本發明專利技術屬于植物組培技術領域，具體涉及一種化橘紅的組培快繁方法，包括外植體的建立、啟動培養、繼代培養、生根培養、煉苗和移栽等步驟，本發明專利技術針對化橘紅這一品種進行研究，于不同階段采用了最適合的培養基組成，繁殖系數高，生根率高，該方法操作簡便，成本低，能有效、方便的在短時間內獲得大量化橘紅組培苗，而且所獲得的組培苗成活率高，苗木能夠保持優樹的優良遺傳性狀，采用本發明專利技術的化橘紅的組培快繁方法可以獲得大量整齊一致，遺傳性狀穩定的再生植株，試驗結果穩定，重復性良好，可應用于大規模商品化育苗。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于植物組培
，具體涉及一種化橘紅的組培快繁方法。
技術介紹
“化橘紅”是廣東省化州市的地理標志產品。2006年12月，國家質檢總局批準對化橘紅實施地理標志產品保護。化橘紅，【別名】化皮、化州橘紅、柚皮橘紅、柚類橘紅、興化紅、毛柑、毛化紅、賴橘紅，為蕓香科植物化州柚Citus grandis Tomentosa或 Citrus grandis （L.）Osbecd的未成熟或近成熟的干燥外層果皮。【性狀】藥材呈對折的七角或展開的五角星狀，單片呈柳葉形。完整者展開后直徑15～28cm，厚0.2～0.5cm。外表面黃綠色至黃棕色，有皺紋及小油室；內表面黃白色或淡黃棕色，有脈絡紋。質脆，易折斷。氣芳香，味苦、微辛?！竟δ苤髦巍可⒑?，燥濕，利氣，消痰。用于風寒咳嗽，喉癢痰多，食積傷酒，嘔惡痞悶。化橘紅的藥用價值：1、【化痰止咳、風寒咳嗽】橘紅首要功效，無論寒咳或干咳，服用橘紅均可見效，咳嗽分為熱咳和寒咳兩種：熱咳，是由肺熱造成的反復咳嗽，例如過量食用上火食品，如煎炸、燒烤類等食品，表現為喉嚨干癢、干咳少痰或痰色黃質黏稠；寒咳，多由受寒引起，表現為咽癢咳頻，痰液稀薄如泡沫狀。2、【久咳、氣管炎、哮喘】中老年人長年久咳或哮喘服用橘紅為首選。對久咳、哮喘者必須堅持服用并逐漸適應方可起效。一般建議使用2-3個月以上。3、【食積傷酒、化普理氣】抽煙喝酒人士之佳品，煙酒對肺胃肝及喉嚨損傷最大，同時居住在城市汽車及工業廢氣居多，長久吸入過量后容易導致習慣性呼吸道感染發炎。常服用化橘紅便能減輕酒精及廢氣對這些人體器官的損害。4、【嘔吐呃逆、飲食積滯】經常飯局應酬等人士應常服用化橘紅，化橘紅對腸胃的消滯有良好功效，飯后服用可令緩解胃中消化壓力。在實際栽培中，化橘紅大多采用嫁接和圈枝的方法進行繁育，但是采取嫁接苗的方式會受到受砧木資源的限制，采用嫁接的方法繁育繁殖率很低，生長速度慢，弱病苗比例高，費工費時，成苗率較低，且易侵染各種植物病毒，難以大規模的發展苗木，也不能進行周年生產，遠遠不能滿足市場的大量需求。因而影響了其大面積的推廣。圈枝方法雖然生長快，結果快，但是因為其沒有主根，導致病蟲害多，擴臺風能力差，樹的壽命短，非常不給力。在此形勢下，采用化橘紅組織培養技術則成了快速培育良種苗木的有效途徑。組織培養（Tissue Culture）是在無菌條件下，分離并在培養基中培養離體植物組織的技術，用組織培養方法快速繁殖，具有整株的遺傳一致性，生長健壯，根系發達、移栽成活率高，果品品質好，產量高等優點。對于化橘紅樹的組培方法也有相關文獻報道，如：1、【題名】化州橘紅莖尖微芽嫁接技術研究，【作者】徐雪榮，黎思娜，李映志；【刊名】熱帶作物學報 2013，34 (7 ) ：1237-1241；摘要：以柚、檸檬、紅江橙等作砧木，化州橘紅作接穗。 研究了激素處理砧木、接穗滅菌和培養基配方、砧木苗齡等因素對化州橘紅莖尖嫁接成活率的影響。柚作砧木時，任何激素處理的成活率均高于對照，以 0.1m g/ L的GA3 處理 10 min 的成活率最高，為31％。不同砧木其成活率不同，成活率最高的為柚，達19.0%，最低的為寬皮橘，為 5.0%。滅菌方法對成活率和污染率也有影響，污染率最低的是 0.1%升汞滅菌 10 min，為 5. 7 % ，成活率最高的是 0.15%升汞滅菌 8 min，為 25.0%。培養基配方對嫁接苗的成活率也有影響，MS 基本培養基最有利于嫁接苗的成活，添加6-BA、A d和 NAA 都會降低成活率。16 d 苗齡的砧木最有利于嫁接苗的成活，成活率可達36.5%。2、中國專利技術專利，申請號：201410241319.3；申請人：廣東橘鄉農業開發有限公司；專利技術名稱：一種嫁接橘紅種苗方法；摘要：本專利技術涉及一種嫁接橘紅種苗方法，屬于植物嫁接
