本發(fā)明專利技術(shù)公開了SFI1基因或SFI1蛋白可以作為診斷冠心病的工具。通過檢測受試者血液中的SFI1基因或SFI1蛋白的表達水平即可判斷受試者是否患有冠心病。另外，SFI1基因或SFI1蛋白還可以作為預測冠心病患者預后的工具，通過檢測受試者血液中的SFI1基因或SFI1蛋白的表達水平即可判斷冠心病患者的預后情況。本發(fā)明專利技術(shù)的研究成果為臨床上提供了一種新的冠心病的診斷方法和預測預后的方法。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及冠心病診斷、預測預后領(lǐng)域，更具體地，本專利技術(shù)涉及以檢測SFI1異常為手段的冠心病診斷、預測預后方法。
技術(shù)介紹
動脈粥樣硬化性心腦血管病已成為世界范圍關(guān)注的主要健康問題。2004年的世界衛(wèi)生組織(WHO)報告顯示，全世界每年心血管疾病以冠心病和腦卒中為主導致的死亡人數(shù)達高達1720萬，占所有死亡人數(shù)的三分之一。預計2020年這一數(shù)字將進一步增加50％，高達2500萬，心血管疾病是全球人類的“頭號殺手”。在中國進行的一項大規(guī)模前瞻性研究也顯示，心臟疾病已經(jīng)成為中國人群的主要死亡原因，分列男、女性死亡原因的第2位和第1位。我國每年新發(fā)心肌梗死50萬人，隨著生活方式的改變以及動脈粥樣硬化相關(guān)的危險因素持續(xù)增加，冠心病與心肌梗死發(fā)病也還將呈持續(xù)上升趨勢。大量的研究資料表明，冠心病是一種復雜疾病，是由多個微效基因與環(huán)境因素長期相互作用所致。因此鑒定出與冠心病相關(guān)的易感基因或致病基因，在人群中進一步篩選增加疾病風險的易感基因確定易感個體，將有助于冠心病的發(fā)病風險預測、新藥開發(fā)、診斷和個體化治療。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的之一在于提供一種通過檢測SFI1基因或蛋白表達差異來診斷冠心病的方法。本專利技術(shù)的目的之二在于提供一種通過檢測SFI1基因或蛋白表達差異來預測冠心病預后的方法。為了實現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用了如下技術(shù)方案：本專利技術(shù)提供了檢測SFI1基因或SFI1蛋白的產(chǎn)品在制備冠心病診斷工具中的用途。本專利技術(shù)還提供了檢測SFI1基因或SFI1蛋白的產(chǎn)品在制備預測冠心病預后工具中的用途。進一步，所述檢測SFI1基因或SFI1蛋白的產(chǎn)品包括檢測SFI1基因或SFI1蛋白的表達水平的產(chǎn)品。所述產(chǎn)品包括能夠結(jié)合SFI1基因的核酸或者能夠結(jié)合SFI1蛋白的物質(zhì)(例如抗體)。所述核酸能夠檢測SFI1基因的表達水平；所述物質(zhì)能夠檢測SFI1蛋白的表達水平。本專利技術(shù)的檢測SFI1基因的產(chǎn)品可基于使用核酸分子的已知方法來發(fā)揮其功能：如PCR、如Southern雜交、Northern雜交、點雜交、熒光原位雜交(FISH)、DNA微陣列、ASO法、高通量測序平臺等。使用該產(chǎn)品可以定性地、定量地、或半定量地實施分析。包含在上述產(chǎn)品中的核酸可以通過化學合成來獲得，或通過從生物材料制備含有期望核酸的基因，然后使用設(shè)計用于擴增期望核酸的引物擴增它來獲得。進一步，所述PCR方法為已知方法，例如，ARMS(Amplification Refractory Mutation System，擴增不應(yīng)突變系統(tǒng))法、RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄酶-PCR)法、嵌套PCR法等等。擴增的核酸可以通過使用點印跡雜交法、表面等離子共振法(SPR法)、PCR-RFLP法、原位RT-PCR法、PCR-SSO(序列特異性寡核苷酸)法、PCR-SSP法、AMPFLP(可擴增片段長度多態(tài)性)法、MVR-PCR法、和PCR-SSCP(單鏈構(gòu)象多態(tài)性)法來檢測。上面所述的核酸包括擴增SFI1基因的引物，產(chǎn)品中包括的引物可以通過通過化學合成來制備，通過使用本領(lǐng)域技術(shù)人員知道的方法參考已知信息來適當?shù)卦O(shè)計，并通過化學合成來制備。在本專利技術(shù)的具體實施方案中，所述核酸為QPCR實驗中使用的擴增引物，所述引物的序列如SEQ ID NO.1(正向序列)和SEQ ID NO.2(反向序列)所示。上面所述的核酸還可包括探針，所述探針可以通過化學合成來制備，通過使用本領(lǐng)域技術(shù)人員知道的方法參考已知信息來恰當設(shè)計，并通過化學合成來制備，
