L?脯氨醇及其對映異構體的分離檢測方法技術

本發明專利技術提供了一種L?脯氨醇及其對映異構體的分離檢測方法，屬于分析化學領域。本發明專利技術使用衍生化試劑和L?脯氨醇及其異構體進行衍生化反應，制備得到衍生化產品，然后使用正相高效液相色譜法進行分離和檢測。該方法實用方便、穩定可靠，可用于L?脯氨醇化工品中對映異構體的分離檢測和質量控制。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及氨基醇對映異構體的分離檢測方法，具體涉及L-脯氨醇對映異構體的分離檢測方法，屬于分析化學領域。
技術介紹
L-脯氨醇是重要的手性化學試劑，既是合成優良光學材料NPP和手性聚合物材料的原料，又是合成手性藥物的重要手性源。其化學名為(S)-pyrrolidin-2-ylmethanol，其結構式如下所示：L-脯氨醇的對映異構體為D-脯氨醇，其結構式如下所示：通常在手性藥物及其制劑產品的制備和生產過程中，需要對其對映異構體的含量進行研究和控制。而合成手性化合物的手性源的對映異構體含量的研究和控制進一步保證了手性藥物及其制劑產品的光學純度。現代色譜分離分析技術在對映體的分離與測定方面顯示出巨大的優越性。常用的手性藥物測定技術有手性高效液相色譜法、手性毛細管電泳法和手性氣相色譜法等，其中以手性高效液相色譜法最為常用。手性高效液相色譜法又包括手性固定相法、手性流動相添加劑法和手性衍生化法。作為手性合成重要的手性源，L-脯氨醇的對映異構體的檢測和控制是手性藥物控制對映異構體的重要控制步驟，一方面可以保證目標手性藥物的光學純度，另一方面減少了手性藥物光學純化的成本，例如手性藥物阿伐那非的合成。手性高效液相色譜法是最為普遍的方法，但是由于脯氨醇幾乎無紫外吸收，故需要將其衍生化為有較強紫外吸收的化合物，利用高效液相色譜儀在正相色譜柱上進行分離。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種實用方便、穩定可靠的手性衍生化高效液相色譜法來分離和檢測L-脯氨醇及其對映異構體，可用于L-脯氨醇中對映異構體的分離檢測和質量控制。為實現上述目的，本專利技術的技術方案如下：一種L-脯氨醇及其對映異構體的分離檢測方法，是在有機溶劑中，使用衍生化試劑和L-脯氨醇及其異構體進行衍生化反應，制備得到L-脯氨醇及其異構體的衍生化產品，然后使用正相高效液相色譜法進行分離和檢測。上述衍生化試劑選自乙酰扁桃酰氯、9-氯甲酸芴甲酯和氯甲酸芐酯中的一種，優選9-氯甲酸芴甲酯。上述有機溶劑可以是下列溶劑中的一種或多種：二氯甲烷、乙腈、氯仿、四氯化碳、四氫呋喃，優選乙腈。上述衍生化反應的溫度從-10℃到所使用有機溶劑的常壓沸點溫度均可，優選室溫。上述衍生化反應中，當使用9-氯甲酸芴甲酯作為衍生化試劑時，L-脯氨醇及其異構體與衍生化試劑9-氯甲酸芴甲酯用量的摩爾比為1∶1～1∶5，優選1∶1.1～1∶1.5。在本專利技術的一些實施例中，衍生化反應包括以下步驟：1)室溫下，在反應器中加入C1～C4的有機胺和L-脯氨醇及其異構體，C1～C4的有機胺與L-脯氨醇及其異構體的摩爾比為5∶1～1∶1，加入有機溶劑，攪拌均勻；2)在步驟1)得混合物中加入衍生化試劑，攪拌反應5～60min，即得到L-脯氨醇及其異構體的衍生化產品。其中，反應時間優選30min。優選的，所述C1～C4的有機胺選自三乙胺、二乙胺和二異丙基乙胺中的一種或多種。C1～C4的有機胺在此處用作縛酸劑，用于中和反應中產生的酸，采用C1～C4的有機胺的原因在于，相比于無機堿來說，它能溶于有機溶液。上述步驟2)所用衍生化試劑優選為9-氯甲酸芴甲酯，L-脯氨醇及其異構體與9-氯甲酸芴甲酯用量的摩爾比優選為1∶1.1～1∶1.5。上述正向高效液相色譜以正相色譜柱為分離柱，以正己烷-C1～C4低級醇組成正相流動相系統。所述正相色譜柱優選以硅膠表面涂敷有直鏈淀粉－(二甲苯基氨基甲酸酯)或表面涂敷有纖維素－(二甲苯基氨基甲酸酯)為固定相的手性色譜柱，更優選硅膠表面涂敷有直鏈淀粉－三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)為固定相的色譜柱。所述正相流動相系統中的低級醇優選C1～C4的一元醇，更優選異丙醇和/或乙醇，最優選異丙醇。所述正相流動相系統中低級醇占流動相的體積百分比為10％～30％，優選15％～25％。進一步的，色譜條件優選為：流速為0.7～1.3mL/min，優選為0.8mL/min；檢測波長為255nm-275nm，優選為265nm；色譜柱柱溫為25℃～40℃，優選為35℃。在本專利技術的一些具體實施例中，按照以下步驟進行正相高效液相色譜法，實現L-脯氨醇及其對映異構體衍生化產品的分離檢測：(a)取L-脯氨醇及其異構體衍生化產品，用流動相溶解，配制成每1mL含L-脯氨醇及其異構體0.03mg～0.08mg的樣品溶液；(b)設置流動相流速為1.0mL/min，檢測波長為265nm，色譜柱柱溫為35℃；(c)取步驟(a)的樣品溶液10μL注入色譜儀，記錄色譜圖。本專利技術的優點如下：1、在現有技術中，L-脯氨醇的純度分析使用旋光法測量，定量不準確。本專利技術創造性地將L-脯氨醇及其對映異構體進行衍生化，然后使用高效液相色譜進行定量分析，準確性更高。滿足了對藥用原料L-脯氨醇的純度分析的要求。2、本專利技術方法可有效分離L-脯氨醇及其對映異構體D-脯氨醇，使用本專利技術方法，兩者可完全分離，分離度達到《中國藥典》的要求，即分離度大于1.5。3、本專利技術方法基線平穩、峰形好，對稱因子在1.0左右。4、本專利技術方法專屬性強，在D-脯氨醇出峰位置附近沒有其它雜質峰的影響，可準確定量。5、本專利技術方法檢測靈敏度高，完全滿足對藥用原料L-脯氨醇進行純度檢測的要求。綜上，本專利技術的方法簡便有效，穩定可靠，有利于準確、快速地檢測L-脯氨醇中的對映異構體的含量。附圖說明圖1是分離檢測方法實施例1消旋脯氨醇衍生化產品分離檢測的高效液相色譜圖。圖2是分離測試方法實施例2消旋脯氨醇衍生化產品分離檢測的高效液相色譜圖。圖3是分離測試方法實施例3D-脯氨醇衍生化產品的高效液相色譜圖。圖4是分離測試方法實施例4L-脯氨醇及其對映異構體衍生化產品的高效液相色譜圖。圖5是分離測試方法實施例5L-脯氨醇及其對映異構體衍生化產品的高效液相色譜圖。具體實施方式以下通過實施例對本專利技術作進一步說明，但這并非是對本專利技術的限制，本領域技術人員根據本專利技術的基本思想，可以做出各種修改或改進，但是只要不脫離本專利技術的基本思想，均在本專利技術的范圍之內。制備實施例1：L-脯氨醇及其對映異構體衍生化產品的制備室溫下，在25mL圓底燒瓶中加入L-脯氨醇及其對映異構體40mg，然后加入乙腈4mL、70μL三乙胺，攪拌均勻，加入9-氯甲酸芴甲酯113mg，密閉反應容器，攪拌反應30min，即得到L-脯氨醇及其異構體衍生化產品。分離檢測方法實施例1：消旋脯氨醇衍生化產品的分離檢測本實施例的目的是定位L-脯氨醇衍生化產品和D本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種L?脯氨醇及其對映異構體的分離檢測方法，其特征在于，在有機溶劑中，使用衍生化試劑和L?脯氨醇及其異構體進行衍生化反應，制備得到L?脯氨醇及其異構體的衍生化產品，然后使用正相高效液相色譜法進行分離和檢測。

