從油茶葉中提取根皮甙的方法技術

本發明專利技術提供了一種從油茶葉中提取根皮甙的方法。以乙醇溶液為溶劑，對油茶葉進行浸提，得到粗提液；以D101大孔吸附樹脂為填料分離，再經硅膠層析分離，最后經DAC色譜柱分離、硅膠層析分離、C18色譜柱分離，即可獲得僅含根皮甙的混合物。本發明專利技術首次從山茶屬植物中成功提取出了根皮甙，并且該提取方法具有收率高、產品純度高等優點。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及藥物提取
，尤其是涉及一種從油茶葉中提取根皮甙的方法。
技術介紹
油茶葉為山茶科植物油茶的葉，其富含多種藥效成分，尤其是黃酮類化合物、苷類化合物。黃酮類化合物具有多種生物活性，例如心血管系統活性、抗菌及抗病毒活性、抗腫瘤活性、抗氧化自由基活性、鎮痛活性、保肝活性等。苷類化合物具有祛痰止咳、抗腫瘤、抗真菌、抑菌及降膽固醇等生物活性。如何從油茶葉中提取出根皮甙等生物活性成分，對深度開發油茶作物極其重要。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供從油茶葉中提取根皮甙的方法，所述的提取方法首次從油茶葉中成功提取出了根皮甙，并且該提取方法具有收率高、產品純度高等優點。為解決上述技術問題，本專利技術提供了以下技術方案：從油茶葉中提取根皮甙的方法，包括以下步驟：A：以乙醇溶液為溶劑，對油茶葉進行浸提，得到粗提液；B：以D101大孔吸附樹脂為填料，依次用水、15-25wt％乙醇溶液、75-85wt％乙醇溶液對所述粗提液進行恒定洗脫；C：將所述75-85wt％乙醇溶液洗脫得到的洗脫液進行硅膠層析分離，用10∶1～1∶3的二氯甲烷-甲醇進行梯度洗脫，分段收集洗脫液，經色譜分析，合并含有根皮甙的流份段，命名為第一順序組分；D：采用DAC色譜柱，用55-65％甲醇-水為流動相對所述第一順序組分進行恒定洗脫，分段收集洗脫液，經色譜分析，合并含有根皮甙的流份段，命名為第二順序組分；E：對所述第二順序組分進行硅膠層析，用90-110:10-14:1的二氯甲烷-甲醇-水進行恒定洗脫，分段收集洗脫液，經色譜分析，合并含有根皮甙的流份段，命名為第三順序組分；F：采用C18色譜柱，以15-25％乙腈-水對所述第三順序組分進行恒定洗脫，分段收集洗脫液，經色譜分析，合并含有根皮甙的流份段。上述提取方法由粗至精的方式從油茶葉中逐步分離出根皮甙的純凈物。以干油茶葉為基準，本專利技術對根皮甙的提取率在10.1mg/kg以上，并且前后產品的純度均在90％以上。本專利技術所述的流動相(即洗脫所用的液體)的比例均指體積比，流動相中的“％”指非水物質所占的體積百分數，乙醇溶液均指乙醇的水溶液，例如，15-25％乙醇溶液指乙醇體積百分比為15-25％水溶液。55-65％甲醇-水指甲醇體積百分比為55-65％的水溶液。本專利技術所述的恒定洗脫是指流動相的組成比例固定。本專利技術所述的梯度洗脫是指在洗脫過程中不斷改變流動相的濃度配比，但起始濃度和終點濃度是固定的，例如步驟C中的梯度洗脫是指：二氯甲烷-甲醇按照起始濃度為9-11∶1、洗脫終點濃度為1∶2.5-3.5的方式進行梯度洗脫。本專利技術所述的DAC色譜柱指軸向動態壓縮工業色譜柱。本專利技術所述的提取方法適用于不同種屬的油茶葉，尤其適合普通油茶 (Camellia oleifera Abel)，其提取率高。本專利技術所述的提取方法的各個步驟可以進一步改進，例如：步驟A中，浸提所用的溶劑、料液比、溫度對粗提液中的雜質含量以及有效成分的提取率都有影響。溶劑優選用40-60％的乙醇-水溶液，更優選50％的乙醇-水溶液。料液比優選為1：2.5-3.5(1g固體：2.5-3.5mL溶劑)，更優選1：2.5-3。浸提溫度優選為70-80℃，并且以回流浸提為最佳。采用以上浸提條件能降低粗提液中的雜質含量，提高根皮甙的提取率。另外，為了降低后期分離的難度，在浸提之后可以濃縮干燥粗提液，除去乙醇。