測(cè)定人全血中多種濫用藥物的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)屬藥物檢測(cè)與司法鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及采用超聲輔助的分散液液微萃取法對(duì)人全血中7種濫用藥物苯丙胺、甲基苯丙胺、亞甲基二氧苯丙胺、亞甲基二氧甲基苯丙胺、氯胺酮、哌替啶和美沙酮進(jìn)行提取并測(cè)定的方法，采用甲醇作為分散劑及蛋白沉淀溶劑，以二氯甲烷為萃取溶劑，并于pH13的水溶液形成三溶劑體系的微乳系統(tǒng)，在超聲的輔助下進(jìn)一步乳化，進(jìn)行液-液微萃取，提取過(guò)程無(wú)需揮干提取溶劑；該方法具有高富集倍數(shù)和回收率、操作簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、線性范圍寬以及費(fèi)用低、環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)，能夠滿足司法鑒定任務(wù)緊迫、對(duì)檢測(cè)時(shí)間要求高的特點(diǎn)。本發(fā)明專利技術(shù)的檢測(cè)體系為毒品檢測(cè)提供了新的技術(shù)平臺(tái)。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬藥物檢測(cè)與司法鑒定
，涉及測(cè)定人全血中藥物的方法，具體涉及基于超聲輔助的分散液-液微萃取(ultrasound-assisted dispersive liquid-liquid microextraction,UA-DLLME)對(duì)人全血中7種濫用藥物進(jìn)行提取并測(cè)定的方法，該方法具有高富集倍數(shù)和回收率、操作簡(jiǎn)便、快速、費(fèi)用低、環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)。
技術(shù)介紹
據(jù)報(bào)道，苯丙胺(amphetamine,AMP)、甲基苯丙胺(methamphetamine,MAMP)、亞甲基二氧苯丙胺(methylenedioxyamphetamine,MDA)、亞甲基二氧甲基苯丙胺(methylenedioxymethamphetamine,MDMA)、氯胺酮(ketamine)、哌替啶(pethidine)和美沙酮(methadone)是被廣泛濫用的毒品或藥物；其中AMP、MAMP、MDA和MDMA均為苯丙胺類興奮劑，可興奮中樞神經(jīng)，AMP和MAMP以中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮作用為主，毒品“搖頭丸”的主要成分則是MDA和MDMA，兼具興奮和致幻作用；氯胺酮是被稱作“K粉”的主要成分，有致幻作用，長(zhǎng)期使用或過(guò)量使用會(huì)對(duì)腦部造成永久損害；哌替啶又名度冷丁，是臨床常用的鎮(zhèn)痛劑，長(zhǎng)期使用會(huì)產(chǎn)生依賴性，濫用情況比較嚴(yán)重；美沙酮因其藥理作用與嗎啡相似，具有治療海洛因依賴脫毒和替代維持治療的藥效作用，因此，美沙酮替代遞減法是阿片類藥物依賴的常規(guī)戒毒方法之一，在涉毒事件鑒定中檢出率較高，美沙酮的濫用報(bào)道近年來(lái)也越來(lái)越多。通常，人全血是毒品鑒定中重要的生物檢材，也是毒品定量分析最為常用的檢材，所得的定量數(shù)據(jù)可用于與文獻(xiàn)報(bào)道的中毒濃度或致死濃度相比較。已見(jiàn)報(bào)道的人全血中上述7種濫用藥物的檢測(cè)方法主要有酶聯(lián)免疫法、氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法。實(shí)踐顯示，酶聯(lián)免疫法對(duì)樣品的前處理雖無(wú)特別的要求，但是其專屬性較差，難以區(qū)分結(jié)構(gòu)類似物，有時(shí)甚至?xí)霈F(xiàn)假陽(yáng)性的情況，因而該方法常常只能作為一種初篩的手段；采用氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)或液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)則具有較高的專屬性
