一種磁珠分離制備骨多肽的方法技術

本發明專利技術提供一種骨多肽的制備方法，采用磁珠表面包被殼多糖后，經檸檬酸處理可與樣品中的多肽類物質特異性結合，通過外加磁場，磁珠與多肽被一起吸附而滯留在磁場中，從而達到多肽的快速富集與分離，可以解決其他純化方法所遇到的問題，并且能夠大量快速的從動物骨骼酶解液中選擇性提取多肽，所得產品為白色幾無腥味，含氮量高。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及保健食品領域，特別涉及一種磁珠分離制備骨多肽的方法。
技術介紹
近年來生物活性肽結構和功能研究再現高潮，促進了多肽營養的發展與概念更新，飲食中的多肽除了作為營養物具有促進機體新陳代謝、生長發育功能外，還賦予調節機體生理功能和免疫力的雙重功能。因此，多肽產品已經成為人體健康的重要物質，受到廣大消費者的青睞。現階段開發的產品主要集中在海洋魚低聚肽、雞頭骨多肽等產品，其基本方法是將動物鮮骨在高溫、高壓下蒸煮脫脂后，加入蛋白酶制劑對骨液酶解，酶解后得小分子多肽物質。然而，這些多肽產品雖然具有良好的功效，但是，目前制備骨肽產品的工藝主要采用提取活性成分后加熱酶解后噴霧干燥得到產品，采用的純化手段是色譜法或者有機溶劑萃取等，缺點是難以大規模制備、環境污染、無法完全避免混入脂肪等雜質影響多肽產品的品質。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種得到高純骨多肽的方法，其特征在于使用磁珠分離法，通過吸附反吸附配合，選擇性提取酶解液中的多肽類物質。解決目前生產骨多肽產品中含有脂肪等非多肽類雜質缺點。本專利技術為實現上述目的所采用的的技術方案為：選擇性分離多肽磁珠的制備：取1單位重量的裸磁珠，加入磁珠重量1-5倍的殼聚糖醋酸溶液，攪拌10分鐘至60分鐘，去掉上清液，然后加入與磁珠重量1-10倍的檸檬酸鈉水溶液，劇烈攪拌下室溫反應30分鐘至60分鐘，去掉上清液，用與磁珠重量1-3倍的清水洗滌磁珠三次，備用；多肽的吸附：在制備好的骨多肽酶解液中加入步驟(1)中制備好的磁珠，磁珠用量占骨重量5～10％，攪拌0.5至2小時，外加磁場將磁珠固定于反應釜底部，除去上清液，再用純凈水洗磁珠3次；多肽的反吸附：向反應釜加入牛骨質量相等的純凈水，煮沸攪拌，然后通過磁場將磁珠固定于反應釜底部，吸取上清液，得多肽溶液；噴霧干燥：將所得上清液噴霧干燥，控制進風口溫度150-160℃，出風口70-80
℃，既得骨多肽粉。本專利技術步驟(2)所用骨酶解液按如下操作制備：活性成分的提?。喝∏逑春玫膭游锕趋溃扑槌?～8cm左右的碎塊，稱取1單位重量的碎骨加至反應釜中，加入3-5單位重量的水，控制體系溫度在101℃至110℃，壓力為0.2MPa至1MPa；8至12小時后，將固液分離，除去脂肪層，收集水層；酶解：將收集的水層置于反應釜中，加入酶，控制溫度為35℃至45℃，pH值為6.0～7.0；6至8小時后加熱至90℃保持15分鐘，停止加熱；將酶解液離心取上清液加入0.1％單位的活性炭攪拌15min，超濾除去活性炭，收集酶解液，即得。酶解步驟所用的酶為胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、風味蛋白酶、堿性蛋白酶、中性蛋白酶、彈性蛋白酶中的一種或多種。所述酶的用量為骨骼重量的0.1～0.5％。