葉酸受體1抗體與免疫綴合物以及其用途制造技術

提供新穎的抗癌劑，其包括但不限于結合至人類葉酸受體1的抗體與免疫綴合物。進一步提供使用該藥劑、抗體或免疫綴合物的方法，例如抑制腫瘤生長的方法。

【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本申請是申請日為2011年2月24日、中國專利申請?zhí)枮?01180019687.8(國際申請?zhí)枮镻CT/US2011/026079)、專利技術名稱為“葉酸受體1抗體與免疫綴合物以及其用途”的專利技術專利申請的分案申請。相關申請的交叉引用本申請案要求于2010年2月24日申請的美國臨時申請案61/307,797號、于2010年5月20日申請的美國臨時申請案61/346,595號以及于2010年11月12日申請的美國臨時申請案61/413,172號的優(yōu)先權，其在此將全文并入本文以做為參考。
本專利技術的領域是廣泛地相關于結合至人類葉酸受體1的抗體與免疫綴合物，以及相關于使用所述抗體與免疫綴合物的方法，該方法是用以治療例如癌癥的疾病。
技術介紹
癌癥是已開發(fā)國家主要死亡原因的，每年僅在美國就有超過一百萬人診斷為癌癥以及500,000人死亡。整體來說，據(jù)估計三個人中超過一人在他們的一生中將發(fā)展出某種形式的癌癥。有超過200種不同的癌癥，其中四種-乳癌、肺癌、直腸癌以及攝護腺癌-占了新病例的超過半數(shù)。(Jemaletal.,2003,CancerJ.Clin.53:5-26)。葉酸受體1(FOLR1)，還稱為葉酸受體-α或葉酸結合蛋白，為在細胞質膜上表現(xiàn)的N端糖化蛋白質。FOLR1具有對葉酸以及數(shù)種還原型葉酸衍生物的高度親合力。FOLR1媒介生理葉酸5-甲基四氫葉酸的運輸至細胞內部。FOLR1在大多數(shù)的卵巢癌中以及在許多的子宮癌、子宮內膜癌、胰腺癌、腎臟癌、肺癌以及乳癌中過量表現(xiàn)，然而FOLR1在正常組織的表現(xiàn)被限制在腎臟近端小管的上皮細胞的頂膜、肺臟的泡狀肺泡壁細胞、膀胱、睪丸、脈絡叢以及甲狀腺(WeitmanSD,etal.,CancerRes52:3396-3401(1992)；AntonyAC,AnnuRevNutr16:501-521(1996)；KalliKR,etal.GynecolOncol108:619-626(2008))。FOLR1的表現(xiàn)型態(tài)使其成為針對FOLR1的癌癥療法的適合標的。因為卵巢癌直到晚期前典型地為無癥狀的，其經常在晚期被確診，并且當以目前可用的程序，典型地為在手術減積(surgicalde-bulking)后以化療藥物治療時具有不良的預后(vonGruenigenVetal.,Cancer112:2221-2227(2008)；AyhanAetal.,AmJObstetGynecol196:81e81-86(2007)；HarryVNetal.,ObstetGynecolSurv64:548-560(2009))。因此對于卵巢癌更有效的治療法具有明確的未滿足的醫(yī)療需求。三種抗FOLR1抗體已被檢驗為潛在的抗癌藥物。鼠類單株抗體Mov18以及Mov19于1980年代晚期被分離出(MiottiSetal.,IntJCancer39:297-303(1987))，經確認以FOLR1為標的(ConeyLRetal.,CancerRes51:6125-6132(1991))，并且于臨床前研究中作為伴隨細胞毒性核糖體失活蛋白質的綴合物，以測試它們消滅表現(xiàn)抗原的癌癥細胞的能力(CondeFPetal.,EurJBiochem178:795-802(1989))。將Mov19以對細胞毒性T細胞以及自然殺手細胞為目標的雙特異性抗體而測試(MezzanzanicaDetal.,IntJCancer41:609-615(1988)；FerriniSetal.,IntJCancerSuppl4:53-55(1989)；FerriniSetal.,IntJCancer48:227-233(1991))，以及以Mov19的單鏈Fv(scFv)與介白素2的融合蛋白在體內測試(MelaniCetal.,CancerRes58:4146-4154(1998))。嵌合的(鼠類變異區(qū)/人類恒定區(qū))抗FOLR1抗體Mov18以及Mov19已對它們在體外媒介細胞毒性免疫細胞依賴殺傷表現(xiàn)FOLR1的腫瘤細胞的能力作臨床前檢驗(ConeyLRetal.,CancerRes54:2448-2455(1994))，并且在IgE依賴免疫療法臨床前模式中測試嵌合的Mov18-IgE(KaragiannisSNetal.,JImmunol179:2832-2843(2007)；GouldHJetal.,EurJImmunol29:3527-3537(1999))。