及靈敏度，能進(jìn)一步對(duì)化合物進(jìn)行確證，然而在采用GC-MS或LC-MS對(duì)生物樣品進(jìn)行分析之前常需要對(duì)樣品進(jìn)行提取和純化，而目前常用的提取方法主要是采用較大體積量的有機(jī)溶劑，如乙醚、正己烷等進(jìn)行，因此采用該種提取方法，則常常涉及需將提取液揮干，從而達(dá)到富集的效果，但已有研究表明，其中的AMP和MAMP會(huì)隨著提取液的揮干而快速揮發(fā)，分析的重現(xiàn)性及標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性均會(huì)受到影響，從而造成生物檢材中所述的2種物質(zhì)難以準(zhǔn)確定量；雖然有報(bào)道提出可以通過(guò)加酸或在低溫條件下對(duì)樣品進(jìn)行揮干或進(jìn)行衍生化操作來(lái)避免AMP和MAMP的揮發(fā)，但這些樣品前處理方法相對(duì)繁瑣且耗時(shí)，而且使用的樣品量大，有機(jī)溶劑使用量大，對(duì)環(huán)境不友好，難以滿足司法鑒定對(duì)于毒品分析快速準(zhǔn)確的要求，也對(duì)樣品的采樣量有較大的要求。鑒于現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，本申請(qǐng)的專利技術(shù)人擬提供一種具有高富集倍數(shù)和回收率、且操作簡(jiǎn)便、快速、費(fèi)用低、環(huán)境友好的測(cè)定人全血中多種濫用藥物的方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提供測(cè)定人全血中藥物的方法，具體涉及基于超聲輔助的分散液-液微萃取(ultrasound-assisted dispersive liquid-liquid microextraction,UA-DLLME)對(duì)人全血中7種濫用藥物進(jìn)行提取并測(cè)定的方法，該方法具有高富集倍數(shù)和回收率、操作簡(jiǎn)便、快速、費(fèi)用低、環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)。本專利技術(shù)的方法能同時(shí)提取、純化和富集人全血中7種濫用藥物以及對(duì)樣品進(jìn)行前處理；所述的濫用藥物包括：苯丙胺(amphetamine,AMP)、甲基苯丙胺(methamphetamine,MAMP)、亞甲基二氧苯丙胺(methylenedioxyamphetamine,MDA)、亞甲基二氧甲基苯丙胺(methylenedioxymethamphetamine,MDMA)，以及氯胺酮(ketamine)，哌替啶(pethidine)和美沙酮(methadone)。具體而言，本專利技術(shù)方法基于超聲輔助的分散液-液微萃取方法對(duì)人全血中上述7種濫用藥物進(jìn)行提取、純化和富集，其特征在于，采用甲醇作為分散劑及蛋白沉淀溶劑，以二氯甲烷為萃取溶劑，并于pH13的水溶液形成三溶劑體系的微乳系統(tǒng)，在超聲的輔助下進(jìn)一步乳化，進(jìn)行液-液微萃取；其包括步驟：(1)樣品前處理：取人全血檢材至具塞尖底玻璃離心管中，加入內(nèi)標(biāo)，加入甲醇，渦旋混勻，4000rpm離心后，轉(zhuǎn)移上清至另玻璃離心管中，加入二氯甲烷，將該混合溶液加入含有4％氯化鈉溶液(pH＝13)的具塞尖底玻璃離心管中，形成渾濁溶液；將該渾濁溶液在超聲水浴中振搖提取，然后4000rpm離心，棄去上層溶液，轉(zhuǎn)移下層有機(jī)相；(2)采用氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)前處理后的樣品進(jìn)行定量定性分析。本專利技術(shù)的樣品前處理中，采用甲醇作為分散劑，本專利技術(shù)的一個(gè)實(shí)施例中采用1.3mL甲醇作為分散劑；本專利技術(shù)的樣品前處理中，采用二氯甲烷作為萃取溶劑，本專利技術(shù)的一個(gè)實(shí)施例中采用200μL二氯甲烷作為萃取溶劑；本專利技術(shù)的一個(gè)實(shí)施例中，樣品前處理中，以4.5mL的含4％氯化鈉和pH為13的水溶液作為水相，并且以2min的超聲水浴中振搖進(jìn)行輔助微萃取，該過(guò)程不涉及提取液的揮干過(guò)程，而是將提取液直接進(jìn)樣檢測(cè)。本專利技術(shù)方法中，氣相色譜－質(zhì)譜儀操作條件為：色譜柱：HP-5MS彈性石英毛細(xì)管氣相色譜柱，30m×0.25mm×0.25μm柱溫：起始100℃維持1.5min，然后25℃/min升至280℃并保持6min溶劑延遲時(shí)間：3min進(jìn)樣口/傳輸線溫度：250℃/280℃載氣：高純He，恒流1mL/minEI源電子能量：70eV掃描方式：選擇離子監(jiān)測(cè)(SIM)檢測(cè)目標(biāo)物的色譜保留時(shí)間和質(zhì)譜特征峰：如表1所示。表1 檢測(cè)目標(biāo)物的色譜保留時(shí)間和質(zhì)譜特征峰本專利技術(shù)方法中，采用甲醇對(duì)全血樣品的蛋白沉淀，二氯甲烷與甲醇的混合后能快速加大pH 13，鹽濃度為4％的水溶液形成乳化體系，輔助以超聲能進(jìn)一步加強(qiáng)乳化合液-液微萃取效果。