一種萊菔素衍生物的制備方法技術

本發明專利技術涉及一種萊菔素衍生物的制備方法，屬于抗癌化合物領域。該方法較傳統方法相比，主要利用了結晶法代替傳統的制備色譜法，能夠顯著降低制備成本，能夠實現大規模的制備。該方法主要包括還原型谷胱甘肽與萊菔素粗產品進行反應，利用乙醇等能與水互溶的有機溶劑與水混合對反應反應產物結晶。結晶產品純度為96％，并且大批量制備萊菔素?谷胱甘肽結合物。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種萊菔素衍生化合物的制備及純化工藝，尤其是萊菔素-谷胱甘肽結合物的制備方法。
技術介紹
腫瘤是機體在各種致癌因素作用下，局部組織的細胞在基因水平上失去對其生長的正常調控導致異常增生與分化而形成的新生物。新生物一旦形成，便不再停止生長，他的生長不受正常機體生理調節，而是破壞正常組織與器官，這一點在惡性腫瘤尤其明顯。與良性腫瘤相比，惡性腫瘤生長速度快，呈浸潤性生長，易發生出血、壞死、潰瘍等，并常有遠處轉移，造成人體消瘦、無力、貧血、食欲不振、發熱以及嚴重的臟器功能受損等，最終造成患者死亡。腫瘤的治療方法有手術治療、放射治療和藥物治療(即化療)等，其中化學治療為目前主要的治療手段。化學治療能治愈一部分腫瘤患者或延長患者的生命，在腫瘤治療中占有越來越重要地位。但是，傳統的抗腫瘤藥物對癌癥細胞的殺滅率較低或需要較高的濃度，因此產生了許多嚴重的毒副反應。隨著生活水平的提高，人們對于癌癥的治療預期顯著提高，希望在治愈癌癥的時候身體健康不受到很大的影響，因此，發現新的、高效抗腫瘤化合物顯得尤為迫切。萊菔素是中藥萊菔子中提取的一種天然活性成分，與萊菔硫烷結構相近，也因此與萊菔硫烷的抗癌效果相近。但是由于其結構不穩定，無法長期儲存，嚴重限制了其應用。萊菔素可與還原型谷胱甘肽等含巰基類的物質結合，使容易降解的基團被保護起來，并保留了其抗癌活性，形成了全新的抗癌化合物。本專利技術的主要內容是研究了一種萊菔素衍生物，萊菔素-谷胱甘肽結合物的制備方法，該方法代替了原有的利用純品萊菔素參與反應及利用制備型高效液相色譜純化的途徑。本專利技術的具體方法和步驟如下：本專利技術的目的是提供一種萊菔素衍生物，萊菔素-谷胱甘肽結合物的制備方法，該結合物的化學式為：一種萊菔素衍生物的制備方法，其特征在于：(1)還原型谷胱甘肽溶于將還原型谷胱甘肽溶于1至1000體積倍的去離子水中將其溶解。(2)在還原型谷胱甘肽溶液中加入萊菔素，(萊菔素純度為0.1％-100％)，還原型谷胱甘肽與萊菔素的摩爾比例為100:1至1:100。(3)控制溫度在0℃至80℃，反應1至144小時。(4)若反應體系固含量大于5％，則加入去離子水，將反應液固含量稀釋至1％-5％之間。若反應體系固含量小于1％，則通過旋轉蒸發儀濃縮反應液，至反應液固含量為1％-5％。(5)過濾除去不溶性的雜質后，向反應液中加入0.1至500體積倍的與水互溶的有機溶劑，控制溫度在0℃至100℃，攪拌1min至120min，在-20℃至20℃下結晶。(6)過濾后乙醇洗滌，干燥即得。除非另有說明，本文所描述的每一步所加入成分配比均為質量比。所述制備方法中，所加入的與水互溶的有機溶劑可以為乙醇，甲醇，乙
腈，異丙醇等藥學上可接受的有機溶劑。附圖說明圖1為化合物的質譜圖譜。圖2為化合物的紅外圖譜。圖3為化合物的1H-NMR圖譜。圖4為化合物的13C-NMR圖譜。圖5為化合物的制備色譜圖譜。具體實施方式下面結合具體實施例對本專利技術做進一步的描述，但這些實施例的目的并不在于限制本專利技術的保護范圍。實施例1將10g還原型谷胱甘肽溶于100ml去離子水中，向其中加入10g純度為質量百分比96％萊菔素，25℃反應16小時。加入300ml去離子水，50℃攪拌30min溶解，過濾除去不溶性雜質，加入1600ml的無水乙醇，控制溫度為75℃攪拌1h，置于4℃下結晶。將結晶析出固體過濾，用100ml無水乙醇洗滌3次，烘干即得14.8g，純度為97.5％的產品。實施例2將5g還原型谷胱甘肽溶于500ml去離子水中，向其中加入10g純度為50％萊菔素，35℃反應40小時。利用旋轉蒸發儀50℃，壓力45mbar，將反應體系濃縮至200ml。過濾除去不溶性的雜質，加入1800ml的無水甲醇，控制溫度在65℃下攪拌40min，置于0℃下結晶。將結晶析出固體過濾，用50ml無水乙醇洗滌3次，烘干即得7.0g，純度為92.9％的產品。實施例3將1g還原型谷胱甘肽溶于100ml去離子水中，向其中加入5g純度為20％