Mov18于臨床前研究，接著在1990年代早期的臨床試驗中，以伴隨許多放射性核素的綴合物的形式被研究(ZacchettiAetal.,,NuclMedBiol36:759-770(2009))，其以沒有任何用于臨床的藥物被核準作結。鼠類單株抗FOLR1抗體LK26的人源化形式MORAb003以未經修飾的抗體(EbelWetal.,CancerImmun7:6(2007))以及以放射性核素111In的綴合物(Smith-JonesPMetal.,NuclMedBiol35:343-351(2008))于臨床前評估，并且目前正以未經修飾的抗體進行臨床試驗(D.K.Armstrongetal.J.Clin.Oncol.26:2008,May20suppl；摘要5500)。專利技術概述本專利技術提供結合至人類葉酸受體1的新穎抗體、包含這些抗體的免疫綴合物以及它們的使用方法。本專利技術進一步提供新穎的多肽，例如結合人類葉酸受體1的抗體、此類抗體的片段以及其它與此類抗體相關的多肽。還提供包含編碼多肽的核酸序列的多核苷酸，因為是含有多核苷酸的載體。進一步提供包含本專利技術的多肽和/或多核苷酸的細胞。還提供包含新穎的葉酸受體1抗體或免疫綴合物的組合物(例如，藥物組合物)。此外，還提供制造以及使用新穎的葉酸受體1抗體或免疫綴合物的方法，例如使用新穎的葉酸受體1抗體或免疫綴合物以抑制腫瘤生長和/或治療癌癥的方法。因此，在一方面，本專利技術提供特異性地結合人類葉酸受體1的人源化抗體或其抗原結合片段，其中抗體包含(a)包含GYFMN(SEQIDNO:1)的重鏈CDR1；包含RIHPYDGDTFYNQXaa1FXaa2Xaa3(SEQIDNO:56)的重鏈CDR2；以及包含YDGSRAMDY(SEQIDNO:3)的重鏈CDR3；以及(b)包含KASQSVSFAGTSLMH(SEQIDNO:7)的輕鏈CDR1；包含RASNLEA(SEQIDNO:8)的輕鏈CDR2；以及包含QQSREYPYT(SEQIDNO:9)的輕鏈CDR3；其中Xaa1選自K、Q、H以及R；Xaa2選自Q、H、N以及R；并且Xaa本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種特異性地結合人類葉酸受體1的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原結合片段包含：(a)免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(VH)，其包含：SEQ?ID?NO:30的重鏈(HC)CDR1氨基酸序列；SEQ?ID?NO:31、SEQ?ID?NO:33或SEQ?ID?NO:34的HC?CDR2氨基酸序列；和SEQ?ID?NO:32的HC?CDR3氨基酸序列；以及(b)免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)(VL)，其包含：SEQ?ID?NO:27的輕鏈(LC)CDR1氨基酸序列；SEQ?ID?NO:28的LC?CDR2氨基酸序列；和SEQ?ID?NO:29的LC?CDR3氨基酸序列。

【技術特征摘要】
2010.02.24 US 61/307,797;2010.05.20 US 61/346,595;1.一種特異性地結合人類葉酸受體1的抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或其抗原
結合片段包含：
(a)免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(VH)，其包含：SEQIDNO:30的重鏈(HC)CDR1氨基酸序列；
SEQIDNO:31、SEQIDNO:33或SEQIDNO:34的HCCDR2氨基酸序列；和SEQIDNO:32的HC
CDR3氨基酸序列；以及
(b)免疫球蛋白輕鏈可變區(qū)(VL)，其包含：SEQIDNO:27的輕鏈(LC)CDR1氨基酸序列；
SEQIDNO:28的LCCDR2氨基酸序列；和SEQIDNO:29的LCCDR3氨基酸序列。
2.如權利要求1所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述VH包含SEQIDNO:34的HC
CDR2氨基酸序列。
3.如權利要求2所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含
SEQIDNO:42的VH氨基酸序列和SEQIDNO:41的VL氨基酸序列。
4.如權利要求3所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體包含SEQIDNO:46的HC