步驟B中，每個梯度洗脫所用流動相的體積優選為柱體積的3.5-4.5倍，更優選為4-4.5倍，保證待提取成分能夠被充分洗脫出來。所用流動相的濃度優選水、15-20％乙醇溶液、75-80％乙醇溶液。步驟C中，硅膠層析分離為分離手段，色譜分析為評價分離結果的手段，兩者互相配合，篩選出含有根皮甙目標提取物的洗脫液。篩選通常為粗篩選，一般是經色譜分析，先將色譜圖相似的洗脫液合并，然后與目標提取物的標準品色譜圖對比，從中篩選出含有目標提取物的洗脫液，將其合并。當然，也可以不經過合并，直接與目標提取物的標準品色譜圖對比來選出有用的洗脫液，這種做法工作量較大，但是結果更精確。所述步驟C中，所用的硅膠的粒徑優選為200-300目，所述梯度洗脫優選為：用9-10∶1至1∶2.5-3梯度的二氯甲烷-甲醇進行梯度洗脫，采用以上進一步優化的條件，可以提高分離度和柱效。在所述步驟C中，所述硅膠層析分離之前還包括：將所述75-85％乙醇溶液洗脫得到的洗脫液濃縮干燥，可以避免乙醇對后續硅膠層析的干擾。另外，所述步驟C中的色譜分析可以是薄層色譜(TLC)、高效液相色譜等任意能用于定性的方法，其中后者更準確。另外，在進行硅膠層析時，為了保證待分離物均勻分散在硅膠之中， 優選將二氯甲烷-甲醇稀釋待分離物，同時拌入硅膠，之后再水浴蒸干。經過以上處理后的物質再裝入硅膠柱中進行層析。同樣，所述步驟D中，經色譜分析可以為：高效液相色譜分析，和/或薄層分析等。所述步驟D中，流動相的濃度優選55-60％甲醇-水時，具有更高的分離度。所述步驟E中，所用的硅膠的粒徑優選為200-300目，所述二氯甲烷-甲醇-水的比例優選為90-100:10-12:1，以提高分離度和柱效。所采用的色譜分析可以為高效液相色譜分析、薄層分析等。所述步驟F中，流動相的濃度優選15-20％乙腈-水。在該步驟中即可獲得根皮甙的純凈物，只要在色譜分析后，將僅含有根皮甙的流份段合并即可。此處的“僅含”是指根皮甙的含量只要達到提取物的一般純度即可，在此基礎上，可根據生產需求選擇進一步提純。與現有技術相比，本專利技術能達到以下技術效果：(1)首次從油茶葉中提取了出高純度的根皮甙；(2)由粗到精的提取方式利于提取方法的規模化推廣；(3)提取收率高。 附圖說明為了更清楚地說明本專利技術具體實施方式或現有技術中的技術方案，下面將對具體實施方式或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本專利技術的一些實施方式，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。圖1為本專利技術實施例1提供的80％乙醇洗脫后收集的樣品的液相色譜圖；圖2為實施例1得到的最終流份的1H-NMR譜圖；圖3為實施例1得到的最終流份的13C-NMR譜圖。具體實施方式下面將結合附圖和具體實施方式對本專利技術的技術方案進行清楚、完整地描述，但是本領域技術人員將會理解，下列所描述的實施例是本專利技術一部分實施例，而不是全部的實施例，僅用于說明本專利技術，而不應視為限制本專利技術的范圍。基于本專利技術中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本專利技術保護的范圍。實施例中未注明具體條件者，按照常規條件或制造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未注明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。本專利技術中所述的流動相的比例均指體積比。實施例1第一步：將自然陰干的油茶干燥葉粉碎過60目篩，取20kg分兩批用50％乙醇按料液比1∶3在70-80℃加熱回流，重復提取2次，每次提取2h，合并所得上清液，過濾獲得上清液，減壓濃縮至無醇味，得到原體積約一半的粗提液樣品，備用。第二步：用工業酒精處理約10L的D101型大孔吸附樹脂，用水洗到無醇味，將第一步得到的提取液分兩次上樣，依次用水、20％乙醇、80％乙醇洗脫本文檔來自技高網...

