本發明專利技術公開了一種直投式發酵劑益生乳酸菌的高密度培養方法：（1）菌種的活化：所用乳酸菌菌株為JSX?A1。菌種劃線接種于MRS平板培養基上，于37℃暗中培養24h。然后，從平板上挑選一個單菌落，接種于5ml?MRS液體培養基中，于37℃連續培養24?48h；（2）乳酸菌JSX?A1的高密度培養：在MRS液體培養基中添加5?10g/L的果糖及5?10%的牛蒡根提取物JSX?PE1，調節pH?6.6?6.8，高壓滅菌20min，接種3%活化的JSX?A1菌液，在37℃、200r/min條件下培養12h，然后添加滅菌的10g/L的葡萄糖和5g/L果糖及5?10%的NaHCO3再繼續培養10?12h。最終乳酸菌密度可達1012cfu/ml。
【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術公開了：（1）菌種的活化：所用乳酸菌菌株為JSX?A1。菌種劃線接種于MRS平板培養基上，于37℃暗中培養24h。然后，從平板上挑選一個單菌落，接種于5ml MRS液體培養基中，于37℃連續培養24?48h；（2）乳酸菌JSX?A1的高密度培養：在MRS液體培養基中添加5?10g/L的果糖及5?10%的牛蒡根提取物JSX?PE1，調節pH 6.6?6.8，高壓滅菌20min，接種3%活化的JSX?A1菌液，在37℃、200r/min條件下培養12h，然后添加滅菌的10g/L的葡萄糖和5g/L果糖及5?10%的NaHCO3再繼續培養10?12h。最終乳酸菌密度可達1012cfu/ml。【專利說明】_種直投式發酵劑益生乳酸菌的局密度培養方法
本專利技術涉及，屬于微生物發酵工程
技術介紹
乳酸菌，如嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophi Ius )及嗜熱乳酸鏈球菌(Streptococcus thermophilus)是一大類有益菌群(益生菌)，被視為人體重要的“生理器官”，與免疫、營養、代謝等許多生理功能緊密相關，有促于恢復人體自然平衡及提高人體免疫能力等。優質商業化發酵劑是實現乳生菌生產工業化、標準化的必要條件。直投式發酵劑無需進行活化、放大培養等預處理，可省去菌種車間，簡化生產工藝，使生產規范化，在乳生菌生產中具有廣泛的應用前景。目前我國尚缺乏能滿足不同特征產品生產所需的乳酸菌商業化發酵劑，多數發酵乳制品企業主要靠進口國外冷凍干燥乳酸菌發酵劑。發酵劑制備主要包括優質菌種篩選、菌種的高密度培養與放大培養、及活菌的冷凍干燥與保護劑選擇等關鍵技術。優質乳酸菌菌種非常缺乏，乳酸菌產品中活菌數少、活性低，尤其，食用后經過極強酸性環境的消化系統器官胃(PH3.0以下)后，存活的乳酸菌更是很少，食用后很難達到乳酸菌的預期功能。在菌種培養方面，過去主要著重于基礎培養基和培養工藝中單一因素的優化研究，因乳酸菌在生長繁殖過程中不斷產生乳酸，培養液的PH值不斷下降，當pH值降至4左右時，乳酸菌的生長繁殖受到抑制，最終培養液中乳酸菌密度一般僅達到101()Cfu/ml級另O。最近我們利用化學誘變的方法開發了較大規模的乳酸菌突變群體作為新的乳酸菌遺傳種質資源庫，從中高通量選育出了一些生長速度快、特征明顯的菌株。為了生產出低成本、高活性的優質直投式乳酸菌發酵劑，選育優質菌種，并采用改變培養方式如分批流加培養、篩選生長刺激因子及進行代謝調控等綜合措施，實現菌種的高密度培養，容易達到111-1012cfu/ml級別。另外，在細胞和分子水平上研究冷凍干燥過程中保護劑對微生物細胞的保護機制，設計高效保護劑，提高直投式發酵劑菌種存活率，保護其發酵性能等也是一條有效途徑。本專利技術主要通過改變乳酸菌的培養方式及采取一些簡單但實用的代謝調控手段等綜合措施來實現我們從突變群體當中篩選出的一株優質耐強酸乳酸菌的高密度培養，以期生產低成本、高密度的直投式優質益生乳酸菌發酵劑。
技術實現思路
目的:為解決現有技術的不足，本專利技術提供了，通過改變乳酸菌的培養方式及采取一些簡單但實用的代謝調控手段等綜合措施來實現從突變群體當中篩選出的一株優質耐強酸乳酸菌JSX-Al的高密度培養，使培養液中乳酸菌的密度達到1012cfu/ml，以期生產低成本、高密度的直投式優質益生乳酸菌發酵劑。技術方案:為解決上述技術問題，本專利技術采用的技術方案為: ，其步驟為: 1、，其步驟為: (I)基礎培養基制備 MRS液體培養基:I Og/L蛋白胨、10g/L牛肉膏、5g/L酵母粉、20g/L葡萄糖、5g/L無水乙酸鈉、lml/L吐溫-80、2g/L檸檬酸二胺、2g/L磷酸氫二鉀、0.58g//L硫酸鎂，0.25g/L硫酸錳，用蒸餾水溶解，調節pH 6.6-6.8，并定容，高壓(I X 15Pa)滅菌20min。