，其方法包括砧木品種的選擇和培育、嫁接苗的培育、砧木及嫁接核心技術、嫁接苗的管理、苗期肥水管理、苗木出圃等六個方面；該方法能在任何季節進行嫁接，有效節約人工費用 50% 以上，而經本技術嫁接的橘紅果樹產量比傳統嫁接橘紅果樹產量增加 20%-30%，經濟效益顯著，對大規模種植橘紅有很好的推廣示范應用作用。目前，在化橘紅的繁育上，由于采用傳統的圈枝和嫁接等方法進行繁育，存在著繁育繁殖率很低，生長速度慢，遠遠不能滿足市場的大量需求等問題；因此，開發一種針對圈枝的組培快繁方法進行培養繁殖，能夠促進優良遺傳材料的快速繁殖，實現化橘紅樹苗的大量繁殖和快速推廣，是解決市場需求等問題的有效方法。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種操作簡便，繁殖速度，可應用于大規模商品化育苗的化橘紅的組培快繁方法，采用該方法能有效、方便的在短時間內獲得大量化橘紅組培苗，而且所獲得的組培苗成活率高，從而實現化橘紅樹苗的大量繁殖和快速推廣。為實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案：一種化橘紅的組培快繁方法，包括以下步驟：(1)外植體的建立：于春季萌芽前，剪取1年生化橘紅頭枝，剪去嫩梢段和基部老化部分，留半木質化莖段，用自來水沖洗10分鐘后，于質量濃度為0.4%的洗衣粉溶液中浸泡8-12分鐘，再用自來水沖洗干凈，然后用質量濃度為75%的酒精浸泡35s，無菌水沖洗3-4次，瀝干水分，用質量濃度為1.0%的次氯酸鈉消毒10-12分鐘，然后用無菌水沖洗7-8次，用鑷子夾取清洗好的莖段，在無菌操作臺上，用滅菌過的濾紙吸干表面水分，剪取1.5-2.5cm 的帶芽莖段作為外植體；（2）啟動培養：將滅菌后的外植體接種到經高溫滅菌的啟動培養基中培養，培養條件為溫度 25～27℃，光照強度為2400-2500lx，光照時間15-16h/d，在培養室中無菌培養23-25天后，將沒有染菌的材料切成帶 1～2 個芽的莖段接種于分生培養基中培養，分生培養基的成分為：MS+ N6芐基腺嘌呤（6-BA) 2.1mg/L+萘乙酸（NAA）0.4mg/L +維生素B1 1.6-1.8mg/L+谷氨酸1.7～1.8mg/L +4%糖蜜+瓊脂7g/L，培養基pH 值為6.0；在光照強度為2300-2400lx，光照時間14-15h/d，溫度為26-27℃的條件下，培養30-35天；（3）繼代培養：將植株莖段轉接入經高溫消毒的繼代培養基，在培養溫度為25-26℃，光強 2000～2500lx，光照時間為17h/d的條件下培養33-35d；（4）生根培養：在無菌條件下，剪取長2-3cm繼代培養得到的帶葉莖段，插入生根培養基中進行生根培養；培養溫度 26～28℃，光強2000～22001x，光照時間15h/d；（5）煉苗：當經過生根培養后的生根試管苗根長約 1.0～2.0 cm時，將組培苗進行室內煉苗，煉苗溫度為：27-28℃，光照強度為5000-6500lx，室內瓶煉5-6天后，敞口煉苗4天；（6）移栽：取出試管苗，洗凈根上的培養基，移栽到用0.2%KMnO4消毒過的米糠+黃土+細河沙+草炭按照2-3:5:1:0.5的比例做基質的營養杯中，澆足水，保持空氣濕度為85％-90%，溫度 25～26℃，避免陽光直射， 35-38 天后，移出溫室進行全光照煉苗6-7d，及時澆水，然后移栽大田。