一種馬來酸匹杉瓊的高效液相色譜分析檢測方法技術

本發明專利技術屬于抗腫瘤藥物的分析檢測方法技術領域，具體公開了一種馬來酸匹杉瓊的高效液相色譜分析檢測方法，將配制的馬來酸匹杉瓊濃度為0.1~1mg/ml的溶液注入以烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的高效液相色譜柱中，用含庚烷磺酸鈉水溶液、二氧六環與色譜純有機溶劑組成的流動相沖洗分離，再用240~250nm的紫外光分析檢測。本發明專利技術方法可用于分析檢測馬來酸匹杉瓊的純度及相關雜質，可以應用于馬來酸匹杉瓊和以馬來酸匹杉瓊為主藥成分的藥物制劑的生產、檢驗和貯存過程中的質量控制。該方法首次在流動相中創造性地加入一定量的二氧六環，徹底解決了主峰與雜質峰以及相鄰雜質峰間分離困難的難題，操作簡便、分離度大、靈敏度高、準確性好。

【技術實現步驟摘要】
一種馬來酸匹杉瓊的高效液相色譜分析檢測方法
本專利技術涉及抗腫瘤藥物的分析檢測方法
，具體涉及一種馬來酸匹杉瓊的高效液相色譜分析檢測方法，即通過高效液相色譜法分析檢測馬來酸匹杉瓊的純度以及有關物質。
技術介紹
馬來酸匹杉瓊：化學名稱為6,9-二[(2-氨乙基)氨基]苯并[G]異喹啉-5,10-二酮二馬來酸鹽，分子量為557.5。馬來酸匹杉瓊結構式為：馬來酸匹杉瓊由總部設在西雅圖的生物科技公司細胞治療公司CellTherapeutics(納斯達克股票代碼：CTIC)上市銷售。本品最初于2003年由意大利的Novuspharma公司合成，隨后CellTherapeutics公司對化合物進行了修飾，以減少對心臟的毒性，而這種毒性會限制現有蒽環類藥物的劑量和有效性。2012年，本品獲得歐盟有條件許可，和美國的“加快審批”類似，有條件上市許可主要授予針對目前臨床治療藥物未滿足需求并且預計其上市后可帶來顯著公共健康益處的藥品，批準附有條件，CTI將需要進行上市后臨床研究以進一步證實此前觀察到的短期臨床益處。本品在英國、德國、奧地利、丹麥、芬蘭、意大利、荷蘭、瑞典等國上市銷售，商品名為Pixuvri。一定的酸度有利于提高馬來酸匹杉瓊在水溶液中的穩定性，但是，如果酸度太低，或者溶液呈堿性，以及氧化劑和還原劑會降低馬來酸匹杉瓊的穩定性。由于馬來酸匹杉瓊易環合，測定馬來酸匹杉瓊時要注意同時分析檢測其環合產物，目前尚未發現有關6-氟-9-氨基乙胺苯并[g]異喹啉-5,10二酮、9-氟-6-氨基乙胺苯并[g]異喹啉-5,10二酮、6-氨基乙胺-8,9-哌嗪苯并[g]異喹啉-5,10二酮、9-氨基乙胺-6,7-哌嗪苯并[g]異喹啉-5,10二酮、6,9-二氟苯并[g]異喹啉-5,10二酮各雜質在同一色譜條件下的檢測方法。因此，需要建立一種靈敏度高，與雜質分離度好，并且能夠檢測馬來酸匹杉瓊在溶液中環合產物的方法。
技術實現思路
本專利技術涉及一種馬來酸匹杉瓊純度的高效液相色譜分析檢測方法，此方法理論板數、分離度、拖尾因子等均能滿足藥物分析檢測的要求，檢測靈敏，方便迅速，適合于馬來酸匹杉瓊純度的測定以及雜質和有關物質的分析。針對現有技術中存在的不足，本專利技術所要解決的技術問題是如何采用一般的十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱準確地分析檢測馬來酸匹杉瓊的純度。本專利技術為解決以上技術問題，首次在流動相中創造性地加入一定量的二氧六環，徹底解決了主峰與雜質峰以及相鄰雜質峰之間分離困難的難題，操作簡便、靈敏度高、準確性好。