干燥轉谷氨酰胺酶組合物制造技術

本發明專利技術涉及干燥轉谷氨酰胺酶組合物，所述組合物可通過將包含轉谷氨酰胺酶、鹽和至少一種另外的選自糖、氨基酸和緩沖液的組分的含水組合物凍干或噴霧干燥而獲得，其中含水組合物中鹽的濃度范圍為5?100?mM。在進一步的方面，本發明專利技術涉及制備所述干燥轉谷氨酰胺酶組合物的方法、復溶溶液、藥物組合物以及治療方法。

【技術實現步驟摘要】
本申請是申請日為2009年4月20日、申請號為200980124151.5、專利技術名稱為“干燥轉谷氨酰胺酶組合物”的專利技術專利申請的分案申請。專利
本專利技術涉及轉谷氨酰胺酶組合物，具體地講是凝血因子XIII的穩定的凍干或噴霧干燥組合物，而且還涉及制備所述組合物的方法、復溶溶液、藥物組合物以及治療方法。專利技術背景轉谷氨酰胺酶是Ca2+依賴性酶，該酶催化蛋白質中的谷氨酰胺側鏈γ-甲酰胺基與賴氨酸側鏈ε-氨基之間形成異肽鍵。轉谷氨酰胺酶存在于細胞外和細胞內。轉谷氨酰胺酶的實例包括因子XIII、表皮轉谷氨酰胺酶、II型轉谷氨酰胺酶(組織型轉谷氨酰胺酶、肝轉谷氨酰胺酶)和I型轉谷氨酰胺酶(角質形成細胞轉谷氨酰胺酶)。凝血因子XIII(FXIII)是血漿轉谷氨酰胺酶，亦稱為“血纖維連接酶”和“血纖蛋白穩定因子”，其在血漿中的循環濃度為20微克/ml。該蛋白質在血漿中以由兩個A亞基和兩個B亞基組成的四聚體(A2B2)存在。每個亞基的分子量約為80000Da，整個蛋白質的分子量約為330000Da。A亞基含有轉谷氨酰胺酶催化部位，而B亞基沒有催化活性，但是卻起著結構蛋白的作用，保護A亞基不被清除。因子XIII的活化取決于凝血酶和Ca2+。凝血酶在A亞基Arg37的C端側切割，從而釋放出活化肽(A亞基的殘基1-37)和B亞基，留下活性形式的A2二聚體。活化的FXIII A2亞基(FXIIIa)是FXIII的催化活性形式。FXIII酶是凝血級聯中被激活的最后一個酶，其作用是使α-血纖
蛋白鏈與γ-血纖蛋白鏈交聯，形成對血纖蛋白溶解的抗性提高的更牢固的凝塊。此外，多種抗纖維蛋白溶解、促止血和黏附蛋白交聯成凝塊，因此提供牢固的血纖蛋白結構，該結構對纖維蛋白溶酶和其它蛋白水解酶溶解的機械阻力增強。在許多情況下，市售可得的純或部分純的轉谷氨酰胺酶或因子XIII制品含有添加的穩定劑，例如人血清白蛋白(HSA)。蛋白質穩定劑的使用尚有疑問，因為當給予患者時，其降低蛋白質比活，增加蛋白質負荷，并且可能干擾純度評價。還可能使蛋白質制品產生免疫原性。蛋白質穩定劑的這些缺點使得它們特別不利于穩定非常純的蛋白質(例如重組蛋白)。另外，當加入例如白蛋白時，蛋白質穩定劑的使用可能會造成被病毒抗原污染。自胎盤或血漿分離FXIII或者新鮮冰凍血漿形式的FXIII多年來一直被用來治療因子XIII缺陷癥。然而，這些制劑受含有外源蛋白質的缺點以及與之相連的所有問題(例如不利的免疫原性)所困。目前可采用重組DNA技術來制備轉谷氨酰胺酶和因子XIII。本文所使用的rFXIII是指重組因子XIII。然而迄今為止，市場上尚無市售的rFXIII產品。用于治療的蛋白質制品中的組合物和活性必須在相對較長的時間內處于穩定。在溶液中幾乎不能達到這種穩定性，因此，這類產品通常以干燥狀態銷售。適度的冷凍干燥(凍干)是將這類產品干燥的精選方法之一。然而，即使當采用這種方法時，也難以得到滿足完整性和持久性需要的穩定制品。例如，轉谷氨酰胺酶或因子XIII溶液的冷凍干燥可能導致活性明顯下降以及純度損失。例如，冷凍干燥的因子XIII的另一個問題是由因子XIII的降解產物造成的，因子XIII的降解產物即所謂的非蛋白酶水解活化型(FXIIIa°)，亦稱為前激活因子XIII。一般認為FXIIIa°會出現嚴重的毒性風險，注射FXIIIa°可能引起潛在的不良副作用。因此，需要使轉谷氨酰胺酶或因子XIII制劑穩定以免形成非蛋白酶水解活
化產物。本領域已知各種干燥FXIII組合物。下面公開的是凍干FXIII組合物的公開內容的實例。WO2002/36155披露了可以用1mM EDTA、10mM甘氨酸、2％蔗糖的水溶液，或者用20mM組氨酸、3％(重量/體積)蔗糖、2mM甘氨酸和0.01％(重量/體積)聚山梨醇酯(pH 8.0)來制備凍干FXIII組合物。US 6204036(Aventis Behring)涉及穩定的凍干轉谷氨酰胺酶制劑，所述制劑包含至少一種選自D-氨基酸和L-氨基酸及其鹽、衍生物、類似物和二聚體、糖和糖醇、表面活性成分和還原劑的添加劑，前提條件是添加劑不是甘氨酸，也不是精氨酸，其中所述制劑不含蛋白質穩定劑，且其中所述制劑在適用于胃腸外給藥的含水溶劑中是溶解的，并無任何濁度。然而，上述這些制劑可能受上述高水平非蛋白酶水解活化的因子XIII的缺點所困，一般認為這有礙于這些制劑的臨床和商業可行性。因此顯而易見的是，非常需要具有低水平非蛋白酶水解活化產物的穩定的干燥轉谷氨酰胺酶和因子XIII制劑。而且，這類制劑不需要添加蛋白質穩定劑，例如HSA。專利技術概述本專利技術基于出乎意料的發現，即就純度和前激活轉谷氨酰胺酶的形成而言，鹽(例如一價鹽)對干燥轉谷氨酰胺酶(例如因子XIII)組合物具有明顯的穩定效應或作用。這種效應是干燥狀態特有的，并且對于生產穩定的商品特別重要。在一個方面，本專利技術提供干燥轉谷氨酰胺酶組合物，所述組合物可通過將含水組合物凍干或噴霧干燥而獲得，所述含水組合物包含轉谷氨酰胺酶、鹽和至少一種另外的選自糖、氨基酸和緩沖液的組分，其中含水組合物中鹽的濃度范圍為5-100mM。在又一個方面，本專利技術提供制備所述干燥轉谷氨酰胺酶組合物、復溶溶液、藥物組合物的方法以及治療方法。本專利技術的其它目的、特征和優勢從下面的專利技術詳述來看是顯而易見的。然而，應當了解的是，專利技術詳述和具體實施例雖然提供本專利技術的優選實施方案，但只是通過實例給出，因為從專利技術詳述來看，本專利技術的精神和范圍內的各種變動和修改對于本領域技術人員是顯而易見的。附圖描述圖1：蔗糖和NaCl水平的評價。25mMNaCl對保存于40℃的樣品的AIE-HPLC純度的作用的Modde分析。圖2：NaCl和組氨酸水平的全析因研究。25℃rFXIIIa°數據的Modde分析。圖3：NaCl和組氨酸水平的全析因研究。AIE-HPLC純度數據的Modde分析。定義本專利技術的術語“前激活”或“非蛋白酶水解活化”轉谷氨酰胺酶是指不是蛋白酶水解激活的轉谷氨酰胺酶，例如當因子XIII在凝血酶(凝血酶具有蛋白水解切割FXIII的能力)不存在時被激活，便被稱為非蛋白酶水解活化；有關參考文獻可參見例如Polgar J.等，Biochem J 1990；267：557-60。Muszbek L.等，Thrombosis Research 94(1999)271-305。作為FXIII的降解產物的非蛋白酶水解活化因子XIII(FXIII°)不利于FXIII藥物組合物的效力(viability)，因為一般認為這種降解產物會出現嚴重的毒性風險。本文使用的術語“生物活性”是指在生物中具有活性，例如醫學活性、農業活性或美容活性。本專利技術的術語“含水組合物”是指包含液體水分的組合物。這類組合物通常是溶液或懸浮液。用于本
技術實現思路
的術語“含水組合物”是指包含以重量計至少50％(重量/重量)的水的制劑。本專利技術的術語“稀釋劑”是指液體溶液或懸浮液。用于本
技術實現思路
的術語“稀釋劑”是指包含以重量計至少50％(重量/重量)水的溶液或懸浮液。在本專利技術的情況下，稀釋劑用于干燥轉谷氨酰胺酶組合物的復溶。所有參考文獻，包括本文引用的出版物、專利申請和專利都通過引用其整體特此結本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種干燥轉谷氨酰胺酶組合物，所述組合物可通過將含水組合物凍干或噴霧干燥獲得，所述含水組合物包含轉谷氨酰胺酶、鹽和至少一種選自糖、氨基酸和緩沖液的另外的組分，其中含水組合物中的鹽濃度為5?100?mM。

