一種駝血多肽的制備純化方法技術

本發明專利技術公開了一種駝血多肽的制備方法。該方法以駝血為原料，經預處理后加入到細胞破碎裝置中，加入溶劑，利用細胞破碎技術進行細胞破碎，再利用酶解技術酶解駝血蛋白質獲得駝血多肽酶解液，然后利用膜過濾技術進行分離純化，進行脫色脫腥處理，收集脫色脫腥液，最后利用膜濃縮或減壓真空濃縮，干燥后制備駝血多肽產品。根據本發明專利技術專利制備的駝血多肽產品具有分子量集中、水溶性好、回收率高、脫色效果好、無腥味等優點，大大提高了產品的價值，可廣泛應用于醫藥、保健品、食品、化妝品等行業。

【技術實現步驟摘要】
一種駝血多肽的制備純化方法
本專利技術屬于活性物質篩選純化
，具體涉及一種駝血多肽的制備純化方法。
技術介紹
駱駝(Camel)是偶蹄目駱駝科駱駝屬大型反芻哺乳動物的統稱，分單峰駝和雙峰駝。我國是世界上駱駝養殖量較多的國家之一，根據中國統計年鑒2015資料統計，2014年全國約有駱駝33.4萬峰，其中，新疆16.0萬峰，內蒙古13.8萬峰。按類型劃分，我國的雙峰駝大致分為三個駝系：新疆駝(Xinjiangcamel)、蘇尼特駝(Sunitecamel)、阿拉善雙峰駝(AlxaBactriancamel)。由于駱駝生存在嚴酷的惡劣環境條件下，與其它動物的血液相比，特殊的環境使其蛋白質類型、分子量、含量等有顯著差異，具有特殊的生理、營養功能。駱駝血清蛋白質共有白蛋白、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白和γ-球蛋白等5個組分。雙峰駝血清的蛋白質總量中，白蛋白含量高達73.20％，明顯高于綿羊、牛、馬等哺乳類動物中血液的白蛋白。現代研究表明，人類對蛋白質的利用是將蛋白質酶解成小分子多肽或低聚肽吸收利用。小分子多肽或低聚肽具有不需消化直接吸收、不需消耗人體能量、吸收速度快、優先吸收、在人體中合成蛋白質的速率較氨基酸快等諸多優點。以駝血為原料，制備駝血多肽及相關產品，開發出抗疲勞、抗衰老、增強免疫力等功能的藥品、保健品、食品、化妝品等，將會極大提高駝血的附加值，可推動駱駝養殖業的發展，具有重要的經濟效益和社會效益。因此，從駝血中制備駝血多肽，可以提高駝血中蛋白質的利用率。同時，可以促進駱駝養殖業的發展，具有較好的應用前景。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題，是要既使駝血中蛋白被酶解而使其易于被人們所吸收，又使其中活性成份得到保留，提升駝血多肽制品的產品價值，從而提供一種駝血多肽的制備純化方法。本專利技術以駝血為原料，經預處理后加入到細胞破碎裝置中使細胞破碎，經過酶解得到駝血多肽酶解液，然后利用膜過濾進行分離純化，再進行脫色脫腥處理，收集脫色脫腥液，最后利用膜濃縮或減壓真空濃縮，干燥后制備駝血多肽產品。本專利技術的一種駝血多肽的制備純化方法，其具體操作步驟如下：1)原料的預處理：將新鮮駝血或冷凍的駝血解凍，勻漿后用4～400目的濾網過濾，得到預處理的駝血；2)細胞破碎：將經過預處理的駝血加入到細胞破碎裝置，進行細胞破碎，得到駝血溶液；3)酶解：向已進行細胞破碎的駝血溶液再加入0～20倍體積量的水，然后向發酵罐中加入蛋白酶進行酶解，酶解溫度為30～70℃，酶切時間為0.5～8h，酶解結束后高溫滅酶滅菌；將滅酶滅菌后的酶解液冷卻至室溫后，經5000～20000r/min的轉速離心分離，收集上清液，得駝血多肽酶解液；所述的蛋白酶是指Neutrase中性蛋白酶、中性蛋白酶Protex.7L、Alcalase堿性蛋白酶、堿性蛋白酶Protex-6L、微生物蛋白酶、動物蛋白復合水解酶、金屬基質蛋白酶、氨肽酶、羧肽酶、膠原蛋白酶、糜蛋白酶、地衣芽抱桿菌蛋白酶、端肽酶、沙雷肽酶、Aspergillusmelleus、Aspergi11usoryzae、Aspergillusniger、Bacilluslicheniformis、Bacillussubtilis、BacilluseStearothermophi、Bacillusamyloliquefaciens或Rhizopusniveus的微生物來源酶中的一種或者組合；4)膜過濾：將已離心的駝血多肽酶解液通過孔徑為0.01～5μm的微濾器過濾，再以截留分子量為300～10000道爾頓的超微膜過濾，收集透過的低分子量部分駝血多肽酶解液；5)脫色脫腥：先調節過濾得到的駝血多肽酶解液的pH值為3～10，脫色脫腥劑用量按照底物濃度的0.02～50％計算，利用反應釜或裝柱進行脫色脫腥，得到脫色脫腥后的駝血多肽酶解液；所述的脫色脫腥劑為活性炭、硅藻土、氧化鋁、離子交換樹脂、大孔樹脂、凹凸棒、膨潤土、高嶺土、白土、殼聚糖中的任一種或幾種組合；所述的脫色脫腥步驟，一種方法是將脫色脫腥劑加入到反應釜中，再加入已調pH值的駝血多肽酶解液，攪拌速度為10～300r/min，溫度為5～70℃，時間為0.1～10h。脫色脫腥完成后，經5000～20000r/min的轉速離心分離，收集上清液，得到脫色脫腥液；所述的脫色脫腥步驟，另一種方法是將脫色脫腥劑裝柱，將pH值為3～10的駝血多肽酶解液流經柱子，控制溫度為5～50℃，流速為1～30BV/h，進行脫色脫腥，收集脫色脫腥液；6)濃縮：將脫色脫腥后的駝血多肽酶解液利用膜濃縮或減壓真空濃縮技術進行濃縮；所述的膜濃縮是指納米膜濃縮，在溫度為0～70℃時，用截留分子量為70～400道爾頓的卷式納米膜對純化后的駝血多肽酶解液進行過濾，以濾去70～400道爾頓以下的水溶液，獲得駝血多肽濃縮液；本專利技術提供的減壓真空濃縮是指將純化后的駝血多肽酶解液轉移至減壓真空濃縮設備中，控制真空度為-0.1～-0.01MPa，溫度為10～60℃，在低溫和低壓下將水除去；7)干燥：將駝血多肽濃縮液進行干燥(噴霧干燥、冷凍干燥、微波真空干燥、減壓真空干燥、氣流干燥、玻態干燥等)，得到駝血多肽。本專利技術與已有技術方法相比，優點在于提供了一種利用細胞破碎技術、酶解技術和膜過濾技術相結合從駝血中制備駝血多肽的方法。本專利技術方法具有收率高、產量大、操作簡單、成本低等優點，有利于工業化的生產；采用本專利技術得到的駝血多肽產品水溶性好、生物利用度高，可廣泛應用于醫藥、保健品、食品、化妝品等行業。采用細胞破碎技術可以有效地減少酶解時間，快速高效，膜分離技術可以實現不同分子量駝血多肽的制備，且避免大量有毒有害溶劑的使用，綠色環保，應用前景廣闊。附圖說明圖1為本專利技術產品的液相色譜圖，色譜峰為駝血多肽的吸收峰。具體實施方式本專利技術得到的駝血多肽產品為白色或淡黃色粉末，駝血多肽純度為50～99％。按照本專利技術制備的駝血多肽可應用領于醫藥、保健品、食品、化妝品等領域，即以制備的駝血多肽為主要組分，用常規的制劑工藝，單獨使用或與其他組分配合制備成經胃腸道給藥劑型，如散劑、片劑(包括普通壓制片、包衣片、糖衣片、薄膜衣片、腸溶衣片、多層片、分散片、舌下片、口含片、植入片、溶液片、微囊片、緩釋片等，其中不包括泡騰片、咀嚼片和奶片)、顆粒劑、膠囊劑、溶液劑、乳劑、混懸劑等；非經胃腸道給藥劑型，注射給藥劑型(如注射劑，包括靜脈注射、肌內注射、皮下注射、皮內注射及腔內注射等多種注射途徑)，呼吸道給藥劑型(如噴霧劑、氣霧劑、粉霧劑等)，皮膚給藥劑型(如外用溶液劑、洗劑、搽劑、軟膏劑、硬膏劑、糊劑、貼劑等)，粘膜給藥劑型(如滴眼劑、滴鼻劑、眼用軟膏劑、含漱劑、舌下片劑、粘貼片及貼膜劑等)，腔道給藥劑型(如栓劑、氣霧劑、滴劑及滴丸劑等，用于直腸、陰道、尿道、鼻腔、耳道等)等。本專利技術的產品參照國標GB/T22729-2008中液相色譜法進行測定。色譜條件：色譜柱：TSKgelG2000SWXL300mm×7.8mm或性能與此相近的同類型其它適用于測定蛋白質和多肽的凝膠柱。流動相：乙腈:水:三氟乙酸＝45:55:0.1(v:v:v)；流速：0.5mL/min；檢測波長：220nm；參比波長：360nm；柱溫：30℃，進樣量：20μL。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種駝血多肽的制備純化方法，其特征在于，所述的方法是以駝血為原料，經預處理后加入到細胞破碎裝置中使細胞破碎，經過酶解得到駝血多肽酶解液，然后利用膜過濾進行分離純化，再進行脫色脫腥處理，收集脫色脫腥液，最后利用膜濃縮或減壓真空濃縮，干燥后獲得駝血多肽。

