槐角苷抗布氏田鼠生育的新方法技術(shù)

以槐角苷為活性成分的抗雌性布氏田鼠生育滅鼠劑，屬于生物防治技術(shù)領(lǐng)域。布氏田鼠主要棲息于植被退化的草場(chǎng)上，種群繁殖力強(qiáng)，各年度與季節(jié)間的數(shù)量變動(dòng)幅度很大,繁殖速度快，對(duì)草原植被的破壞力很強(qiáng)，是畜牧業(yè)的大敵，是內(nèi)蒙古草原主要鼠害之一，鼠害問題不僅嚴(yán)重破壞了生態(tài)環(huán)境，而且威脅著人類的健康。長(zhǎng)久以來，人們采用多種方法對(duì)其種群數(shù)量加以控制，其中運(yùn)用抗生育技術(shù)對(duì)害鼠種群數(shù)量進(jìn)行控制是近些年發(fā)展起來的一項(xiàng)新技術(shù)。本發(fā)明專利技術(shù)涉及一種以槐角苷為活性成分的雌性不育滅鼠劑用于控制布氏田鼠繁殖。相較于傳統(tǒng)的生態(tài)滅鼠法及化學(xué)毒餌法，抗生育技術(shù)具有作用時(shí)間長(zhǎng)、控制效果明顯、環(huán)境毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)，能更有效地抑制害鼠種群的超補(bǔ)償性效應(yīng)。本發(fā)明專利技術(shù)若能應(yīng)用于農(nóng)林牧業(yè)生產(chǎn)，將能有效控制害鼠種群數(shù)量，具有廣闊的經(jīng)濟(jì)效益。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及用于控制害鼠布氏田鼠的抗生育滅鼠劑，具體的說是涉及一種以槐角苷為活性成分的雌性不育劑用于控制害鼠布氏田鼠繁殖，主要涉及槐角苷影響布氏田鼠胚胎著床數(shù)目來控制其繁殖的新方法。
技術(shù)介紹
因草原鼠害損失的牧草量占15%-20%，重災(zāi)年份則會(huì)高達(dá)44%。草原鼠害的發(fā)生-草場(chǎng)土壤肥力下降，水份大量流失，草地的生產(chǎn)力降低，造成雜草滋生及草地沙漠化，環(huán)境急劇惡化，呈現(xiàn)逐年擴(kuò)增的趨勢(shì)。布氏田鼠分布于中國(guó)內(nèi)蒙古中東部地區(qū)，遼寧等地，主要棲息于植被退化的草場(chǎng)上，種群繁殖力強(qiáng)，各年度與季節(jié)間的數(shù)量變動(dòng)幅度很大,繁殖速度快，對(duì)草原植被的破壞力很強(qiáng)，是畜牧業(yè)的大敵，是內(nèi)蒙古草原主要鼠害之一。目前，草原鼠害防治仍主要使用化學(xué)滅鼠劑來防治害鼠。而化學(xué)滅鼠劑具有成二次中毒，產(chǎn)生抗藥、耐藥以及環(huán)境污染等一系列嚴(yán)重問題，使得傳統(tǒng)的鼠害防治方法已經(jīng)不能滿足現(xiàn)代農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)發(fā)展的要求。生物源性抗生育劑因?yàn)槠渚邆涮禺愋愿撸Y源豐富、無環(huán)境污染，對(duì)生態(tài)環(huán)境影響小且能有效控制害鼠等優(yōu)點(diǎn)在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)、畜牧業(yè)的害鼠生物防治上展現(xiàn)出了廣闊的應(yīng)用前景。 槐角苷主要來源于豆科植物槐樹的果實(shí)（槐角），槐角中異黃酮及其苷類成分非常豐富 ，槐角苷作為槐角中最主要的異黃酮成分之一被廣大科學(xué)工作者進(jìn)行了大量的研究，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)闡明了槐角苷呈現(xiàn)出雌激素樣活性，具有顯著的抗生育作用。由于前期實(shí)驗(yàn)室探究了槐角苷對(duì)ICR小白鼠的抗生育效果，結(jié)果顯示該藥物可明顯降低受孕ICR小鼠的子宮胚胎著床數(shù)量，即大大降低小白鼠的受孕率，具有相當(dāng)明顯的抗生育效果。有了前期的進(jìn)展，就為我們下一步的開展提供了實(shí)驗(yàn)支持，我們欲探究植物源性異黃酮成分槐角苷對(duì)草原一大害鼠布氏田鼠的抗生育效果，力求為草原害鼠生育率的控制提供一種生態(tài)、高效的新方法，希望為我國(guó)草原鼠害的防治提供一種了新的方法，這對(duì)我國(guó)農(nóng)林牧業(yè)鼠害的防治具有一定的生態(tài)意義與經(jīng)濟(jì)意義。