N-脫硫酸化糖胺聚糖的衍生物以及作為藥物的用途制造技術

本發明專利技術涉及N?脫硫酸化和任選地2?O?脫硫酸化糖胺聚糖衍生物，其中至少部分相鄰的二醇和OH/NH2被轉化為相應的醛，然后所述醛被還原為相應的醇。這些產物具有類肝素酶抑制活性和抗腫瘤活性。所述糖胺聚糖衍生物由天然或合成的糖胺聚糖，優選由未分級肝素、低分子量肝素(LMWH)、硫酸類肝素或其衍生物獲得。本發明專利技術還涉及制備上述的方法，并且還涉及它們作為藥物的活性成分的用途，其還與已知的確定藥物或治療組合。本發明專利技術還涉及通過所述糖胺聚糖的氧化將糖胺聚糖的葡糖胺殘基的C2?C3鍵斷裂的方法。

Derivatives of N- desulfurization acidified glycosaminoglycans and their use as medicaments

The present invention relates to N desulphated and optionally 2 O desulfted glycosaminoglycan derivatives, wherein at least a portion of the adjacent glycol and OH/NH2 are converted to the corresponding aldehydes, then the aldehyde is reduced to the corresponding alcohol. These products have inhibitory activity and antitumor activity. The glycosaminoglycan derivatives are obtained from natural or synthetic glycosaminoglycans, preferably from unfractionated heparin, low molecular weight heparin (LMWH), heparan sulfate or derivatives thereof. The invention also relates to the preparation of the above methods, and to their use as active ingredients of the drug. The invention also relates to a method for oxidation by the glycosaminoglycan C2 C3 bond cleavage glucosamine residues of glycosaminoglycan.

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】專利技術概述本專利技術涉及N-脫硫酸化和任選地2-O-脫硫酸化葡糖胺聚糖衍生物，其中至少部分相鄰的二醇和OH/NH2被轉化為相應的醛，然后所述醛被還原為相應的醇。這些產物具有類肝素酶抑制活性和抗腫瘤活性。所述葡糖胺聚糖衍生物由天然或合成的葡糖胺聚糖，優選由未分級肝素、低分子量肝素(LMWH)、硫酸類肝素或其衍生物獲得。天然葡糖胺聚糖可由任意動物來源(可使用不同的動物種類和器官)獲得。本專利技術還涉及制備上述的方法，并且還涉及它們作為可用于病理病況的藥物的活性成分的用途。具體而言，所述病理病況包括多發性骨髓瘤和其它癌癥(即肉瘤、癌、惡性血液病)，包括它們的轉移形式。本專利技術的葡糖胺聚糖衍生物可用作還與其它療法(腫瘤療法或非腫瘤療法)組合的藥物。此外，本專利技術涉及所述N-脫硫酸化和任選地2-O-脫硫酸化葡糖胺聚糖衍生物(優選由肝素和低分子量肝素(LMWH)獲得)在由類肝素酶的抑制獲得益處的任意治療適應癥(即糖尿病腎病、炎性腸病、結腸炎、關節炎、銀屑病、敗血癥、動脈粥樣硬化)中的用途，其還與已知的確定藥物或治療組合。本專利技術還涉及藥物組合物，其包含所述N-脫硫酸化和任選地O-脫硫酸化葡糖胺聚糖衍生物中的至少一種作為活性成分，其中至少部分相鄰的二醇和OH/NH2被轉化為相應的醛，隨后還原為相應的醇。任選地，本專利技術涉及藥物組合物，其包含至少一種所述葡糖胺聚糖衍生物作為活性成分與至少一種其它活性成分(更優選治療化合物)組合。優選地，所述葡糖胺聚糖衍生物為肝素衍生物或低分子量肝素(LMWH)。專利技術背景多發性骨髓瘤是第二大最流行的惡性血液病，并且占美國所有血液癌癥的超過10％，每年大約20.000個新病例，并且死亡率高于50％(Graham-RoweD.,2011,Multiplemyelomaoutlook.Nature480,s34-s35)。在過去幾年，已研發有前景的療法，諸如給藥蛋白酶體抑制劑(萬珂(Velcade))、雙磷酸鹽、沙利度胺等。這些藥劑的有效性至少部分是由于它們對骨髓瘤腫瘤微環境的影響。盡管已表明所述藥劑對骨髓瘤的功效，但需要用于治療骨髓瘤和其它腫瘤的新的和改善的藥物。類肝素酶是內-β-葡糖醛酸糖苷酶，其斷裂蛋白聚糖(PG-HS)(諸如多配體聚糖-1)的硫酸類肝素(HS)鏈，從而釋放HS結合生長因子。在人中，似乎有能夠斷裂HS的單一的主導功能性類肝素酶。類肝素酶由許多人腫瘤表達，在所述人腫瘤中，其顯著增加腫瘤細胞的血管生成和轉移能力。實際上，已將升高的類肝素酶水平與許多腫瘤類型的晚期進展和轉移相關。例如，高水平的類肝素酶與患者較短的手術后存活時間相關。在Vlodavsky和Sanderson教授的實驗室已證明類肝素酶在腫瘤轉移中的直接作用，在所述實驗室測試了我們的新型抑制劑。除了其酶促功能(包括由侵入性細胞釋放HS結合的生長因子以及細胞外基質(ECM)的降解)，類肝素酶還具有非酶促功能，其可影響腫瘤行為及其微環境。Sanderson的課題組率先開始了類肝素酶和多配體聚糖-1在骨髓瘤中的研究，證明類肝素酶在侵略性腫瘤表型中起主要調節劑的作用。這通過促進VEGF和MMP-9(其共同刺激腫瘤生長、轉移和溶骨性骨破壞)向上調節來進行。實際上，這表明在體內類肝素酶促進骨髓瘤腫瘤的生長和向骨的自發性轉移，并且通過腫瘤細胞的類肝素酶表達推動了激烈的骨質溶解，這至少部分是由于RANKL表達的向上調節。所述類肝素酶的骨質溶解促進作用可能是非常重要的，因為當骨退化時釋放骨結合生長因子。此外，破骨細胞可釋放腫瘤生長促進因子，諸如HGF。這些因子一起可有助于建立骨髓內的合適環境(niche)，其支持腫瘤細胞尋靶和隨后的生長(Fux,L.等人2009,Heparanase:busyatthecellsurface.TrendsBiochemSci34(10):511-519；SandersonR.D.和YangY.,2008,Syndecan-1:adynamicregulatorofthemyelomamicroenvironment.Clin.ExpMetastasis25:149-59；IlanN.等人2006.Regulation,functionandclinicalsignificanceofheparanaseincancermetastasisandangiogenesis.Int.J.Biochem.CellBiol.38:2018-2039)。因此，類肝素酶的抑制是骨髓瘤療法的可行靶點，這由以下事實支持：具有單一的酶促活性類肝素酶，并且其在正常組織中的表達稀少。此外，以表明類肝素酶敲除小鼠可存活，并且未表現可見病癥。這表明源自類肝素酶抑制策略有較小或無副作用(CasuB.等人2008.Non-anticoagulantheparinsandinhibitionofcancer.PathophysiolHaemostThromb.36:195-203；VlodavskyI.等人2007.Heparanase:structure,biologicalfunctions,andinhibitionbyheparin-derivedmimeticsofheparansulfate.CurrPharmDes.13:2057-2073；NaggiA.等人2005.ModulationoftheHeparanase-inhibitingActivityofHeparinthroughSelectiveDesulfation,GradedN-Acetylation,andGlycolSplitting.J.Biol.Chem.280:12103-12113)。肝素是葡糖胺聚糖家族的線性多分散硫酸化多糖，其具有抗凝血和抗血栓形成活性。肝素的糖鏈由交替的糖醛酸和D-葡糖胺殘基組成。主要的重復單元是二糖2-O-硫酸化L-艾杜糖醛酸(IdoA2S)α(1→4)和N-,6-O-硫酸化D-葡糖胺(GlcN6S)。較少組分是非硫酸化L-艾杜糖醛酸和D-葡糖醛酸，以及N-乙酰基D-葡糖胺和N-,3-O-,6-O-三硫酸化D-葡糖胺(CasuB.,2005.Structureandactivedomainsofheparin.In:ChemistryandBiologyofHeparinandHeparanSulfate.Amsterdam:Elsevier.1-28；CasuB.和LindahlU.2001,Structureandbiologica本文檔來自技高網...