【技術特征摘要】
2008.04.21 EP 08103642.81. 一種干燥轉谷氨酰胺酶組合物，所述組合物可通過將含水組合物凍干或噴霧干燥獲得，所述含水組合物包含轉谷氨酰胺酶、鹽和至少一種選自糖、氨基酸和緩沖液的另外的組分，其中含水組合物中的鹽濃度為5-100 mM。2. 權利要求1的組合物，其中因子XIII化合物是人因子XIII。3. 權利要求1或2的組合物，其中所述鹽是一價鹽。4. 權利要求3的組合物，其中所述一價鹽是氯化鈉鹽。5. 權利要求1-4中任一項的組合物，其中含水組合物中所述鹽的濃度為10-75 mM。6. 權利要求1-5中任一項的組合物，其中所述組合物為粉末形式。7. 一種制備權利要求1-6中任一項的干燥組合物的方法，所述方法包括將包含轉谷氨酰胺酶、鹽和至少一種選自糖、氨基酸和緩沖液的另外的組分的含水組合物干燥，其中含水組合物中的鹽濃度為5-100 mM。...

【專利技術屬性】
技術研發人員：M布拉德，T法爾克，GK克里斯琴森，
申請(專利權)人：諾沃—諾迪斯克保健股份有限公司，
類型：發明
國別省市：瑞士;CH