本發(fā)現(xiàn)以槐角中其中一種異黃酮成分槐角苷為藥物材料，對(duì)草原害鼠布氏田鼠的進(jìn)行急性毒性實(shí)驗(yàn)，再依據(jù)急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，對(duì)布氏田鼠的抗生育效果進(jìn)行探究，發(fā)現(xiàn)該藥物確實(shí)能夠通過降低布氏田鼠的胚胎著床數(shù)目而具有明顯的抗生育作用，降低布氏田鼠的生育率，進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)為槐角苷對(duì)布氏田鼠的抗生育作用效果提供了充分的證據(jù)，該發(fā)現(xiàn)為將槐角苷開發(fā)成植物源性不育劑提供足夠的理論支持，也為草原鼠害的防治提供了一種新方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本發(fā)現(xiàn)主要是發(fā)現(xiàn)了一種新藥物對(duì)布氏田鼠具有顯著的抗生育效果，旨在對(duì)草原害鼠布氏田鼠的繁殖率、數(shù)量進(jìn)行控制，為其防治提供一種新方法。本發(fā)現(xiàn)通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)。本發(fā)現(xiàn)是用槐角中的異黃酮成分槐角苷對(duì)懷孕布氏田鼠進(jìn)行喂藥處理，結(jié)果發(fā)現(xiàn)槐角苷能夠明顯降低布氏田鼠的胚胎著床數(shù)目，從而降低害鼠布氏田鼠的繁殖率，降低其數(shù)量。然后利用組織學(xué)的研究方法對(duì)槐角苷對(duì)布氏田鼠的抗生育效果進(jìn)行進(jìn)一步探討，對(duì)其抗生育的具體機(jī)制進(jìn)行初步探索。槐角苷是一種中藥成分，不會(huì)造成環(huán)境破壞等一系列問題，為鼠害的防控提供了一種新方法。1藥物材料及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)用槐角苷，純度98%，HPLC，批號(hào): QY-HJG201210040，購(gòu)自西安清樂生物科技有限公司。實(shí)驗(yàn)用布氏田鼠捕捉自內(nèi)蒙古自治區(qū)錫林郭勒盟錫林浩特市東烏珠穆沁旗，皆為幼鼠，以鼠籠盒雌雄分開喂養(yǎng)于內(nèi)蒙古自治區(qū)錫林郭勒盟錫林浩特市毛登牧場(chǎng)中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所草原動(dòng)物生態(tài)研究站實(shí)驗(yàn)室內(nèi)至性成熟，自然光照，室溫，通風(fēng)良好，供以充足的鼠糧及水，選擇健康，達(dá)到性成熟的雄鼠及無懷孕跡象的雌鼠備用。2 急性毒性實(shí)驗(yàn)方法預(yù)實(shí)驗(yàn)：參照文獻(xiàn)，槐角苷對(duì)小鼠的最大致死濃度為1000mg/kg左右，依據(jù)此具體實(shí)驗(yàn)方法如下，將實(shí)驗(yàn)用布氏田鼠分為4組，每組4只，雌雄各半，1個(gè)空白組和3個(gè)染毒劑量組，于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)自然光照，室溫，通風(fēng)良好，供以充足的鼠糧及水的條件下喂養(yǎng)一周，觀察各組實(shí)驗(yàn)用布氏田鼠有無異常，如無異常，將實(shí)驗(yàn)用槐角苷用0.5%羧甲基纖維素鈉配置成不同濃度槐角苷懸液，接著按照空白對(duì)照組（0 mg/kg同體積的0.5%羧甲基纖維素鈉）、800mg/kg、4000mg/kg、20000mg/kg/day的給藥方式進(jìn)行給藥，將實(shí)驗(yàn)用槐角苷用0.5%羧甲基纖維素鈉配置成不同濃度槐角苷懸液，于某天早上9點(diǎn)對(duì)實(shí)驗(yàn)用布氏田鼠進(jìn)行灌胃，空白對(duì)照組灌以同體積的0.5%羧甲基纖維素鈉懸液，自灌胃時(shí)刻其的7天內(nèi)，觀察實(shí)驗(yàn)用布氏田鼠的死亡情況，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。依據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)所得到的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，將備用布氏田鼠分為分為6組，每組6只，雌雄各半，分別為1個(gè)空白對(duì)照組和5個(gè)染毒劑量組，將實(shí)驗(yàn)用槐角苷用0.5%羧甲基纖維素鈉配置成不同濃度槐角苷懸液，分別為0mg/kg、4000mg/kg、6000mg/kg、9000mg/kg、13500mg/kg、20000mg/kg，空白對(duì)照組以同體積的0.5%羧甲基纖維素鈉代替，將各組老鼠于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)自然光照，室溫，通風(fēng)良好，供以充足的鼠糧及水的條件下喂養(yǎng)一周，觀察各組實(shí)驗(yàn)用布氏田鼠有無異常，如無異常，于一周后的第一天早上9點(diǎn)對(duì)各組布氏田鼠按照預(yù)先設(shè)定的槐角苷濃度進(jìn)行灌胃，自灌胃時(shí)刻起的7天內(nèi)，觀察實(shí)驗(yàn)用布氏田鼠的死亡情況，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，用改良寇氏法公式對(duì)槐角苷對(duì)布氏田鼠的LD50進(jìn)行計(jì)算，最終得到其LD50大約為10715mg/kg。