CPT1A在AML組織樣品中表達水平的檢測方法及其應用。本發明專利技術提供了肉毒堿棕櫚酰基轉移酶1A基因的引物對，其中之一引物對的序列是gagagacagcaagcacatcg(SEQ?ID?NO：2)和cgtccaaaataggcctgacg(SEQ?ID?NO：3)或者它們的互補序列，本發明專利技術引物對用于檢測肉毒堿棕櫚酰基轉移酶1A的表達高低，可進一步對急性髓系白血病患者進行危險度分層或臨床預后評估。本發明專利技術還提供了包含所述引物對的基因芯片和試劑盒。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物
，涉及急性髓系白血病基因的檢測、危險度分層和臨床預后評估，特別是涉及急性髓系白血病基因的檢測引物、基因芯片和試劑盒。
技術介紹
急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一種異質性極強的惡性血液病，占成人急性白血病的80％左右(參見MROZEK K,HEEREMA N A,BLOOMFIELD C D.,Cytogenetics in acute leukemia[J].Blood reviews,2004,18(2):115-36)，它包括許多具有不同遺傳異常狀況和臨床特征的實體，預后具有高度的異質性。在NCCN(National Comprehensive Cancer Network)危險度分層指南中，約有一半以上的AML被分在中危組(包括全部的正常核型急性髓系白血病Cytogenetically Normal AML,CN-AML)，現有技術缺乏用于危險度分層和臨床預后評估的有效標志物，因此，目前臨床上AML的分層診斷及個體化治療非常困難，亟待找到有效的預后標志物來確認此類患者治療的強度，以實現精準的個體化治療，避免一部分預后良好的患者治療強度過大，帶來眾多不必要的并發癥，同樣也避免另一部分預后不良的患者治療強度不足，最終導致白血病復發。有一部分AML內部存在致病的基因突變，這些基因突變具有對AML患者進行危險度分層和臨床判斷預后的價值，例如攜帶FLT3-ITD(參見WHITMAN S P,MAHARRY K,RADMACHER M D,et al.FLT3internal tandem duplication associates with adverse outcome and gene-and microRNA-expression signatures in patients 60years of age or older with primary cytogenetically normal acute myeloid leukemia:a Cancer and Leukemia Group B study[J].Blood,2010,116(18):3622-6)的正常核型AML患者屬于高危組，而攜帶NPM1突變(參見DOHNER K,SCHLENK R F,HABDANK M,et al.Mutant nucleophosmin(NPM1)predicts favorable prognosis in younger adults with acute myeloid leukemia and normal cytogenetics:interaction with other gene mutation[J].Blood,2005,106(12):3740-6)、CEBPA雙突變(參見PASTORE F,KLING D,HOSTER E,et al.Long-term follow-up of cytogenetically normal CEBPA-mutated AML[J].Journal of hematology&oncology,2014,7)的患者具有相對較低的危險度和較好預后。CN104508143A公開了用于診斷、預測、治療和處理急性髓系白血病的方法，該方法涉及預測患有急性髓系白血病患者的生存率，包括：分析從所述患者分離的遺傳樣品是否存在細胞遺傳學異常，以及在基因FLT3、NPMI、DNMT3A、NRAS、CEBPA、TET2、WTI、IDHI、IDH2、KIT、RUNXI、MLL-PTD、 ASXLI、PHF6、KRAS、PTEN、P53、HRAS和EZH2中的至少一者中是否存在突變。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種敏感性高，通用性好，特異性強的標志物，來檢測AML細胞或組織樣品，來幫助判斷AML患者的危險度分層或臨床預后，是基于以下的考慮：(1)基因突變不能覆蓋所有的AML，而基因表達可以覆蓋所有的AML患者；(2)AML發生、發展的分子機理目前仍不清楚，尋求新的臨床預后標志物有助于理解AML的發病機理，并且能為AML的精準靶向治療奠定基礎。本專利技術人發現CPT1A(carnitine palmitoyltransferase 1A,肉毒堿棕櫚酰基轉移酶1A)高表達可提示急性髓系白血病細胞的存在，并且可提示急性髓系白血病的不良預后。CPT1A是長鏈脂肪酸由胞漿轉移到線粒體氧化供能的關鍵限速酶，位于線粒體外膜，催化長鏈脂肪酸從酰基輔酶A轉移到肉毒堿上進而從胞漿進入線粒體內部，并且進一步在位于線粒體內膜上的肉毒堿棕櫚酰轉移酶2催化下進行β氧化。