一種包載花生短肽的納米脂質體及其制備方法與應用技術

本發明專利技術公開了一種包載花生短肽的納米脂質體及其制備方法與應用，該納米脂質體原料包括卵磷脂、花生短肽、膽固醇和脫氧膽酸鈉；通過采用薄膜分散與Ostwald熟化相結合的方法制得。本發明專利技術納米脂質體包封率達到82.21％，粒徑為89.70nm，具有良好的酸堿環境穩定性、體外緩釋性和消化穩定性。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于食品加工領域，具體的，涉及一種包載花生短肽的納米脂質體及其制備方法與應用。
技術介紹
花生短肽的開發近年來受到了廣泛的重視，已經報道的花生短肽和酶解產物目前有十幾種，生理功能主要集中于ACE抑制、抗氧化活性等。與大量的花生短肽及酶解產物種類不斷得到報道相對照，花生短肽的實際應用卻基本是空白，主要的原因是作為食品應用的短肽必須通過口服方式進入體內，嚴苛的胃腸道環境使短肽被胃蛋白酶、胰蛋白酶以及肽酶等降解而喪失生理活性，因此至今未見有花生短肽能夠通過小腸上皮細胞成功進入到人體血液或淋巴循環中的相關報道。構建脂質體運載體系，保護短肽躲避胃腸道環境是解決上述問題的一個有效方案。親水性、疏水性短肽分別能夠以包載、嵌入等多種形式結合到脂質體運載體系中，而完成體內輸送。但花生短肽同時又具有強親水性特征，在脂質體制備時親水性短肽更傾向于分布在外水相中，包封率過低成為親水類藥物脂質體應用的主要障礙。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種包載花生短肽的納米脂質體及其制備方法與應用。本專利技術以花生短肽為原料，采用薄膜分散法，通過優化脂質體組成，提高脂質體對短肽的包封率；同時通過優化HPM工藝，制備納米脂質體，以賦予脂質體更好的體內性質；有效利用Ostwald熟化，增加脂質體包封率和應用穩定性。為達到以上目的，本專利技術提供一種包載花生短肽的納米脂質體，
其原料包括卵磷脂、花生短肽、膽固醇和脫氧膽酸鈉。優選地，所述包載花生短肽的納米脂質體，其原料中卵磷脂與花生短肽的質量比為10-12∶1，進一步優選為11.47∶1；卵磷脂與膽固醇的質量比為9-10.5∶1，進一步優選為9.52∶1；卵磷脂與脫氧膽酸鈉的質量比為4-5∶1，進一步優選為4.40∶1；本專利技術還提供上述包載花生短肽的納米脂質體的制備方法，包括以下步驟：1)將卵磷脂、花生短肽、膽固醇和脫氧膽酸鈉加入乙醇，水浴超聲直至完全溶解；2)將步驟1)所得溶液在水浴條件下減壓蒸發除去乙醇，直至減壓蒸發儀容器(例如茄形瓶)壁上形成一層均勻的脂質薄膜；然后加入PBS(pH7.4)緩沖液，旋轉水合，得到脂質體粗懸液；3)將所述脂質體粗懸液進行高壓微射流均質，均質壓力為60-130Mpa，循環處理1-4次，得到納米脂質體；4)將所述納米脂質體攪拌，即得所述包載花生短肽的納米脂質體。優選地，步驟1)所述卵磷脂與花生短肽的質量比為10-12∶1，進一步優選為11.47∶1；卵磷脂與膽固醇的質量比為9-10.5∶1，進一步優選為9.52∶1；卵磷脂與脫氧膽酸鈉的質量比為4-5∶1，進一步優選為4.40∶1；優選地，步驟1)所得溶液(溶劑為乙醇)中卵磷脂的濃度為3.8-4.6mg/mL，進一步優選為4.21mg/mL。優選地，步驟1)所述乙醇為95％乙醇(體積分數)。優選地，步驟2)中PBS(pH7.4)緩沖液的加入量與步驟1)乙醇的加入量相同；優選地，所述PBS(pH7.4)緩沖液的濃度為0.01mol/L；優選地，使步驟2)所得脂質體充分溶解于PBS緩沖液中；優選地，步驟2)所述水浴溫度為40-50℃，進一步優選為45℃；優選地，步驟2)所述加壓蒸發真空度為-0.07～-0.10Mpa，進一步優選為-0.09Mpa；優選地，步驟2)所述旋轉水合時間為30-120min；進一步優選為60min。優選地，步驟3)所述均質壓力為110-130MPa，進一步優選為120Mpa；優選地，步驟3)所述循環處理次數為2-4次。步驟3)可通過高壓微射流均質機進行均質。步驟3)中通過高壓微射流的高速碰撞、高頻振蕩、瞬時壓降、強烈剪切等作用將會破壞脂質體結構，促進脂質體結構重組，使脂質體具有更強的機械和環境適應性。優選地，步驟4)所述攪拌在室溫(一般溫度為15-30℃)條件下進行；優選地，步驟4)所述攪拌速度為20-100rpm，進一步優選為30-70rpm，更優選為50rmp；優選地，步驟4)所述攪拌時間為12-24h；步驟4)所述攪拌可采用磁力攪拌器。步驟4)中低速攪拌目的是促進脂質體充分水合，形成有限聚集，增加對親水性短肽的包封率。具體地，上述制備方法，包括以下步驟：1)將卵磷脂、花生短肽、膽固醇和脫氧膽酸鈉加入乙醇，水浴超聲直至完全溶解；卵磷脂與花生短肽的質量比為11.47∶1；卵磷脂與膽固醇的質量比為9.52∶1；卵磷脂與脫氧膽酸鈉的質量比為4.40∶1；所得溶液中卵磷脂的濃度為4.21mg/mL；2)將步驟1)所得溶液在45℃水浴條件下減壓蒸發除去乙醇，真空度為-0.09Mpa，直至減壓蒸發儀容器壁上形成一層均勻的脂質
