抑制β2GPI表達的核酸制造技術

本發明專利技術提供了具有抑制β2GPI表達的活性的核酸、包含該核酸的醫藥組合物，以及提供了含有該核酸的、用于自身免疫病(例如APS、SLE等)以及血液透析中血栓的預防或治療性藥物。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及用于抑制β2GPI表達的核酸以及包含該核酸的醫藥組合物。
技術介紹
β2-糖蛋白1(β2GPI)(又名為載脂蛋白H，apoH)是由326個氨基酸構成的糖蛋白，其具有5個結構域相連而成的高級結構。β2GPI被認為具有許多不同的生理作用，據報道，其涉及血小板凝集反應、凝固和纖溶反應，以及巨噬細胞對氧化LDL的攝取(非專利文獻1)。在與疾病相關的方面，已知β2GPI是抗磷脂抗體綜合征(APS)和系統性紅斑狼瘡(SLE)這樣的自身免疫性疾病中所出現的抗磷脂抗體的主要對應抗原。抗β2GPI抗體與疾病的病理形成也深度相關，通過使用動物模型的研究和臨床研究已闡明，β2GPI與抗β2GPI抗體形成的復合體在血管內皮細胞、單核細胞、血小板、滋養層細胞等多種細胞的膜受體上產生活化信號，其繼而可引起血栓和異常妊娠等APS的特征性病理(非專利文獻2)。雖然預期可通過特異性抑制β2GPI和抗β2GPI抗體形成的免疫復合物的形成，來預防或者治療上述疾病，然而，由于β2GPI在血液中以50～500μg/ml的相對高濃度存在，難以使用例如常規抗體藥物實現對全部β2GPI的持續抑制(非專利文獻3)。在另一方面，作為抑制基因自身表達的方法，利用例如RNA干擾(下文稱為RNAi)等方法是已知的。具體而言，發現通過引入具有與靶序列相同的序列的雙鏈RNA，特異性地抑制了靶基因的表達，所述RNA被命名為短干擾RNA(siRNA)(專利文獻1)。此外，
作為除RNA干擾之外的抑制基因表達的方法，反義方法也是已知的(專利文獻2)。盡管靶向人β2GPI基因的siRNA序列的一部分已經被公開，抑制人β2GPI基因表達的siRNA序列仍是未知的(專利文獻3、4)。現有技術文獻專利文獻專利文獻1：WO 2001/75164專利文獻2：WO 98/56905專利文獻3：WO 2005/116204專利文獻4：WO 2008/043561非專利文獻非專利文獻1：Ann.N.Y.Acad.Sci.，1285，44-58(2013)非專利文獻2：N.Engl.J.Med.，368，1033-1044(2013)非專利文獻3：J.Thromb.Haemost.，9，1275-1284(2011)
技術實現思路
專利技術所要解決的課題本專利技術的目的在于提供一種抑制β2GPI表達的核酸。本專利技術的目的還在于提供一種用于預防或治療β2GPI表達相關疾病的醫藥組合物。解決課題的手段本專利技術涉及以下的(1)～(13)。(1)一種雙鏈核酸，其降低β2GPI基因的表達，所述雙鏈核酸由有義鏈和反義鏈組成，所述雙鏈核酸包含至少11個堿基對的雙鏈區，其中在上述反義鏈中的鏈長為至少17個核苷酸且至多30個核苷酸的寡核苷酸鏈與選自表1-1至表1-16中所述的組中的靶標β2GPI mRNA序列互補。(2)如上述(1)中所述的雙鏈核酸，其中所述雙鏈區為11～27個堿
基對，與選自表1-1至表1-16中所述的組中的靶標β2GPI mRNA序列互補的所述反義鏈中，從5’端起算的第2個核苷酸與該靶標β2GPI mRNA序列的從3’端起算的第2個脫氧核糖核苷酸互補。(3)如上述(1)中所述的雙鏈核酸，其中所述有義鏈的3’端和所述反義鏈的5’端形成平末端。(4)如上述(1)中所述的雙鏈核酸，其中所述有義鏈為21個核苷酸長，并且所述反義鏈為21個核苷酸長。(5)如上述(4)中所述的雙鏈核酸，其降低β2GPI基因的表達，其為含有19個堿基對的雙鏈區的經修飾雙鏈核酸，所述雙鏈區中的核苷酸中的40～65％包含2’-O-甲基修飾核苷酸。(6)如上述(1)中所述的雙鏈核酸，其中所述反義鏈包含選自表1-1至1-16和表3-1至3-5的“反義鏈”所記載的組。(7)如上述(1)中所述的雙鏈核酸，其中所述有義鏈包含選自表1-1至1-16和表3-1至3-5的“有義鏈”所記載的組。(8)如上述(1)中所述的雙鏈核酸，其包含選自表1-1至1-16和表3-1至3-5所記載的有義鏈/反義鏈所組成的組的1對有義鏈/反義鏈的序列。(9)如上述(1)～(8)中任一項所述的雙鏈核酸，其包含配體。(10)一種單鏈核酸，其僅由如上述(1)～(9)中任一項所述的雙鏈核酸中的反義鏈組成。(11)醫藥組合物，其包含如上述(1)～(10)中任一項所述的核酸。(12)一種治療抗β2GPI抗體所介導疾病的方法，其包括下述步驟：向有此治療需要的人施用治療有效量的如上述(1)～(10)中任一項所述的核酸或者如上述(11)中所述的醫藥組合物。(13)如上述(12)所述的方法，其中，所述疾病是自身免疫病或者血栓。專利技術的效果通過施用本專利技術的核酸或者包含該核酸的醫藥組合物，可抑制