優選為木瓜蛋白酶和風味蛋白酶，所述木瓜蛋白酶的用量為骨骼重量的0.1～0.2％，優選0.15％。所述風味蛋白酶的用量為骨骼重量的0.3～0.5％，優選0.4％。本專利技術采用磁珠表面包被殼多糖后，經檸檬酸處理可與樣品中的多肽類物質特異性結合，通過外加磁場，磁珠與多肽被一起吸附而滯留在磁場中，從而達到多肽的快速富集與分離，可以解決其他純化方法所遇到的問題。并且能夠大量快速的從動物骨骼酶解液中選擇性提取多肽，所得產品為白色幾無腥味，含氮量高。具體實施方式對比實施例1骨多肽酶解液的制備：取清洗好的牛骨骼，破碎成1～8cm左右的碎塊，稱取1單位重量的碎骨加至反應釜中，加入3-5單位重量的水，控制體系溫度在101℃至110℃，壓力為0.2MPa至1MPa；8至12小時后，將固液分離，除去脂肪層，收集水層；將收集的水層置于反應釜中，加入骨骼重量0.2％的木瓜蛋白酶，控制溫度為35℃至45℃，pH值為6.0～7.0；6至8小時后加熱至90℃保持15分鐘，停止加熱；將酶解液離心取上清液加入0.1％單位的活性炭攪拌15min，超濾除去活性炭，收集酶解液，即得。色譜法分離：將制備好的牛骨多肽酶解液500mL通過裝有大孔樹脂的色譜
柱，收集濾液；噴霧干燥：將所得上清液噴霧干燥，控制進風口溫度150-160℃，出風口70-80℃，既得多肽粉。對比實施例2骨多肽酶解液的制備：取清洗好的牛骨骼，破碎成1～8cm左右的碎塊，稱取1單位重量的碎骨加至反應釜中，加入3-5單位重量的水，控制體系溫度在101℃至110℃，壓力為0.2MPa至1MPa；8至12小時后，將固液分離，除去脂肪層，收集水層；將收集的水層置于反應釜中，加入骨骼重量0.5％的風味蛋白酶，控制溫度為35℃至45℃，pH值為6.0～7.0；6至8小時后加熱至90℃保持15分鐘，停止加熱；將酶解液離心取上清液加入0.1％單位的活性炭攪拌15min，超濾除去活性炭，收集酶解液，即得。有機溶劑提取法脫脂：將取100mL酶解液蒸干，加100mL正己烷攪拌30分鐘，過濾收集濾餅；將濾餅烘干，加水50mL溶解，離心取上清液；噴霧干燥：將所得上清液噴霧干燥，控制進風口溫度150-160℃，出風口70-80℃，既得多肽粉。實施例1(1)選擇性分離多肽磁珠的制備：取1單位重量的裸磁珠，加入與磁珠3倍質量體積比的用1％的醋酸溶解的殼聚糖溶液，攪拌15分鐘，去掉上清液，然后加入與磁珠5倍質量體積比的10％的檸檬酸鈉水溶液，劇烈攪拌下室溫反應30分鐘，去掉上清液，用與磁珠1倍質量體積比的清水洗滌磁珠三次備用；(2)多肽的吸附：將制備好的牛骨多肽酶解液加入牛骨重量10％按步驟1中制備好的磁珠，攪拌2小時，通過磁場將磁珠固定于反應釜底部，除去上清液，再用純凈水洗磁珠3次；(3)多肽的反吸附：向反應釜加入牛骨質量相等的純凈水，煮沸攪拌，然后通過磁場將磁珠固定于反應釜底部，吸取上清液，得多肽溶液；(4)噴霧干燥：將所得上清液噴霧干燥，控制進風口溫度150-160℃，出風口70-80℃，既得多肽粉。步驟(2)骨多肽酶解液的制備：取清洗好的牛骨骼，破碎成1～8cm左右的碎塊，稱取1單位重量的碎骨加至反應釜中，加入3-5單位重量的水，控制體系