MRS平板培養基:在MRS液體培養基基礎上添加20.0g/L瓊脂，高壓滅菌20min。(2)菌種的活化 所用乳酸菌菌株為生長速度快、耐酸的突變株JSX-Al;菌種劃線接種于MRS平板培養基上，于37°C暗中培養24h;然后，從MRS平板培養基上挑選一個單菌落，接種于5ml MRS液體培養基中，于37 °(:連續培養24-48h，再按3%的接種量接種于MRS液體培養基中，于37 °C連續培養12-24h。(3)乳酸菌密度的檢測 每隔一定時間從MRS培養菌液中抽取少量菌液，然后用蒸餾水稀釋，在顯微鏡下用細胞計算器計數，換算成cfu/ml表示乳酸菌密度。(4)菌種培養基的優化 在MRS液體培養基的基礎上，主要優化了碳源，表明添加一定量的果糖(5-10g/L)可以顯著促進JSX-Al的生長繁殖。(5)培養工藝的優化 用上述優化的培養基對JSX-Al進行液體培養，發現培養12h后添加一定量的中和劑NaHC03(約5-10%)可有促于維持JSX-Al的高速生長； (6)生長刺激因子的篩選 我們制備了一系列的植物中藥抽提物，從中篩選到了一種牛蒡根提取物JSX-PEl可顯著促進JSX-Al的生長與繁殖。JSX-PEl制備步驟如下: 鮮牛蒡根洗干凈后切片，迅速置于沸水中3-5分鐘，撈出，瀝干，烘干。稱取一定量干牛蒡根切片，用70-90°C水提取4小時，料水比為1:4，過濾，濾液保存，濾渣同樣條件下重復提取2次，每次3小時;合并濾液，濃縮得濃縮液，添加無水乙醇，并不斷攪拌，與濃縮液充分混合，然后4°C靜置過夜，分離出沉淀，用無水乙醇洗滌沉淀3次，得JSX-PEl。在MRS培養基中添加5-10%的JSX-PEl即可顯著促進JSX-Al的生長，8.5%的JSX-PEl促進效果最好。(7)分批流加培養 主要是分批流加碳源葡萄糖和果糖，在培養12h時，流加10g/L葡萄糖和5g/L果糖及5%的NaHCO3，乳酸菌能繼續高速生長。(8)高密度培養的完整工藝 MRS液體培養基中添加5-10g/L的果糖及5-10%的牛蒡根提取物JSX-PEl，接種3%的JSX-Al菌液在37°C、200r/min培養12h，然后添加10g/L的葡萄糖和5g/L果糖及5-10%的NaHCO3再繼續培養10_12h ；乳酸菌密度可達1012cfu/ml。【具體實施方式】下面結合實例對本專利技術做具體說明: 實施例1 (I)基礎培養基制備 MRS液體培養基:I Og/L蛋白胨、10g/L牛肉膏、5g/L酵母粉、20g/L葡萄糖、5g/L無水乙酸鈉、lml/L吐溫-80、2g/L檸檬酸二胺、2g/L磷酸氫二鉀、0.58g/L硫酸鎂及0.25g//L硫酸錳，用蒸餾水溶解，調節pH 6.6-6.8，并定容;高壓(I X 15Pa)滅菌20min。MRS平板培養基:在MRS液體培養基基礎上添加20.0g/L瓊脂，高壓滅菌20min。(2)菌種的活化 所用乳酸菌菌株為我們從開發的化學誘變乳酸菌突變群體篩選到的一株生長速度快、耐酸的突變株JSX-Al。菌種劃線接種于MRS平板培養基上，于37°C暗中培養24h。然后，從平板上挑選一個單菌落，接種于5ml MRS液體培養基中，于37°C連續培養24-48h，再按3%的接種量接種于MRS液體培養基中，于37本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種直投式發酵劑益生乳酸菌的高密度培養方法，其步驟為：?（1）菌種的活化：所用乳酸菌菌株為嗜酸乳桿菌株JSX?A1；菌種劃線接種于MRS平板培養基上，于37℃暗中培養24h；然后，從MRS平板培養基上挑選一個單菌落，接種于5ml?MRS液體培養基中，于37℃連續培養24?48h，得到活化的JSX?A1菌液；（2）乳酸菌JSX?A1的高密度培養：在MRS液體培養基中添加5?10g/L的果糖及5?10%的牛蒡根提取物JSX?PE1，調節pH?6.6?6.8，高壓1×105Pa滅菌20min，接種3%上述活化的JSX?A1菌液，在37℃、200r/min條件下培養12h，然后添加滅菌的10g/L的葡萄糖和5g/L果糖及5?10%的NaHCO3再繼續培養10?12h，即可。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉世名，
申請(專利權)人：蘇州健世星生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：江蘇;32
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