氨基酸序列和SEQIDNO:45的LC氨基酸序列。
5.如權利要求1所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述VH包含SEQIDNO:33的HC
CDR2氨基酸序列。
6.如權利要求5所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結合片段包含
SEQIDNO:36的VH氨基酸序列和SEQIDNO:35的VL氨基酸序列。
7.如權利要求6所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體包含SEQIDNO:40的HC
氨基酸序列和SEQIDNO:39的LC氨基酸序列。
8.如權利要求1所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體包含由2010年4月7日保
藏于ATCC并具有ATCC保藏編號PTA-10775的質粒DNA編碼的HC以及由2010年4月7日保藏于
ATCC并具有ATCC保藏編號PTA-10776的質粒DNA編碼的LC。
9.如權利要求1-8中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其為全長抗體。
10.如權利要求1-3、5和6中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其為抗原結合片段。
11.如權利要求10所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗原結合片段包含F(xiàn)ab、
Fab'、F(ab')2、scFv、雙硫化物連接的Fv、內抗體、IgG-CH2、微抗體、F(ab')3、四鏈抗體、三
鏈抗體、雙鏈抗體、DVD-Ig、mAb2、(scFv)2或scFv-Fc。
12.如權利要求1-8中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其以0.07至10nM的Kd與人
類葉酸受體1結合。
13.如權利要求1-8中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述抗體或其抗原結
合片段被人源化。
14.一種制造如權利要求1-8中任一項所述的抗體或其抗原結合片段的方法，其包含
(a)培養(yǎng)表達所述抗體或其抗原結合片段的細胞；以及(b)從該培養(yǎng)的細胞中分離所述抗體
或其抗原結合片段。
15.一種藥物組合物，其包含如權利要求1-13中任一項所述的抗體或其抗原結合片段
以及藥學上可接受的載體。
16.一種具有該結構式(A)-(L)-(C)的免疫綴合物，其中：
(A)為如權利要求1-13中任一項所述的抗體或其抗原結合片段；
(L)為連接子；和
(C)為細胞毒性劑；以及
其中(L)連接(A)至(C)。
17.如權利要求16所述的免疫綴合物，其中(A)包含SEQIDNO:42的VH氨基酸序列和
SEQIDNO:41的VL氨基酸序列。
18.如權利要求16或17所述的免疫綴合物，其中所述連接子選自：可裂解連接子、不可
裂解連接子、親水性連接子以及二羧酸為基底的連接子所組成的群組。
19.如權利要求18所述的免疫綴合物，其中所述連接子選自：N-琥珀酰亞胺4-(2-吡啶
二硫代)戊酸酯；N-琥珀酰亞胺4-(2-吡啶二硫代)-2-磺酸基戊酸酯；N-琥珀酰亞胺4-(2-吡
啶二硫代)丁酸酯；N-琥珀酰亞胺4-(2-吡啶二硫代)-2-磺酸基丁酸酯；N-琥珀酰亞胺4-(馬
來酰亞胺基甲基)環(huán)己烷羧酸酯；N-磺酸基琥珀酰亞胺4-(馬來酰亞胺基甲基)環(huán)己烷羧酸
酯；N-琥珀酰亞胺-4-(碘乙酰基)-胺基苯甲酸酯；以及N-琥珀酰亞胺-[(N-馬來酰亞胺基丙
酰胺基)-四甘醇]酯。
20.如權利要求19所述的免疫綴合物，其中所述連接子是N-琥珀酰亞胺-[(N-馬來酰亞
胺基丙酰胺基)-四甘醇]酯。
21.如權利要求19所述的免疫綴合物，其中所述連接子是N-琥珀酰亞胺4-(2-吡啶二硫
代)丁酸酯。
22.如權利要求19所述的免疫綴合物，其中所述連接子是N-琥珀酰亞胺4-(2-吡啶二硫
代)-2-磺酸基丁酸酯。
23.如權利要求19所述的免疫綴合物，其中所述連接子是N-琥珀酰亞胺4-(馬來酰亞胺
基甲基)環(huán)己烷羧酸酯...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：奧爾加·阿布，丹尼爾·塔瓦雷斯，芮玲云，吉利恩·佩恩，維克托·S·戈德馬克，
申請(專利權)人：伊繆諾金公司，
類型：發(fā)明
國別省市：美國;US