【技術保護點】
制備抑制類肝素酶的葡糖胺聚糖衍生物的方法，其包括：a)葡糖胺聚糖的25％?100％的N?硫酸化殘基的N?脫硫酸化；b)所述葡糖胺聚糖的25％?100％的2?N?,3?O?非硫酸化葡糖胺殘基和2?O?非硫酸化糖醛酸殘基在有效將相鄰的二醇和相鄰的OH/NH2轉化為醛的條件下的氧化，優選在5.5?10.0的pH下通過高碘酸鹽進行；c)所述氧化的葡糖胺聚糖在有效將所述醛轉化為醇的條件下的還原，優選通過硼氫化鈉進行。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2013.10.31 IT LO2013A0000051.制備抑制類肝素酶的葡糖胺聚糖衍生物的方法，其包括：
a)葡糖胺聚糖的25％-100％的N-硫酸化殘基的N-脫硫酸化；
b)所述葡糖胺聚糖的25％-100％的2-N-,3-O-非硫酸化葡糖胺殘基和
2-O-非硫酸化糖醛酸殘基在有效將相鄰的二醇和相鄰的OH/NH2轉化為醛
的條件下的氧化，優選在5.5-10.0的pH下通過高碘酸鹽進行；
c)所述氧化的葡糖胺聚糖在有效將所述醛轉化為醇的條件下的還原，
優選通過硼氫化鈉進行。
2.權利要求1的方法，其還包括：
d)在N-脫硫酸化之前或之后，所述葡糖胺聚糖的至多50％，優選至多
25％的2-O-硫酸化殘基的2-O-脫硫酸化。
3.之前權利要求中任一項的方法，其還包括：
e)在N-脫硫酸化之前或之后，所述葡糖胺聚糖的N-乙?；瘹埢牟糠?br>或全部脫乙?；?。
4.之前權利要求中...

【專利技術屬性】
技術研發人員：G·托瑞，A·納吉，
申請(專利權)人："G龍佐尼"SR生化高科技研究中心，
類型：發明
國別省市：意大利;IT