溫度在101℃至110℃，壓力為0.2MPa至1MPa；8至12小時后，將固液分離，除去脂肪層，收集水層；將收集的水層置于反應釜中，加入骨骼重量0.2％的木瓜蛋白酶，控制溫度為35℃至45℃，pH值為6.0～7.0；6至8小時后加熱至90℃保持15分鐘，停止加熱；將酶解液離心取上清液加入0.1％單位的活性炭攪拌15min，超濾除去活性炭，收集酶解液，即得。實施例2(1)選擇性分離多肽磁珠的制備：取1單位重量的裸磁珠，加入與磁珠5倍質量體積比的用3％的醋酸溶解的殼聚糖溶液，攪拌60分鐘，去掉上清液，然后加入與磁珠10倍質量體積比的8％的檸檬酸鈉水溶液，劇烈攪拌下室溫反應30分鐘，去掉上清，用與磁珠3倍質量體積比的清水洗滌磁珠三次備用；(2)多肽的吸附：將制備好的牛骨多肽酶解液加入牛骨重量7％按步驟1中制備好的磁珠，攪拌1小時，外加磁場將磁珠固定于反應釜底部，除去上清液，再用純凈水洗磁珠3次；(3)多肽的反吸附：向反應釜加入牛骨質量相等的純凈水，煮沸攪拌，然后通過磁場將磁珠固定于反應釜底部，吸取上清液，得多肽溶液；(4)噴霧干燥：將所得上清液噴霧干燥，控制進風口溫度150-160℃，出風口70-80℃，既得多肽粉。步驟(本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種骨多肽的制備方法，包括以下步驟：(1)選擇性分離多肽磁珠的制備：取1單位重量的裸磁珠，加入磁珠重量1?5倍的殼聚糖醋酸溶液，攪拌10分鐘至60分鐘，去掉上清液，然后加入與磁珠重量1?10倍的檸檬酸鈉水溶液，劇烈攪拌下室溫反應30分鐘至60分鐘，去掉上清液，用與磁珠重量1?3倍的清水洗滌磁珠三次，備用；(2)多肽的吸附：在制備好的骨多肽酶解液中加入步驟(1)中制備好的磁珠，磁珠用量占骨重量5～10％，攪拌0.5至2小時，外加磁場將磁珠固定于反應釜底部，除去上清液，再用純凈水洗磁珠3次；(3)多肽的反吸附：向反應釜加入牛骨質量相等的純凈水，煮沸攪拌，然后通過磁場將磁珠固定于反應釜底部，吸取上清液，得多肽溶液；(4)噴霧干燥：將所得上清液噴霧干燥，得骨多肽。

【技術特征摘要】
1.一種骨多肽的制備方法，包括以下步驟：(1)選擇性分離多肽磁珠的制備：取1單位重量的裸磁珠，加入磁珠重量1-5倍的殼聚糖醋酸溶液，攪拌10分鐘至60分鐘，去掉上清液，然后加入與磁珠重量1-10倍的檸檬酸鈉水溶液，劇烈攪拌下室溫反應30分鐘至60分鐘，去掉上清液，用與磁珠重量1-3倍的清水洗滌磁珠三次，備用；(2)多肽的吸附：在制備好的骨多肽酶解液中加入步驟(1)中制備好的磁珠，磁珠用量占骨重量5～10％，攪拌0.5至2小時，外加磁場將磁珠固定于反應釜底部，除去上清液，再用純凈水洗磁珠3次；(3)多肽的反吸附：向反應釜加入牛骨質量相等的純凈水，煮沸攪拌，然后通過磁場將磁珠固定于反應釜底部，吸取上清液，得多肽溶液；(4)噴霧干燥：將所得上清液噴霧干燥，得骨多肽。2.根據權利要求1所述的骨多肽的制備方法，其特征在于，步驟(2)所述的骨多肽酶解液采用如下方式制備：取清洗好的動物骨骼，破碎成1～8cm左右的碎塊，稱取1單位重量的碎骨加至反應釜中，加入3-5單位重量的水，控制體系溫度在101℃至110℃，壓力為0.2MPa至1MPa；8至12小時后，將固液分...

【專利技術屬性】
技術研發人員：林波，于秀玲，明躍升，趙海娜，韓風雨，孔新穎，李洪澤，
申請(專利權)人：內蒙古天奇生物科技有限公司，內蒙古天奇中蒙制藥股份有限公司，赤峰陸爾草中蒙藥科技有限公司，
類型：發明
國別省市：內蒙古;15