或者可以通過從生物材料制備含有期望核酸序列的基因，并使用設(shè)計用于擴增期望核酸序列的引物擴增它來制備。本專利技術(shù)的檢測SFI1蛋白的產(chǎn)品可基于使用抗體的已知方法來發(fā)揮其功能：例如，可以包括ELISA、放射免疫測定法、免疫組織化學法、Western印跡等。本專利技術(shù)的檢測SFI1蛋白的產(chǎn)品包括特異性結(jié)合SFI1蛋白的抗體或其片段。可以使用任何結(jié)構(gòu)、尺寸、免疫球蛋白類別、起源等的抗體或其片段，只要它結(jié)合靶蛋白質(zhì)即可。本專利技術(shù)的檢測產(chǎn)品中包括的抗體或其片段可以是單克隆的或多克隆的。抗體片段指保留抗體對抗原的結(jié)合活性的抗體一部分(部分片段)或含有抗體一部分的肽。抗體片段可以包括F(ab′)2、Fab′、Fab、單鏈Fv(scFv)、二硫化物鍵合的Fv(dsFv)或其聚合物、二聚化V區(qū)(雙抗體)、或含有CDR的肽。本專利技術(shù)的檢測SFI1蛋白的產(chǎn)品可以包括編碼抗體或編碼抗體片段的氨基酸序列的分離的核酸，包含該核酸的載體，和攜帶該載體的細胞。抗體可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法來獲得。例如，制備保留整個或部分靶蛋白質(zhì)的多肽或整合編碼它們的多核苷酸的哺乳動物細胞表達載體作為抗原。使用抗原免疫動物后，從經(jīng)過免疫的動物獲得免疫細胞并融合骨髓瘤細胞以獲得雜交瘤。然后從雜交瘤培養(yǎng)物收集抗體。最后可以通過使用被用作抗原的SFI1蛋白或其部分對獲得的抗體實施抗原特異性純化來獲得針對SFI1蛋白的單克隆抗體。可以如下制備多克隆抗體：用與上文相同的抗原免疫動物，從經(jīng)過免疫的動物收集血液樣品，從血液中分離出血清，然后使用上述抗原對血清實施抗原特異性純化。可以通過用酶處理獲得的抗體或通過使用獲得的抗體的序列信息來獲得抗體片段。標記物與抗體或其片段的結(jié)合可以通過本領(lǐng)域普遍知道的方法來實施。例如，可以如下熒光標記蛋白質(zhì)或肽：用磷酸鹽緩沖液清洗蛋白質(zhì)或肽，添加用DMSO、緩沖劑、等準備的染料，然后混合溶液，再于室溫放置10分鐘。另外，標記可使用商品化的標記試劑盒，諸如生物素標記試劑盒，如生物素標記試劑盒-NH2、生物素標記試劑盒-SH(DojindoLaboratories)；堿性磷酸酶標記試劑盒諸如堿性磷酸酶標記試劑盒-NH2、堿性磷酸酶標記試劑盒-SH(Dojindo Laboratories)；過氧化物酶標記試劑盒諸如過氧化物酶標記試劑盒-NH2、過氧化物酶標記試劑盒-NH2(Dojindo Laboratories)；藻膽蛋白標記試劑盒諸如藻膽蛋白標記試劑盒
-NH2、藻膽蛋白標記試劑盒-SH、B-藻紅蛋白標記試劑盒-NH2，B-藻紅蛋白標記試劑盒-SH、R-藻紅蛋白標記試劑盒-NH2、R-藻紅蛋白標記試劑盒SH(DojindoLaboratories)；熒光標記試劑盒諸如熒光素標記試劑盒-NH2、HiLyte Fluor(TM)555標記試劑盒-NH2、HiLyte Fluor(TM)647標記試劑盒-NH2(Dojindo Laboratories)；及DyLight 547和DyLight647(Techno Chemical Corp.)、Zenon(TM)、Alexa Fluor(TM)抗體標記試劑盒、Qdot(TM)抗體標記試劑盒(Invitrogen Corporation)和EZ-標記物蛋白質(zhì)標記試劑盒(Funakoshi Corporation)。為了正確標記，可以使用適宜的儀器來檢測經(jīng)過標記的抗體或其片段。在本專利技術(shù)中，“預后”是指冠心病患者在通過手術(shù)處理等抑制或緩解冠心病后的過程或結(jié)果。在本說明書中，預后可以是通過手術(shù)處理抑制或緩解冠心病后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20年或更久時的生機狀態(tài)。預后可以通過檢查生物標志物即SFI1蛋白或編碼SFI1蛋白本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
檢測SFI1基因或SFI1蛋白的產(chǎn)品在制備診斷冠心病或預測冠心病預后的工具中的應(yīng)用。
【技術(shù)特征摘要】
1.檢測SFI1基因或SFI1蛋白的產(chǎn)品在制備診斷冠心病或預測冠心病預后的工具中的應(yīng)用。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測SFI1基因或SFI1蛋白的產(chǎn)品包括檢測SFI1基因或SFI1蛋白的表達水平的產(chǎn)品。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，利用所述產(chǎn)品檢測受試者樣本中的SFI1基因或SFI1蛋白的表達水平，與正常人相比，受試者樣本中的SFI1基因或SFI1蛋白的表達水平降低，則診斷該受試者為冠心病患者或該受試者的預后差。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述受試者樣本的來源是血液。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項所述的應(yīng)用，其特征在于，所述產(chǎn)品包括能夠結(jié)合SFI1基因的核酸或者能夠結(jié)合SFI1蛋白的物質(zhì)；所述核酸能夠檢測SFI1基因的表達水平；所述物質(zhì)能夠檢測SFI1蛋白的表達水...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：肖武，任靜，楊承剛，
申請(專利權(quán))人：北京泱深生物信息技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：北京;11
還沒有人留言評論。發(fā)表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。