所述的化橘紅的組培快繁方法，步驟（2）中的啟動培本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種化橘紅的組培快繁方法，其特征在于：包括以下步驟：(1)外植體的建立：于春季萌芽前，剪取1年生化橘紅頭枝，剪去嫩梢段和基部老化部分，留半木質化莖段，用自來水沖洗10分鐘后，于質量濃度為0.4%的洗衣粉溶液中浸泡8?12分鐘，再用自來水沖洗干凈，然后用質量濃度為75%的酒精浸泡35s，無菌水沖洗3?4次，瀝干水分，用質量濃度為1.0%的次氯酸鈉消毒10?12分鐘，然后用無菌水沖洗7?8次，用鑷子夾取清洗好的莖段，在無菌操作臺上，用滅菌過的濾紙吸干表面水分，剪取1.5?2.5cm?的帶芽莖段作為外植體；（2）啟動培養：將滅菌后的外植體接種到經高溫滅菌的啟動培養基中培養，培養條件為溫度?25～27℃，光照強度為2400?2500lx，光照時間15?16h/d，在培養室中無菌培養23?25天后，將沒有染菌的材料切成帶?1～2?個芽的莖段接種于分生培養基中培養，分生培養基的成分為：MS+?N6芐基腺嘌呤（6?BA)?2.1mg/L+萘乙酸（NAA）0.4mg/L?+維生素B1?1.6?1.8mg/L+谷氨酸1.7～1.8mg/L?+4%糖蜜+瓊脂7g/L，培養基pH?值為6.0；在光照強度為2300?2400lx，光照時間14?15h/d，溫度為26?27℃的條件下，培養30?35天；（3）繼代培養：將植株莖段轉接入經高溫消毒的繼代培養基，在培養溫度為25?26℃，光強?2000～2500lx，光照時間為17h/d的條件下培養33?35d；（4）生根培養：在無菌條件下，剪取長2?3cm繼代培養得到的帶葉莖段，插入生根培養基中進行生根培養；培養溫度?26～28℃，光強2000～22001x，光照時間15h/d；（5）煉苗：當經過生根培養后的生根試管苗根長約?1.0～2.0?cm時，將組培苗進行室內煉苗，煉苗溫度為：27?28℃，光照強度為5000?6500lx，室內瓶煉5?6天后，敞口煉苗4天；（6）移栽：取出試管苗，洗凈根上的培養基，移栽到用0.2%KMnO4消毒過的米糠+黃土+細河沙+草炭按照2?3:5:1:0.5的比例做基質的營養杯中，澆足水，保持空氣濕度為85％?90%，溫度?25～26℃，避免陽光直射，?35?38?天后，移出溫室進行全光照煉苗6?7d，及時澆水，然后移栽大田。...
【技術特征摘要】
1.一種化橘紅的組培快繁方法，其特征在于：包括以下步驟：(1)外植體的建立：于春季萌芽前，剪取1年生化橘紅頭枝，剪去嫩梢段和基部老化部分，留半木質化莖段，用自來水沖洗10分鐘后，于質量濃度為0.4%的洗衣粉溶液中浸泡8-12分鐘，再用自來水沖洗干凈，然后用質量濃度為75%的酒精浸泡35s，無菌水沖洗3-4次，瀝干水分，用質量濃度為1.0%的次氯酸鈉消毒10-12分鐘，然后用無菌水沖洗7-8次，用鑷子夾取清洗好的莖段，在無菌操作臺上，用滅菌過的濾紙吸干表面水分，剪取1.5-2.5cm 的帶芽莖段作為外植體；（2）啟動培養：將滅菌后的外植體接種到經高溫滅菌的啟動培養基中培養，培養條件為溫度 25～27℃，光照強度為2400-2500lx，光照時間15-16h/d，在培養室中無菌培養23-25天后，將沒有染菌的材料切成帶 1～2 個芽的莖段接種于分生培養基中培養，分生培養基的成分為：MS+ N6芐基腺嘌呤（6-BA) 2.1mg/L+萘乙酸（NAA）0.4mg/L +維生素B1 1.6-1.8mg/L+谷氨酸1.7～1.8mg/L +4%糖蜜+瓊脂7g/L，培養基pH 值為6.0；在光照強度為2300-2400lx，光照時間14-15h/d，溫度為26-27℃的條件下，培養30-35天；（3）繼代培養：將植株莖段轉接入經高溫消毒的繼代培養基，在培養溫度為25-26℃，光強 2000～2500lx，光照時間為17h/d的條件下培養33-35d；（4）生根培養：在無菌條件下，剪取長2-3cm繼代培養得到的帶葉莖段，插入生根培養基中進行生根培養；培養溫度 26～28℃，光強2000～22001x，光照時間15h/d；（5...
【專利技術屬性】
技術研發人員：雷軍強，韋穎婷，覃穩梅，李玉秋，莫曉君，韋倩梅，
申請(專利權)人：象州縣科學技術局，
類型：發明
國別省市：廣西;45
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