本專利技術(shù)方法中，采用氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用對(duì)人全血中上述7種濫用藥物進(jìn)行定性和定量分析，其中采用DB-5MS毛細(xì)氣相色譜柱以及質(zhì)譜檢測(cè)器測(cè)定人全血中7種濫用藥物含量，檢測(cè)的靈敏度高、準(zhǔn)確度好。本專利技術(shù)方法對(duì)人全血中AMP、MAMP、MDA、MDMA、氯胺酮、哌替啶和美沙酮等7種濫用藥物進(jìn)行了定性和定量分析，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，各化合物檢測(cè)限均為10ng/mL，定量限為40ng/mL，線性范圍0.04～25μg/mL，線性相關(guān)系數(shù)r值均大于0.99。準(zhǔn)確度在85.0～113.3％范圍內(nèi)，批內(nèi)精密度的RSD值不超過(guò)8.2％，批間精密度的RSD值不超過(guò)12.8％。本方法具有高富集倍數(shù)和回收率、操作簡(jiǎn)便、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)、線性范圍寬以及費(fèi)用低、環(huán)境友好等優(yōu)點(diǎn)，能夠滿足司法鑒定任務(wù)緊迫、對(duì)檢測(cè)時(shí)間要求高的特點(diǎn)。本專利技術(shù)的檢測(cè)體系為毒品檢測(cè)提供了新的技術(shù)平臺(tái)。本專利技術(shù)方法與現(xiàn)有技術(shù)的檢測(cè)方法尤其是其中的樣品前處理方法相比，具有以下明顯優(yōu)勢(shì)：(1)本專利技術(shù)使用的樣品量少，僅需0.2mL本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
測(cè)定人全血中多種濫用藥物的方法，其特征在于，采用超聲輔助的分散液?液微萃取方法對(duì)人全血中多種濫用藥物進(jìn)行提取、純化和富集，采用甲醇作為分散劑及蛋白沉淀溶劑，以二氯甲烷為萃取溶劑，并于pH13的水溶液形成三溶劑體系的微乳系統(tǒng)，在超聲的輔助下進(jìn)一步乳化，進(jìn)行液?液微萃取；其包括步驟：(1)樣品前處理：取人全血檢材至具塞尖底玻璃離心管中，加入內(nèi)標(biāo)，加入甲醇，渦旋混勻，4000rpm離心后，轉(zhuǎn)移上清至另玻璃離心管中，加入二氯甲烷，將該混合溶液加入pH＝13含有4％氯化鈉溶液的具塞尖底玻璃離心管中，形成渾濁溶液；將該渾濁溶液在超聲水浴中振搖提取，然后4000rpm離心，棄去上層溶液，轉(zhuǎn)移下層有機(jī)相；(1)采用氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)前處理后的樣品進(jìn)行定量定性分析。

【技術(shù)特征摘要】
1.測(cè)定人全血中多種濫用藥物的方法，其特征在于，采用超聲輔助的分散液-液微萃取方法對(duì)人全血中多種濫用藥物進(jìn)行提取、純化和富集，采用甲醇作為分散劑及蛋白沉淀溶劑，以二氯甲烷為萃取溶劑，并于pH13的水溶液形成三溶劑體系的微乳系統(tǒng)，在超聲的輔助下進(jìn)一步乳化，進(jìn)行液-液微萃取；其包括步驟：(1)樣品前處理：取人全血檢材至具塞尖底玻璃離心管中，加入內(nèi)標(biāo)，加入甲醇，渦旋混勻，4000rpm離心后，轉(zhuǎn)移上清至另玻璃離心管中，加入二氯甲烷，將該混合溶液加入pH＝13含有4％氯化鈉溶液的具塞尖底玻璃離心管中，形成渾濁溶液；將該渾濁溶液在超聲水浴中振搖提取，然后4000rpm離心，棄去上層溶液，轉(zhuǎn)移下層有機(jī)相；(1)采用氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法對(duì)前處理后的樣品進(jìn)行定量定性分析。2.按權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的人全血中多種濫用藥物包括：苯丙胺(amphetamine,AMP)、甲基苯丙胺(methamphetamine,MAMP)、亞甲基二氧苯丙胺(methylenedioxyamphetamine,MDA)、亞甲基二氧甲基苯丙胺(methylenedioxymethamphetamine,MDMA)，以及氯胺酮...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：林澤彬，饒渝蘭，姜宴，葉永紅，沈憶文，趙子琴，黃志斌，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：復(fù)旦大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：上海;31