β2GPI的表達。特別地，可用于治療或預防與β2GPI表達相關的疾病。具體實施方式作為本專利技術的核酸靶向的β2GPI基因(編碼β2GPI的基因)，可舉出對應于以Genbank登錄號NM_000042登錄的β2GPI cDNA(SEQ ID NO：3541)的產生全長β2GPI mRNA的基因。1.本專利技術的核酸在本專利技術中，包含與β2GPI mRNA互補的核苷酸序列的核酸被稱為反義鏈核酸，包含與反義鏈核酸的核苷酸序列互補的核苷酸序列的核酸也被稱為有義鏈核酸。在本說明書中，除非另有指明，“本專利技術的核酸”以涵蓋反義鏈核酸和有義鏈核酸，以及有義鏈和反義鏈核酸配對的雙鏈核酸的含義使用。作為本專利技術的核酸，可以是由核苷酸或者具有與核苷酸同等功能的分子聚合而成的任意的分子，可舉出例如，作為核糖核苷酸的聚合物的RNA，作為脫氧核糖核苷酸之聚合物的DNA，由RNA和DNA構成的嵌合核酸，以及這些核酸的至少一個核苷酸被具有與核苷酸同等功能的分子所替換的核苷酸聚合物。此外，這些核酸中含有至少一個與核苷酸同等功能的分子的衍生物也被本專利技術的核酸所涵蓋。尿嘧啶(U)能夠毫無疑義地讀為胸腺嘧啶(T)。與核苷酸具有同等功能的分子的實例包括例如核苷酸衍生物等。作為核苷酸衍生物，可以是通過對核苷酸施以修飾而獲得的任意的分子，例如，較之RNA或DNA，為改進核酸酶抗性或者使其穩定，增強對互補鏈核酸的親和力，增強細胞通透性，或者使之可視化，通過對核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸等施以修飾而獲得的分子是優選使用的。作為通過對核苷酸施以修飾而獲得的分子，可舉出例如糖部分經修飾的核苷酸、磷酸二酯鍵經修飾的核苷酸、堿基經修飾的核苷酸、其中糖部分、磷酸二酯鍵和堿基中至少之一經修飾的核苷酸等。作為糖部分經修飾的核苷酸，可以是針對核苷酸中糖的化學結構的部分或全部以任意取代基進行了修飾或者取代而成的核苷酸，或者是以任意原子進行了取代而成的核酸，但是2’-修飾核苷酸是優選使用的。作為2’-修飾核苷酸，可舉出例如：核糖的2’-OH基被選自H、OR、R、R’OR、SH、SR、NH2、NHR、NR2、N3、CN、F、Cl，Br和I(R是烷基或芳基，優選碳原子數為1～6的烷基，R’是亞烷基，優選碳原子為1～6的亞烷基)的取代基取代的核苷酸，優選為2’-OH基被H、F或甲氧基取代的核苷酸，更優選2’-OH基被F或甲氧基取代的核苷酸。此外，還可舉出2’-OH基被選自2-(甲氧基)乙氧基、3-氨基丙氧基、2-[(N，N本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種雙鏈核酸，其降低β2GPI基因的表達，所述雙鏈核酸由有義鏈和反義鏈組成，所述雙鏈核酸包含至少11個堿基對的雙鏈區，其中，所述反義鏈中的鏈長為至少17個核苷酸且至多30個核苷酸的寡核苷酸鏈與選自表1?1至表1?16中所述的組中的靶標β2GPI?mRNA序列互補。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2014.01.17 JP 2014-0073051.一種雙鏈核酸，其降低β2GPI基因的表達，所述雙鏈核酸由有義鏈和反義鏈組成，所述雙鏈核酸包含至少11個堿基對的雙鏈區，其中，所述反義鏈中的鏈長為至少17個核苷酸且至多30個核苷酸的寡核苷酸鏈與選自表1-1至表1-16中所述的組中的靶標β2GPI mRNA序列互補。2.根據權利要求1所述的雙鏈核酸，其中所述雙鏈區為11～27個堿基對，與選自表1-1至表1-16中所述的組中的靶標β2GPI mRNA序列互補的所述反義鏈中，從5’端起算的第2個核苷酸與該靶標β2GPI mRNA序列的從3’端起算的第2個脫氧核糖核苷酸互補。3.根據權利要求1所述的雙鏈核酸，其中所述有義鏈的3’端和所述反義鏈的5’端形成平末端。4.根據權利要求1所述的雙鏈核酸，其中所述有義鏈為21個核苷酸長，并且所述反義鏈為21個核苷酸長。5.根據權利要求4所述的雙鏈核酸，其降低β2GPI基因的表達，其為含有19個堿基對的...

【專利技術屬性】
技術研發人員：山田陽史，巖井宏徒，桝田和宏，神田美菜子，
申請(專利權)人：協和發酵麒麟株式會社，
類型：發明
國別省市：日本;JP