薄膜；然后加入與步驟1)所加乙醇等量的0.01mol/L的PBS緩沖液，旋轉水合60min，得到脂質體粗懸液；3)將所述脂質體粗懸液進行高壓微射流均質，均質壓力為120Mpa，循環處理4次，得到納米脂質體；4)將所述納米脂質體攪拌，攪拌速度為50rpm攪拌時間為12-24h，即得。本專利技術還提供了利用上述方法制備的包載花生短肽的納米脂質體。本專利技術還提供了上述包載花生短肽的納米脂質體或按照上述方法制備的包載花生短肽的納米脂質體在制備用于抑制ACE(即血管緊張素轉化酶)活性和/或抗氧化活性的制劑中的應用。優選地，所述制劑包括降壓食品或降壓藥品。本專利技術所述花生短肽可由現有技術常規方法制備得到或市售得到；例如采用李寧等的方法(李寧,紅芝,劉麗,王強.中性蛋白酶分步酶解花生分離蛋白制備花生短肽的研究.中國農業科學,2013,46(24):5237-5247)制備。本專利技術所述Ostwald熟化是指Wilhelm Ostwald在1896年發現的一種描述固溶體中多相結構隨著時間的變化而變化的一種現象。有益效果：1.本專利技術所述包載花生短肽的納米脂質體采用薄膜分散與Ostwald熟化相結合的方法制備而成，采用優化的組成、高壓微射流壓力和循環次數，實現了脂質體對花生短肽的最大程度包封，為后續脂質體體內應用創造了最佳的作用環境；2.本專利技術所述的花生短肽納米脂質體的制備方法，成本低廉，制備工藝簡單，可操作性強；3.本專利技術所述的花生短肽納米脂質體的制備方法，所獲得的脂質體短肽包封率達到82.21％，粒徑為89.70nm，具有體外的體外緩
釋性和抗消化能力。附圖說明圖1為本專利技術所述薄膜分散與Ostwald熟化相結合制備包封短肽納米脂質體的方法示意圖。圖2為本專利技術實施例1中高壓微射流不同壓力對花生短肽脂質體的粒徑和多分散指數的影響。圖3為本專利技術實施例1中高壓微射流不同壓力對花生短肽脂質體的包封率影響。圖4為本專利技術中高壓微射流120MPa處理壓力下不同循環次數對花生短肽脂質體粒徑和包封率的影響。圖5為本專利技術實施例4中所得花生短肽納米脂質體和粗脂質體在不同pH條件下泄漏率變化對比。圖6為本專利技術實施例5中所得花生短肽納米脂質體與粗脂質體、游離肽體外釋放度對比。圖7為本專利技術實施例6中所得花生短肽納米脂質體與粗脂質體、游離肽、水體外模擬消化前后ACE抑制活性變化對比。圖8為本專利技術實施例6中所得花生短肽納米脂質體與粗脂質體體外模擬消化前后微觀結構變化對比。具體實施方式下面結合具體實施方式對本專利技術進行詳細說明。以下實施例用于說明本專利技術，但不用來限制本專利技術的范圍。若未特本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種包載花生短肽的納米脂質體，其原料包括卵磷脂、花生短肽、膽固醇和脫氧膽酸鈉。

【技術特征摘要】
1.一種包載花生短肽的納米脂質體，其原料包括卵磷脂、花生短肽、膽固醇和脫氧膽酸鈉。2.根據權利要求1所述的包載花生短肽的納米脂質體，其特征在于，其原料中卵磷脂與花生短肽的質量比為10-12∶1，卵磷脂與膽固醇的質量比為9-10.5∶1，卵磷脂與脫氧膽酸鈉的質量比為4-5∶1；優選地，其原料中卵磷脂與花生短肽的質量比為11.47∶1；卵磷脂與膽固醇的質量比為9.52∶1；卵磷脂與脫氧膽酸鈉的質量比為4.40∶1。3.權利要求1或2所述包載花生短肽的納米脂質體的制備方法，包括以下步驟：1)將卵磷脂、花生短肽、膽固醇和脫氧膽酸鈉加入乙醇，水浴超聲直至完全溶解；2)將步驟1)所得溶液在水浴條件下減壓蒸發除去乙醇，直至減壓蒸發儀容器壁上形成一層均勻的脂質薄膜；然后加入PBS緩沖液，旋轉水合，得到脂質體粗懸液；3)將所述脂質體粗懸液進行高壓微射流均質，均質壓力為60-130Mpa，循環處理1-4次，得到納米脂質體；4)將所述納米脂質體攪拌，即得。4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟1)所得溶液中卵磷脂的濃度為3.8-4.6mg/mL，優選為4.21mg/mL。5.根據權利要求3或4所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中PBS緩沖液的加入量與步驟1)乙醇的加入量相同；優選地，所述PBS緩沖液的濃度為0.01mol/L，pH值為7.4。6.根據權利要求3或4所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中所述水浴溫度為40-50℃，優選為45℃；所述加壓蒸發真空度為-0.07～-0.10Mpa，優選...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王強，石愛民，龔魁杰，劉紅芝，劉麗，胡暉，楊穎，
申請(專利權)人：中國農業科學院農產品加工研究所，
類型：發明
國別省市：北京;11