3 抗生育效果實(shí)驗(yàn)方法依據(jù)槐角苷對(duì)布氏田鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn)所得到的數(shù)據(jù)，按照等比數(shù)列的方法設(shè)置各個(gè)槐角苷給藥濃度，將實(shí)驗(yàn)備用的布氏田鼠雌雄分開進(jìn)行一周喂養(yǎng)，觀察布氏田鼠采食和飲水有無異常，然后按照雌雄2:1的比例進(jìn)行合籠，次日早上進(jìn)行妊娠檢查（陰栓檢查法）根據(jù)檢查結(jié)果確認(rèn)已受孕為妊娠第一天（D1），將受孕田鼠分為5組，每組10只，分別為三個(gè)槐角苷染毒實(shí)驗(yàn)組（用0.5%羧甲基纖維素鈉將槐角苷配置成預(yù)先設(shè)計(jì)的三個(gè)濃度劑量），分別為，一個(gè)陽性對(duì)照組（用0.5%羧甲基纖維素鈉將炔雌醚配置成預(yù)先設(shè)計(jì)濃度劑量）、一個(gè)空白對(duì)照組（以同樣的方法給予相同體積的0.5%羧甲基纖維素鈉），灌胃劑量為0.2ml/10g，自D1起分別對(duì)各劑量組于每天早上9:00進(jìn)行經(jīng)口灌胃給藥，連續(xù)給藥7天（D7），第10天（D10）解剖檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)各組胚胎數(shù)量、稱量子宮及各臟器的重量，計(jì)算出各組胚胎平均數(shù)量并用spss軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，統(tǒng)計(jì)實(shí)驗(yàn)組與各對(duì)照組的胚胎著床是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與空白未經(jīng)藥物處理的布氏田鼠組相比，經(jīng)槐角苷灌胃處理的布氏田鼠子宮胚胎數(shù)目隨著槐角苷濃度的增大而顯著降低，且差異性顯著，結(jié)果表明，槐角苷對(duì)布氏田鼠具有顯著的抗生育作用效果，即可以達(dá)到降低其繁殖率，降低種群數(shù)量。4 組織保存將實(shí)驗(yàn)解剖所得到的布氏田鼠子宮組織部分保存于動(dòng)物組織RNA保護(hù)液，部分保存于組織固定液（4%多聚甲醛）中帶回實(shí)驗(yàn)室，再將其轉(zhuǎn)移到冰箱中保存?zhèn)溆茫M(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)探究。5 HE染色實(shí)驗(yàn)分析用HE染色實(shí)驗(yàn)對(duì)布氏田鼠的子宮組織進(jìn)行病理組織學(xué)組織形態(tài)觀察。HE結(jié)果表明與空白組的布氏田鼠子宮相比，經(jīng)過槐角苷藥物處理的布氏田鼠的子宮結(jié)構(gòu)中子宮內(nèi)膜腔上皮的厚度明顯，腺體增多，間質(zhì)細(xì)胞明顯減少，子宮腔上皮有損傷，有明顯的組織病理學(xué)增生，說明槐角苷藥物的處理對(duì)布氏田鼠的子宮組織造成了傷害。6 掃描電子顯微鏡（SEM）用SEM掃本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種抗生育滅鼠劑，其特征在于，所述抗生育滅鼠劑是以槐角苷作為活性組分的抗生育劑。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種抗生育滅鼠劑，其特征在于，所述抗生育滅鼠劑是以槐角苷作為活性組分的抗生育劑。2.權(quán)利要求1所述的抗生育滅鼠劑，其特征在于，所述鼠類為害鼠布氏田鼠。3.權(quán)利要求1或2中所述的抗生育滅鼠劑，其特征在于，所述槐角苷主要來源于豆科植物槐樹的果實(shí)槐角，尼泊爾黃花木莖，漆樹科植物寬葉尚乳香葉等。4.一種滅...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張杰，張興利，謝晨文，丁仁芳，劉筱雪，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：四川大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：四川;51