遞呈能力，結果更為接近于動物模型。4）本專利技術所獲得的多肽能與布魯氏菌病陽性血清發生反應，故該重組蛋白可作為目的抗原檢測檢測布魯氏菌病感染的血清，如ELISA方法等。5）本專利技術所表達的目的蛋白，可直接用于制備Omp10蛋白單克隆抗體的抗原。附圖說明圖1是本專利技術實施例的樹突狀細胞培養圖；圖2是本專利技術流式細胞儀檢測樹突狀細胞的表型結果；圖3是本專利技術多肽作用樹突狀細胞后IL-2的分泌量；其中1-7依次為受試的各樣本多肽；8為已知抗原表位對照；9：陰性對照。圖4是本專利技術多肽作用樹突狀細胞后IL-4分泌量，圖中1-7依次為各受試樣本多肽；8為已知抗原表位對照；9為陰性對照；圖5是本專利技術多肽作用樹突狀細胞后IFN-y分泌量，圖中1-7依次為各受試樣本多肽；8為已知抗原表位對照；9為陰性對照。具體實施方式以下面結合實施例對本專利技術做進一步的說明。一、實驗材料的制備1）抗原表位多肽的獲得用生物信息學軟件對布魯氏菌Omp10蛋白氨基酸的組成、性質以及其高級結構進行分析，結合所有結果，挖掘獲得可能具有免疫原性的七個多肽片段，并委托南京金斯瑞生物科技有限公司合成，得到各多肽序列如下：TTGPGSGNAPIIAHTPAGIEGSWV（SEQIDNO.3，后述的內容中為多肽樣本1）；GGIFETRTTDTNEKLAEGN（SEQIDNO.1，后述的內容中為多肽樣本2）；NMRSIVRGTTSKVNCALVSPTQL（SEQIDNO.4，后述的內容中為多肽樣本3）；NCTSSAGSRFSLTRRNA（SEQIDNO.5，后述的內容中為多肽樣本4）；SKVNCALVSPTQLNCTSS；（SEQIDNO.2，后述的內容中為多肽樣本5）；FRIVAPLALMSLALAACET（SEQIDNO.6，后述的內容中為多肽樣本6）；GNYLYLSPQLVEI（SEQIDNO.7，后述的內容中為多肽樣本7）。2）小鼠骨髓源樹突狀細胞（DC）的培養頸椎脫位法處死Babl\本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種布魯氏菌Omp10蛋白抗原表位多肽，其特征在于其氨基酸序列中含有SEQ?ID?N0.1或/和SEQ?ID?N0.2或/和SEQ?ID?N0.3或/和SEQ?ID?N0.4或/和SEQ?ID?N0.5。

【技術特征摘要】
1.一種布魯氏菌Omp10蛋白抗原表位多肽，其特征在于其氨基酸序列中含有SEQID
N0.1或/和SEQIDN0.2或/和SEQIDN0.3或/和SEQIDN0.4或/和SEQIDN0.5。
2.一種布魯氏菌Omp10蛋白抗原表位多肽，其特征在于其氨基酸序列為SEQIDN0.1
或/和SEQIDN0.2或/和SEQIDN0.3或/和SEQIDN0.4或/和SEQIDN0.5所示的序列經
過一個或/和幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失形成的序列形成的多肽。
3.一種布魯氏菌Omp10蛋白抗原表位多肽，其特征在于其氨基酸序列為SEQIDN0.1
或/和SEQIDN0.2或/和...

【專利技術屬性】
技術研發人員：曹小安，周繼章，李兆才，婁忠子，景志忠，付寶權，尚佑軍，
申請(專利權)人：中國農業科學院蘭州獸醫研究所，
類型：發明
國別省市：甘肅;62