人類CPT1A基因定位于11q13.1～q13.5區，主要表達于肝、腎、肺組織。CPT1A基因全長約60kb，包括18個編碼外顯子。因此，本專利技術提供CPT1A作為AML標志物，其敏感性高，通用性好，特異性強，能用來幫助判斷AML患者的危險度分層或臨床預后。一方面，本專利技術提供一種檢測急性髓系白血病細胞或組織中CPT1A表達高低的方法，特征在于，使用CPT1A基因的引物對或者探針。所述檢測包括體外檢測，包括非診斷目的檢測。基于與正常對照細胞相比差異表達的CPT1A的急性髓系白血病癌癥特異性特征(signature)的鑒定及其應用，設計特定CPT1A基因引物對或探針，來檢測急性髓系白血病細胞或組織中CPT1A的表達高低，通過檢測CPT1A的表達高低來對AML患者進行危險度分層并分析臨床預后。CPT1A高表達的AML樣品具有較高的危險度分層和較差的臨床預后。CPT1A低表達的AML樣品具有較低的危險度分層和較好的臨床預后。第二方面，本專利技術提供一種檢測急性髓系白血病細胞或組織樣品中CPT1A表達高低的試劑盒，特征在于，其中包含CPT1A基因的引物對或者探針。第三方面，本專利技術提供一種檢測急性髓系白血病細胞或組織樣品中CPT1A表達高低的基因芯片，特征在于，其中包括固相載體和CPT1A基因的引物對或者探針。進一步地，本專利技術提供了CPT1A基因的引物對或者探針在制備通過檢測CPT1A的表達高低而對急性髓系白血病進行危險度分層或預后評估的基因芯片或試劑盒中的用途。更進一步地，由于本專利技術人發現急性髓系白血病與CPT1A基因差異表達相關，因此本專利技術提供CPT1A基因在設計或制備用于急性髓系白血病檢測、危險度分層或預后評估的試劑或試劑 盒中的用途。本專利技術還提供了CPT1A在篩選或制備用于治療急性髓系白血病的藥物中的用途。在AML細胞或正常細胞中CPT1A差異表達的序列的鑒定以及導致不同預后結果的差異表達允許以許多方法使用該信息。例如，可評估特定的治療方案(例如，確定化療藥物是否改善特定患者的長期預后)。此外，CPT1A基因表達譜(或個體基因)允許篩選抑制AML表達譜或將不良預后譜轉變成更好的預后譜的藥物候選物。本專利技術也提供了測定AML受試者的預后的方法，其包括，測量來自受試者的受試樣品中CPT1A基因產物的水平(其與AML的特定預后例如好的或積極的預后、差的或不利的預后相關)。根據這些方法，與對照樣品中相應的CPT1A基因產物的水平相比，受試樣品中與特定預后相關的CPT本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種用于檢測急性髓系白血病細胞或組織樣品中肉毒堿棕櫚酰基轉移酶1A表達高低的試劑盒，特征在于，其中包含肉毒堿棕櫚酰基轉移酶1A基因的引物對或者探針。
【技術特征摘要】
1.一種用于檢測急性髓系白血病細胞或組織樣品中肉毒堿棕櫚酰基轉移酶1A表達高低的試劑盒，特征在于，其中包含肉毒堿棕櫚酰基轉移酶1A基因的引物對或者探針。2.一種用于檢測急性髓系白血病細胞或組織樣品中肉毒堿棕櫚酰基轉移酶1A表達高低的基因芯片，特征在于，其中包括固相載體和肉毒堿棕櫚酰基轉移酶1A基因的引物對或者探針。3.一種檢測急性髓系白血病細胞或組織樣品中肉毒堿棕櫚酰基轉移酶1A表達高低的方法，特征在于，使用肉毒堿棕櫚酰基轉移酶1A基因的引物對或者探針。4.根據權利要求1的檢測急性髓系白血病細胞或組織樣品中肉毒堿棕櫚酰基轉移酶1A表達高低的試劑盒，特征在于，其中所述肉毒堿棕櫚酰基轉移酶1A基因的引物對是下面任一組的序列或者它們的互補序列：第一組引物對：LEFT PRIMER gagagacagcaagcacatcg SEQ ID NO：2RIGHT PRIMER cgtccaaaataggcctgacg SEQ ID NO：3第二組引物對：LEFT PRIMER cagcatatgtatcgcctcgc SEQ ID NO：5RIGHT PRIMER ctggacacgtactctgggtt SEQ ID NO：6或者第三組引物對：LEFT PRIMER ctcacatacgaggcctccat SEQ ID NO：8RIGHT PRIMER gcgaggcgatacatatgctg SEQ ID NO：9。5.根據權利要求2的檢測急性髓系白血病細胞或組織樣品中肉毒堿棕櫚酰基轉移酶1A表達高低的基因芯片，特征在于，其中所述肉毒堿棕櫚酰基轉移酶1A基因的引物對是下面任一組的序列或者它們的互補序列：第一組引物對：LEFT PRIMER gagagacagcaagcacatcg SEQ ID NO：2RIGHT PRIMER cgtccaaaataggcctgacg SEQ ID NO：3第二組引物對：LEFT PRIMER cagcatatgtatcgcctcgc SEQ ID NO：5RIGHT PRIMER ctggacacgtactctgggtt SEQ ID NO：6或者第三組引物對：LEFT PRIMER ctcacatacgaggcctccat SEQ ID NO...
【專利技術屬性】
技術研發人員：石金龍，付林，付華平，王衛東，
申請(專利權)人：石金龍，
類型：發明
國別省市：北京;11
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