用于體內遞送至哺乳動物細胞的、包含無質粒的功能性核酸的、源自細菌的完整小細胞制造技術

完整的、細菌衍生的小細胞可將治療上有效量的無質粒的功能性核酸安全地引入靶標哺乳動物細胞。為此，功能性核酸可被直接包裹進入完整的小細胞，而不需要借助表達構建體、宿主細胞的表達機制、刺激性的化學物質或電穿孔。

【技術實現步驟摘要】
201610277472

【技術保護點】
一種組合物，所述組合物包括：(a)多個完整的、源自細菌的無核形式的小細胞，其中所述多個完整的、源自細菌的小細胞中的每個小細胞包含調節性RNA，和(b)用于小細胞的藥學上可接受的載體，其中：(1)所述小細胞不含用于所述調節性RNA的原位表達的構建體，(2)所述調節性RNA通過與所述小細胞在沒有所述構建體的條件下共培育而被直接包裹進所述小細胞內，(3)所述調節性RNA選自：反義ssRNA、核酶和誘殺RNA，并且(4)所述多個完整的、源自細菌的無核形式的小細胞含有治療上有效量的所述調節性RNA。

【技術特征摘要】
2007.03.30 US 60/909,0741.一種組合物，所述組合物包括：(a)多個完整的、源自細菌的無核形式的小細胞，其中所述多個完整的、源自細菌的小細胞中的每個小細胞包含調節性RNA，和(b)用于小細胞的藥學上可接受的載體，其中：(1)所述小細胞不含用于所述調節性RNA的原位表達的構建體，(2)所述調節性RNA通過與所述小細胞在沒有所述構建體的條件下共培育而被直接包裹進所述小細胞內，(3)所述調節性RNA選自：反義ssRNA、核酶和誘殺RNA，并且(4)所述多個完整的、源自細菌的無核形式的小細胞含有治療上有效量的所述調節性RNA。2.如權利要求1所述的組合物，其中，所述調節性RNA靶定編碼介導抗藥性、抗凋亡性或瘤生成的蛋白質的RNA轉錄體。3.如權利要求1或2所述的組合物，其中，所述調節性RNA靶定如下轉錄體：(a)P-糖蛋白、MDR-2或MDR-3的轉錄體；(b)MRP2、BCR-ABL、介導STI-571耐藥性的蛋白、肺耐藥相關蛋白LRP、環氧酶-2、核因子κ、XRCC1、ERCC1、GSTP1、突變的β-微管蛋白或生長因子的轉錄體；(c)Bcl-2、Bcl-XL、A1/Bfl1、黏著斑激酶或p53蛋白的轉錄體；或(d)β-聯蛋白、PKC-α、C-RAF、K-Ras、DP97Dead框RNA解旋酶、cdk1、DNMT1、FLIP、C-Sfc、53BPI、聚梳家族蛋白EZH2、ErbB1、HPV-16E5和E7、Fortilin&MCI1P、KSP、DIP13α、MBD2、p21、KLF4、tpt/TCTP、SPK1&SPK2、P300、PLK1、Trp53、Ras、ErbB1、VEGF或BAG-1的轉錄體。4.如權利要求1至3任一項所述的組合物，其進一步包含藥物。5.如權利要求4所述的組合物，其中，所述調節性RNA靶定編碼介導對所述藥物的耐藥性的蛋白質的轉錄體。6.如權利要求5所述的組合物，其中，所述藥物被包裹在完整的、源自細菌的無核形式的小細胞內。7.如權利要求6所述的組合物，其中，所述調節性RNA和所述藥物被包裹在相同的小細胞內。8.如權利要求1至7任一項所述的組合物，其進一步包含雙特異性配體，所述雙特異性配體包含攜帶對小細胞表面結構特異性的第一個臂和攜帶對非噬菌性哺乳動物細胞表面受體特異性的第二個臂。9.如權利要求8所述的組合物，其中，所述哺乳動物細胞表面受體能夠激活所述小細胞的受體介導的內吞作用。10.如權利要求8或9所述的組合物，其中，所述雙特異性配體包含抗體或抗體片段。11.如權利要求1至10任一項所述的組合物，其中，(a)所述組合物中每109個小細胞含有約1個污染性親代細菌細胞或者更少；(b)所述組合物中每1010個小細胞含有約1個污染性親代細菌細胞或者更少；或(c)所述組合物中每1011個小細胞含有約1個污染性親代細菌細胞或者更少。12.如權利要求1至11任一項所述的組合物，其中，所述調節性RNA是反義ssRNA。13.如權利要求1至11任一項所述的組合物，其中，所述調節性RNA是核酶。14.如權利要求1至11任一項所述的組合物，其中，所述調節性RNA是誘殺RNA。15.如權利要求1至14任一項所述的組合物，其作為藥劑使用。16.如權利要求15所述的組合物，所述藥劑可用于抗藥性、抗凋亡性或瘤生成的治療。17.一種組合物，其包含：(a)多個完整的小細胞，所述多個完整小細胞中的每個小細胞包含無質粒的功能性核酸，和(b)至少一種藥學上可接受的載體。18.如權利要求17所述的組合物，其中所述多個完整的小細胞含有治療上有效量的所述功能性核酸。19.如權利要求17或18所述的組合物，其中所述功能性核酸是調節性RNA或DNA。20.如權利要求19所述的組合物，其中所述調節性RNA選自siRNA、miRNA、shRNA、反義ssRNA、核酶和誘殺RNA。21.如權利要求17至20任一項所述的組合物，其中，(a)所述功能性核酸靶定編碼有助于抗凋亡性的蛋白質的RNA轉錄體，其中所述轉錄體是Bcl-2、Bcl-XL、A1/Bfl1、黏著斑激酶或p53蛋白的轉錄體；或(b)所述功能性核酸靶定編碼有助于瘤生成的蛋白質的RNA轉錄體，其中所述轉錄體是β-聯蛋白、PKC-α、C-RAF、K-Ras、DP97Dead框RNA解旋酶、
\tcdk1、DNMT1、FLIP、C-Sfc、53BPI、聚梳家族蛋白EZH2、ErbB1、HPV-16E5、HPV-16E7、Fortilin&MCI1P、KSP、DIP13α、MBD2、p21、KLF4、tpt/TCTP、SPK1&SPK2、P300、PLK1、Trp53、Ras、ErbB1、VEGF或BAG-1的轉錄體。22.如權利要求17至21任一項所述的組合物，其進一步包含藥物。23.如權利要求22所述的組合物，其中所述功能性核酸靶定編碼有助于抗所述藥物的蛋白質的轉錄體。24.如權利要求22或23所述的組合物，其中所述藥物被包裹在完整的小細胞內。25.如權利要求24所述的組合物，其中所述功能性核酸和所述藥物被包裹在相同的小細胞內。26.如權利要求17至25任一項所述的組合物，其進一步包含雙特異性配體，其中，所述雙特異性配體包含：...

【專利技術屬性】
技術研發人員：希曼休·布蘭巴特，珍妮弗·麥克迪爾米德，托比·哈爾夫，
申請(專利權)人：因詹尼克分子遞送控股有限公司，
類型：發明
國別省市：澳大利亞;AU