【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本申請公開了一種純化中性人乳寡糖(中性HMO)的方法。所述方法使用模擬移動床(SMB)色譜，允許連續純化大量具有高純度的HMOs。與中性HMOs的化學合成路徑及其后續的純化相反，本專利技術的方法允許提供不含有害化學物質，例如微量的重金屬或有機溶劑的HMOs。單獨的中性HMO產物可以通過噴霧干燥以固體形式獲得或作為濃縮漿獲得。所提供的中性HMO非常適合在食品應用中使用。
技術介紹
人乳是碳水化合物，脂肪，蛋白質，維生素，礦物質和微量元素的復合混合物。到目前為止，最主要的成分是由碳水化合物，該主要成分可以進一步被劃分為乳糖和更復雜的寡糖。與乳糖能被用作能量源相反，復雜的寡糖不能被嬰兒代謝。復雜的寡糖部分的比例達到總碳水化合物的1/10，且該部分由大概多于150個的不同的寡糖組成。這些復雜的寡糖的存在和濃度是人類特定的，且因此不能從其它哺乳動物例如馴養的產奶動物的乳汁中大量獲取。已知這些復雜的寡糖在人乳中存在已經很長一段時間，且這些寡糖的生理功能已經經歷了幾十年的醫學研究。對于一些較為豐富的人乳寡糖，特定的功能已經被鑒定。有限的供應和獲取單獨HMOs的純化成分的困難，導致了將化學途徑用到這些復雜分子中的一些的發展。然而，通過化學合成，酶促合成或發酵合成而合成HMOs已被證明是具有挑戰性的。至今還未能提供至少大規模的產量以及足以用于食品應用的質量。在這方面，特定的HMOs(例如HMO2'-...
【技術保護點】
一種用于在連續色譜中從含有中性人乳寡糖和污染物的粗溶液中純化中性人乳寡糖的方法，其中所述的含有中性人乳寡糖和污染物的粗溶液包含選自微生物發酵提取物，生物催化反應溶液，化學合成溶液，及其組合的溶液，或者由選自微生物發酵提取物，生物催化反應溶液，化學合成溶液，及其組合的溶液組成，其中所述溶液中的中性人乳寡糖的純度<80％，其特征在于，將所述粗溶液應用到至少一個使用模擬移動床色譜的純化步驟，提供其中含有具有≥80％純度的所述中性人乳寡糖的純化溶液。
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2013.10.04 EP 13187369.71.一種用于在連續色譜中從含有中性人乳寡糖和污染物的粗溶液中純
化中性人乳寡糖的方法，
其中所述的含有中性人乳寡糖和污染物的粗溶液包含選自微生物發酵提
取物，生物催化反應溶液，化學合成溶液，及其組合的溶液，或者由選自微
生物發酵提取物，生物催化反應溶液，化學合成溶液，及其組合的溶液組成，
其中所述溶液中的中性人乳寡糖的純度<80％，
其特征在于，將所述粗溶液應用到至少一個使用模擬移動床色譜的純化
步驟，提供其中含有具有≥80％純度的所述中性人乳寡糖的純化溶液。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述粗溶液中的中性人乳
寡糖的純度為≤70％，≤60％，≤50％，≤40％，≤30％，≤20％，≤10％或≤5％
和/或純化溶液含有具有≥85％的純度，優選≥90％的純度的所述中性人乳寡糖。
3.根據權利要求1或2中所述的方法，其特征在于，至少一個模擬移動
床色譜具有
i)至少4個柱子，優選至少8個柱子，更優選至少12個柱子，其中至
少一個柱子包括弱的或強的陽離子交換樹脂，優選H+形式或Ca2+形式的陽離
子交換樹脂；和/或
ii)具有不同流速的四個區域I，II，III和IV；
iii)洗脫液，包含水，優選乙醇和水，更優選5-15體積％的乙醇和85-95