提供了一種馬來酸匹杉瓊純度及有關物質的檢測方法，用于分析檢測馬來酸匹杉瓊的純度，本方法特別適合使用一般的硅烷鍵合硅膠柱，尤其是十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱分析檢測馬來酸匹杉瓊的純度，經文獻檢索，尚無類似文獻報道。本專利技術提供的技術方案是：一種馬來酸匹杉瓊的高效液相色譜分析檢測方法，包括如下步驟：a.取馬來酸匹杉瓊藥物，用水和有機溶劑的混合溶液，或者用流動相配制成含馬來酸匹杉瓊100～1000μg/ml的溶液；上述馬來酸匹杉瓊溶液的配制可使用水和有機溶劑的混合溶液，也可以使用流動相，但考慮到溶液的穩定性，優選用流動相作為溶劑來配制；優選的，所配制的溶液中馬來酸匹杉瓊濃度為500μg/ml；所述水和有機溶劑的混合溶液中有機溶劑選自醇類或腈類有機溶劑，優選甲醇或乙腈。優選的，所述流動相為用水、乙腈和二氧六環體積比為(70～80):(10～30):(1～10)的混合液溶解庚烷磺酸鈉后，用磷酸調節pH至2.5～3.5所得溶液，所述流動相中庚烷磺酸鈉的濃度為15～25mmol/L，最佳為20mmol/L；所述混合液中水、乙腈和二氧六環體積比最佳為75:20:5；b.取上述含馬來酸匹杉瓊100～1000μg/ml的溶液適量，注入到高效液相色譜儀中，用流動相進行沖洗，所述高效液相色譜儀中色譜柱以烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；所述烷基硅烷鍵合硅膠優選C8～C18烷基硅烷鍵合硅膠，最佳為十八烷基硅烷鍵合硅膠；c.使用波長為240～250nm的紫外光檢測，最佳檢測波長為247nm。所述馬來酸匹杉瓊藥物優選為馬來酸匹杉瓊原料藥。所述馬來酸匹杉瓊藥物中包括如下已知雜質中的至少一種：①6-氟-9-氨基乙胺苯并[g]異喹啉-5,10二酮、②9-氟-6-氨基乙胺苯并[g]異喹啉-5,10二酮、③6-氨基乙胺-8,9-哌嗪苯并[g]異喹啉-5,10二酮、④9-氨基乙胺-6,7-哌嗪苯并[g]異喹啉-5,10二酮、⑤6,9-二氟苯并[g]異喹啉-5,10二酮。所述馬來酸匹杉瓊原料藥中還包括馬來酸匹杉瓊的降解產物；所述馬來酸匹杉瓊的降解產物包括馬來酸匹杉瓊脫乙氨基物，以及馬來酸匹杉瓊在酸、堿、氧化劑和還原劑作用下的降解產物。與現有技術相比，本專利技術分析檢測方法的優點和有益效果在于：本專利技術的馬來酸匹杉瓊純度測定及有關物質的分析檢測方法，經文獻檢索，為首次在流動相中創造性地加入一定量的二氧六環，徹底解決了主峰與雜質峰以及相鄰雜質峰之間分離困難的難題，操作簡便。用于分析檢測馬來酸匹杉瓊時，主峰與雜質、相鄰雜質之間均有較滿意的分離度。附圖說明圖1為實施例1中馬來酸匹杉瓊原料藥的HPLC分析圖；圖2為實施例2中馬來酸匹杉瓊原料藥的HPLC分析圖；圖3為實施例3中馬來酸匹杉瓊原料藥的HPLC分析圖；圖4為實施例4中馬來酸匹杉瓊原料藥的HPLC分析圖；圖5為實施例5中馬來酸匹杉瓊原料藥的HPLC分析圖；圖6為實施例6中馬來酸匹杉瓊原料藥的HPLC分析圖；圖7為實施例7中馬來酸匹杉瓊原料藥的HPLC分析圖；圖8為實施例8中馬來酸匹杉瓊原料藥的HPLC分析圖；圖9為實施例9中馬來酸匹杉瓊原料藥的HPLC分析圖圖10～圖13為實施例10中馬來酸匹杉瓊對照品及雜質對照品的HPLC分析圖。具體實施方式為便于本領域技術人員理解本
技術實現思路