【技術保護點】
從油茶葉中提取根皮甙的方法，其特征在于，包括以下步驟：A：以乙醇溶液為溶劑，對油茶葉進行浸提，得到粗提液；B：以D101大孔吸附樹脂為填料，依次用水、15?25wt％乙醇溶液、75?85wt％乙醇溶液對所述粗提液進行恒定洗脫；C：將所述75?85wt％乙醇溶液洗脫得到的洗脫液進行硅膠層析分離，用10∶1～1∶3的二氯甲烷?甲醇進行梯度洗脫，分段收集洗脫液，經色譜分析，合并含有根皮甙的流份段，命名為第一順序組分；D：采用DAC色譜柱，用55?65％甲醇?水為流動相對所述第一順序組分進行恒定洗脫，分段收集洗脫液，經色譜分析，合并含有根皮甙的流份段，命名為第二順序組分；E：對所述第二順序組分進行硅膠層析，用90?110:10?14:1的二氯甲烷?甲醇?水進行恒定洗脫，分段收集洗脫液，經色譜分析，合并含有根皮甙的流份段，命名為第三順序組分；F：采用C18色譜柱，以15?25％乙腈?水對所述第三順序組分進行恒定洗脫，分段收集洗脫液，經色譜分析，合并含有根皮甙的流份段。

【技術特征摘要】
1.從油茶葉中提取根皮甙的方法，其特征在于，包括以下步驟：A：以乙醇溶液為溶劑，對油茶葉進行浸提，得到粗提液；B：以D101大孔吸附樹脂為填料，依次用水、15-25wt％乙醇溶液、75-85wt％乙醇溶液對所述粗提液進行恒定洗脫；C：將所述75-85wt％乙醇溶液洗脫得到的洗脫液進行硅膠層析分離，用10∶1～1∶3的二氯甲烷-甲醇進行梯度洗脫，分段收集洗脫液，經色譜分析，合并含有根皮甙的流份段，命名為第一順序組分；D：采用DAC色譜柱，用55-65％甲醇-水為流動相對所述第一順序組分進行恒定洗脫，分段收集洗脫液，經色譜分析，合并含有根皮甙的流份段，命名為第二順序組分；E：對所述第二順序組分進行硅膠層析，用90-110:10-14:1的二氯甲烷-甲醇-水進行恒定洗脫，分段收集洗脫液，經色譜分析，合并含有根皮甙的流份段，命名為第三順序組分；F：采用C18色譜柱，以15-25％乙腈-水對所述第三順序組分進行恒定洗脫，分段收集洗脫液，經色譜分析，合并含有根皮甙的流份段。2.根據權利要求1所述的從油茶葉中提取根皮甙的方法，其特征在于，所述步驟A中，浸提的方法為：料液比為1：3，在70-80℃下回流提取，乙醇溶液優選為40-60％的乙醇-水溶液。3.根據權利要求1所述的從油茶葉中提取根皮甙...

【專利技術屬性】
技術研發人員：曹清明，王元清，鄭雙，蘭芳，鐘海雁，
申請(專利權)人：中南林業科技大學，
類型：發明
國別省市：湖南;43