【技術特征摘要】
1.一種L-脯氨醇及其對映異構體的分離檢測方法，其特征在于，在有機溶劑中，使用衍
生化試劑和L-脯氨醇及其異構體進行衍生化反應，制備得到L-脯氨醇及其異構體的衍生化產
品，然后使用正相高效液相色譜法進行分離和檢測。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述衍生化試劑選自乙酰扁桃酰氯、9-氯
甲酸芴甲酯和氯甲酸芐酯中的一種。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述有機溶劑選自下列溶劑中的一種或多
種：二氯甲烷、乙腈、氯仿、四氯化碳和四氫呋喃。
4.根據權利要求1～3中任意一項所述的方法，其特征在于，所述衍生化反應包括以下步
驟：
1)室溫下，在反應器中加入C1～C4的有機胺和L-脯氨醇及其異構體，C1～C4的有機胺
與L-脯氨醇及其異構體的摩爾比為5∶1～1∶1，加入有機溶劑，攪拌均勻；
2)在步驟1)得混合物中加入衍生化試劑，攪拌反應5～60min，優選反應30min，即得
到L-脯氨醇及其異構體的衍生化產品。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述C1～C4的有機胺選自三乙胺、二乙胺
和二異丙基乙胺中的一種或多種。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述衍生化試劑是9-氯甲酸芴甲酯，L-脯
氨醇及其異構體與9-氯甲酸芴甲酯用量的摩爾比為1∶1.1～1∶1.5。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述正相高效液相色譜法以正相色譜柱為
分離柱，以正己烷-C...

【專利技術屬性】
技術研發人員：易崇勤，崔暢，孫宇，
申請(專利權)人：北大方正集團有限公司，方正醫藥研究院有限公司，北大醫療產業集團有限公司，
類型：發明
國別省市：北京;11