，下面申請人將結合具體實施例進一步描述本專利技術的技術方案，但以下內容不應以任何方式限制本專利技術權利要求書請求保護的范圍。以下諸實施例中，所用主要原材料如下：PixantroneDimaleate(馬來酸匹杉瓊)對照品，CASNumber：144675-97-8；中間體對照品：6-氟-9-氨基乙胺苯并[g]異喹啉-5,10二酮和9-氟-6-氨基乙胺苯并[g]異喹啉-5,10二酮、6-氨基乙胺-8,9-哌嗪苯并[g]異喹啉-5,10二酮和9-氨基乙胺-6,7-哌嗪苯并[g]異喹啉-5,10二酮及6,9-二氟苯并[g]異喹啉-5,10二酮，購自國內某公司，并經結構確證。馬來酸匹杉瓊原料藥為申請人根據常規現有技術自制。乙腈(色譜純)、二氧六環(分析純)、庚烷磺酸鈉(色譜純)、磷酸(分析純，85wt％)。其他均為常規試劑和原材料。實施例1色譜條件：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為用水、乙腈和二氧六環體積比為75:20:5的混合液溶解庚烷磺酸鈉后，用磷酸調節pH至2.5所得溶液(配1L流動相只需加磷酸3～4滴，因此磷酸的用量對體積影響可以忽略不計)，所述流動相中庚烷磺酸鈉的濃度為20mmol/L，流速1.2ml/min，檢測波長247nm，色譜柱：AlltimaC184.6×150mm，5μm，柱溫40℃，進樣量：20μl。供試品溶液制備：取馬來酸匹杉瓊原料藥約50mg，精密本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種馬來酸匹杉瓊的高效液相色譜分析檢測方法，包括如下步驟：a.?取馬來酸匹杉瓊藥物，用流動相配制成含馬來酸匹杉瓊100~1000μg/ml的溶液；所述流動相為用水、乙腈和二氧六環體積比為（70~80）:（10~30）:（1~10）的混合液溶解庚烷磺酸鈉后，用磷酸調節pH至2.5~3.5所得溶液，所述流動相中庚烷磺酸鈉的濃度為15~25?mmol/L；b.?取步驟a所得含馬來酸匹杉瓊100~1000μg/ml的溶液，注入到高效液相色譜儀中，用流動相進行沖洗，所述高效液相色譜儀中色譜柱以烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；c.?使用波長為240~250nm的紫外光檢測。

【技術特征摘要】
1.一種馬來酸匹杉瓊的高效液相色譜分析檢測方法，包括如下步驟：a.取馬來酸匹杉瓊藥物，用流動相配制成含馬來酸匹杉瓊100~1000μg/ml的溶液；所述流動相為用水、乙腈和二氧六環體積比為（70~80）:（10~30）:（1~10）的混合液溶解庚烷磺酸鈉后，用磷酸調節pH至2.5~3.5所得溶液，所述流動相中庚烷磺酸鈉的濃度為15~25mmol/L；b.取步驟a所得含馬來酸匹杉瓊100~1000μg/ml的溶液，注入到高效液相色譜儀中，用流動相進行沖洗，所述高效液相色譜儀中色譜柱以烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；c.使用波長為240~250nm的紫外光檢測。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟a中所述溶液中馬來酸匹杉瓊濃度為500μg/ml。3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述流動相中庚烷磺酸鈉的濃度為20mmol/L。4.根據權利要求1所述的方法，其特征在...

【專利技術屬性】
技術研發人員：汪旭東，戴正琳，錢良友，余丹，史自東，
申請(專利權)人：海南通用康力制藥有限公司，
類型：發明
國別省市：海南;66