【技術特征摘要】
1.一種駝血多肽的制備純化方法，其特征在于，所述的方法的步驟如下：1）原料的預處理：將新鮮駝血或冷凍的駝血解凍，勻漿后用50目的濾網過濾，得到預處理的駝血；2）細胞破碎：將經過預處理的駝血中加入駝血5倍重量的水，控制溫度為50～60℃，調節轉速為1000～15000r/min，時間為0.1～4h，進行細胞破碎得到駝血溶液；3）酶解：將已進行細胞破碎的駝血溶液置入發酵罐中，再加入10倍質量的水，然后向發酵罐中加入底物濃度10%的氨肽酶和羧肽酶進行酶解，其中氨肽酶和羧肽酶的質量比為1:1；酶解溫度為50℃，酶解時間為0.5h，酶解結束后85℃滅酶滅菌1h；將滅酶滅菌后的酶解液冷卻至室溫后，經15000r/min的轉速離心分離，收集上清液，得駝血多肽酶解液；4）膜過濾：將已離心的駝血多肽酶解液置于緩沖罐中，啟動循環泵，控制溫度為50℃，先通過孔徑為0.5μ...

【專利技術屬性】
技術研發人員：邸多隆，劉永峰，劉毅，
申請(專利權)人：中國科學院蘭州化學物理研究所，
類型：發明
國別省市：甘肅;62