萊菔素，40℃反應48小時。利用旋轉蒸發儀55℃，壓力50mbar，將反應體系濃縮至20ml。過濾除去不溶性的雜質，加入180ml的乙腈，控制溫度在80℃下攪拌20min，置于-10℃下結晶。將結晶析出固體過濾，用10ml無水乙醇洗滌3次，烘干即得1.5g，純度為95.3％的產品。實施例4將10g還原型谷胱甘肽溶于200ml去離子水中，向其中加入15g純度為75％萊菔素，室溫反應26小時。加入100ml去離子水，60℃攪拌溶解20min，過濾除去不溶性雜質，加入2000ml異丙醇，控制溫度在85℃下攪拌20min，置于室溫結晶。將結晶析出固體過濾，用100ml無水乙醇洗滌3次，烘干即得15.1g，純度為94.5％的產品。實施例5將10g還原型谷胱甘肽溶于200ml去離子水中，向其中加入15g純度為75％萊菔素，室溫反應25小時。加入100ml去離子水，60℃攪拌溶解20min，過濾除去不溶性雜質，加入2000ml異丙醇，控制溫度在85℃下攪拌20min，置于室溫結晶。將結晶析出固體過濾，用100ml無水乙醇洗滌3次，烘干即得15.1g，純度為95.5％的產品。實施例6一、材料和方法1.實驗細胞系和相關化學試劑：人肺鱗癌細胞系H460購買自美國ATCC細胞庫，培養在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培養基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常規消化后傳代。本實驗相關化學試劑皆購自Sigma公司。2.化合物對H460血細胞的體外抑制實驗：取對數生長期的H460細胞消
化成單個細胞后，接種于96孔板中，每孔3000個細胞，在含5％CO2的37℃培養箱中培養。將化合物用無菌去離子水溶解后，過0.22μm濾膜除菌，用含血清培養液稀釋，使得結合物II的最終濃度為1μM、2μM、3μM、5μM、10μM、20μM和50μM，在H460細胞接種培養24小時后，換成含有化合物相應濃度的培養液培養細胞，陰性對照組培養基中加入等體積的無菌去離子水培養細胞。再分別培養48小時后，每孔加入20μL MTT，在含有5％CO2的37℃培養箱繼續孵育3h后，洗凈每孔中的溶液，分別加入150μL的DMSO，搖床震蕩10min，測定每孔490nm波長下的吸光度。以0小時的陰性對照組存活細胞數為基準，計算細胞生長的半數抑制濃度(IC50)，實驗結果數據見表1。二、實驗結果表1顯示，化合物對H460人肺鱗癌細胞的生長增值具有顯著的抑制效果。處理48小時后，化合物對的H460細胞生長的半數抑制濃度(IC50)為9.116μM。實施例7一、材料和方法1.實驗細胞系和相關化學試劑：人宮頸癌細胞系Hela購買自美國ATCC細胞庫，培養在含10％胎牛血清的RPMI-1640(HyClone)培養基中，用0.25％胰蛋白酶以及0.02％EDTA常規消化后傳代。本實驗相關化學試劑皆購自Sigma公司。2.化合物對Hela血細胞的體外抑制實驗：取對數生長期的Hela細胞消化成單個細胞后，接種于96孔板中，每孔3000個細胞，在含5％CO2的37℃培養箱中培養。將化合物用無菌去離子水溶解后，過0.22μm濾膜除本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種萊菔素衍生物，其化學式如下：

【技術特征摘要】
1.一種萊菔素衍生物，其化學式如下：2.權利要求1所述的衍生物在制備用于治療人的腫瘤的藥物中的應用。3.權利要求1所述的衍生物在制備用于治療或預防癌癥的藥物中的用途。4.藥物組合物，包含權利要求1所述的衍生物以及藥學輔料。5.按照權利要求4所述的藥物組合物，是片劑、膠囊劑、粉針劑、液劑或混懸劑形式。6.制備如權利要求1所述的一種萊菔素衍生物的方法，其特征在于：(1)還原型谷胱甘肽溶于將還原型谷胱甘肽溶于1至1000體積倍的去離子水中將其溶解；(2)在還原型谷胱甘肽溶液中加入萊菔素，還原型谷胱甘肽與萊菔素的摩爾比例...

【專利技術屬性】
技術研發人員：袁其朋，王忠鵬，程立，田桂芳，況鵬群，任萌，劉玉婷，
申請(專利權)人：北京化工大學，
類型：發明
國別省市：北京;11