體積％的水，最優選9-11體積％的乙醇和89-91體積％的水，或由水，優選乙
醇和水，更優選5-15體積％的乙醇和85-95體積％的水，最優選9-11體積％
的乙醇和89-91體積％的水組成，其中，所述洗脫液可選地進一步包含硫酸，
優選≤10mM或更少的硫酸；和/或
iv)操作溫度為15℃至60℃，優選20℃至55℃，更優選25℃至50℃。
4.根據權利要求1至3中任一項所述的方法，其特征在于，將所述純化
溶液應用到至少一個進一步的使用模擬移動床色譜的純化步驟，提供其中含
有具有≥92％純度的所述中性的人乳寡糖的純化溶液。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，進一步的模擬移動床色譜
具有
i)至少4個柱子，優選至少8個柱子，更優選至少12個柱子，其中至
\t少一個柱子包括弱的或強的陽離子交換樹脂，優選H+形式或Ca2+形式的陽離
子交換樹脂；和/或
ii)具有不同流速的四個區域I，II，III和IV；
iii)洗脫液，包含水，優選乙醇和水，更優選5-15體積％的乙醇和85-95
體積％的水，最優選9-11體積％的乙醇和89-91體積％的水，或由水，優選乙
醇和水，更優選5-15體積％的乙醇和85-95體積％的水，最優選9-11體積％
的乙醇和89-91體積％的水組成，其中，所述洗脫液可選地進一步包含硫酸，
優選≤10mM或更少的硫酸；和/或
iv)操作溫度為15℃至60℃，優選20℃至55℃，更優選25℃至50℃。
6.根據權利要求1至5中任一項所述的方法，其特征在于，所述含有中
性人乳寡糖和污染物的粗溶液包含微生物發酵提取物或由微生物發酵提取物
組成，其中所述微生物發酵提取物是在至少一個微生物發酵步驟獲得的，優
選在其后進行以下至少一個步驟
a)對溶液，優選對所述粗溶液進行過濾，以在微生物發酵后將可溶性物
質與不溶性物質分離；
b)對溶液，優選對步驟a)中獲得的溶液進行離子交換色譜，優選陽離
子交換色譜，更優選在進行陽離子交換色譜后進行陰離子交換色譜；
c)對溶液，優選對在步驟b)中獲得的溶液進行濃縮，更優選通過水的
蒸發和/或通過納濾進行濃縮，可選的進行多于一次濃縮；
d)對溶液，優選對在步驟c)中獲得的溶液進行滲析，更優選進行電滲
析和/或滲濾，最優選用納濾膜進行滲濾，可選的進行多于一次滲析；
e)使用模擬移動床色譜對溶液，優選對在步驟d)中獲得的溶液進行色
譜分離；
f)對溶液，優選對在步驟e)中獲得的溶液進行過濾，以將中性人乳寡
糖與有色污染物分離，更優選通過穿過活性炭的過濾進行分離；以及
g)對含有所述中性人乳寡糖的純化溶液，優選對在步驟f)中獲得的純
化溶液進行噴霧干燥；
其中最優選，所有步驟a)至g)以連續方式實施。
7.根據權利要求1至6中的任一項所述的方法，其特征在于，在將所述
溶液應用到所述至少一個模擬床移動色譜步驟之前，將所述含有中性人乳寡
\t糖的溶液
i)進行過濾以去除任何不溶物質，優選用活性炭、木炭和/或硅藻土過濾
以去除任何不溶物質和有機污染物，更優選的通過交叉流過濾進行過濾，最
優選的通過使用微濾膜的交叉流過濾進行過濾；和/或
ii)應用到至少一個使用陽離子和/或陰離子交換色譜的純化步驟，優選
先應用到至少一個陽離子交換色譜步驟然后應用到至少一個陰離子交換色譜
...
【專利技術屬性】
技術研發人員：斯特凡·詹尼文，馬庫斯·海福力克，
申請(專利權)人：詹尼文生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：德國;DE
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