本發明專利技術屬醫藥技術領域，具體涉及一種維吾爾藥香青蘭抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法和其在乳腺癌、肺癌、胃癌、結腸癌、胰腺癌、宮頸癌、腦膠質瘤、肝癌等惡性腫瘤的預防及治療上的用途。所述的提取物通過如下方法獲得：先用100:0-100:8的石油醚：丙酮混合溶劑洗脫，繼用100:10的石油醚：丙酮混合溶劑洗脫，洗脫得到的石油醚-丙酮=100:10混合溶劑洗脫液經回收有機溶劑，干燥，即為抗腫瘤活性提取物。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬醫藥
，具體涉及一種維吾爾藥香青蘭抗腫瘤提取物及其組合物的制備方法或/和其在肝癌、肺癌、胃癌、結腸癌、胰腺癌、乳腺癌、宮頸癌、腦膠質瘤等惡性腫瘤的預防及治療上的用途。技術背景本品為唇形科植物香青蘭，學名Dracocephalum moldavica L.，為一年生草本，全草入藥。耐干旱，苗期要求土壤濕潤，成株較耐早。我國黑龍江、吉林、遼寧、內蒙古、河北、山西、河南、陜西、肅及青海各地都有分布。香青蘭經蒸餾得到的精油具有清爽的甜香氣，宜調配食用和日用香精。工業上可用于制作香料的原料，可以制成香青蘭香煙、茶、保健飲料、糖果和化妝品等。香青蘭功效清胃肝熱、止血、愈合傷口、燥協日烏素；主治胃肝熱、胃出血、食物中毒、赫如虎、巴木病等。現在藥理學研究證明香青蘭具有抗心肌缺血作用和抗冠心病作用。本專利技術在研究香青蘭抗腫瘤活性時意外地發現，香青蘭亦具有很好的腦膠質瘤、乳腺癌、宮頸癌、肝癌、肺癌、胃癌、結腸癌、胰腺癌等惡性腫瘤的預防及治療作用，可以應用癌癥的預防和治療。但是，對其抗腫瘤的有效成分一直不清楚，本專利技術通過系統地篩選研究，發現了香青蘭的活性提取提取物，可以應用于腫瘤的預防和治療。
技術實現思路
本專利技術所解決的技術問題是提供一種香青蘭提取物，該提取物具有抗腦膠質瘤、乳腺癌、肺癌、胃癌、結腸癌、胰腺癌、宮頸癌、肝癌等惡性腫瘤的作用。本專利技術還提供了以香青蘭提取物作為活性成分的藥物組合物及其制備方法。本專利技術是通過如下技術方案實現的：維吾爾藥香青蘭經甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱用石油醚：丙酮混合溶劑＝100:0-0:100梯度洗脫(石油醚：丙酮，洗脫梯度見表1)，各石油醚：丙酮比例混合溶劑洗脫液經濃縮、干燥后，利用體外抗腫瘤活性篩選體系測試其抗腫瘤活性，意外地發現先用石油醚：丙酮混合溶劑(石油醚：丙酮，100:0-100:8，體積比)洗脫，繼用石油醚：丙酮混合溶劑(石油醚：丙酮，100:10，體積比)洗脫，石油醚：丙酮100:10洗脫液干燥后，具有顯著地抗腫瘤活性，而其他比例的洗脫部位，沒有抗腫瘤活性。優選地，先
用石油醚：丙酮混合溶劑(石油醚：丙酮，100:8，體積比)洗脫，繼用石油醚：丙酮混合溶劑(石油醚：丙酮，100:10，體積比)洗脫，石油醚：丙酮100:10洗脫液干燥即得。本專利技術的抗腫瘤活性的化合物，可以通過以上方法，得到富集，從而與其他雜質類成分分離開。該活性提取物從未見文獻報道，其100:10洗脫液的TLC分析表征如圖1，TLC分析條件：GF254硅膠板，展開系統：石油醚-乙酸乙酯-丙酮(6:1:1)，顯色方法：香草醛-硫酸顯色。具體，發現過程如下：1、香青蘭經甲醇超聲提取物的制備取維吾爾藥香青蘭20g，經100ml甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取物SN0238A0.3421g，留樣0.0149g，剩余0.3272g。2、石油醚：丙酮混合溶劑梯度洗脫方法和結果取維吾爾藥香青蘭20g，經100ml甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取物SN0238A0.3421g，留樣0.0149g，剩余0.3272g。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅膠柱色譜，拌樣硅膠0.42g，空白硅膠5g，玻璃柱內徑1.6cm，石油醚：丙酮系統梯度洗脫(石油醚：丙酮，體積比，洗脫梯度見表1)，柱體積12.5ml，每個梯度洗脫100ml，各個濃度提取洗脫液的洗脫物，回收溶劑，即得，石油醚：丙酮梯度洗脫提取物，TLC分析結果見圖2、圖3，TLC分析條件：GF254硅膠板，展開系統：石油醚-乙酸乙酯-丙酮(6:1:1)，石油醚-乙酸乙酯-丙酮(3:1:1)，顯色方法：香草醛-硫酸顯色。表13、抗腫瘤活性篩選方法和結果1)實驗條件a)細胞株信息大鼠腦膠質瘤細胞株C6購于中國典型培養物保藏中心細胞庫。b)藥品及試劑樣品無菌條件下，DMSO溶解配置成母液濃度為100mg/mL，使用時用RPMI-1640培養液稀釋至所需濃度(DMSO≤1‰)。RPMI Medium 1640培養基干粉購于美國GIBCO公司。胎牛血清購于北京元亨圣馬生物技術研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴鹽(MTT)。c)儀器CO2培養箱(SANYO，日本)垂直層流潔凈工作臺(上海上凈凈化設備有限公司)倒置生物顯微鏡(重慶光電儀器有限公司)低/高速臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)電子天平(奧豪斯儀器有限公司)酶標儀(伯樂生命醫學產品有限公司)立式壓力蒸汽滅菌器(上海申安醫療器械廠)鼓風干燥箱(上海躍進醫療器械廠)PH計(SARTORIUS，德國)2)實驗方法和過程大鼠腦膠質瘤細胞株C6以4000/孔的密度鋪于96孔板，每孔100ul，12h后使用。各組分以DMSO溶解為100mg/mL儲存液，保存于-20℃待用。鋪板后12h，觀察細胞匯合率約為40％，加藥，濃度均為100μg/mL，每個組分3個復孔。每板細胞設立二個對照組(培養基+細胞；含0.1％DMSO培養基+細胞)，3個空白孔(只有培養基)。加入藥物24小時后，加入20μl四甲基偶氮唑鹽化學名為3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(3-(4,5-dimethyl-2thiazolyl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide，MTT)，繼續培養4小時。完全棄去上清液，加入100μl DMSO，混勻使MTT完全溶解，去氣泡。490nm測定OD值。3)實驗結果表表2結果發現：本專利技術優選的技術方案為：維吾爾藥香青蘭經甲醇超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚：丙酮，100:8，體積比)洗脫，繼用石油醚-丙酮混合溶劑(石油醚：丙酮，100:10，體積比)洗脫，石油醚:丙酮＝100:10洗脫液經回收有機溶劑，干燥，得到高活性提取物，即為該抗腫瘤的活性提取物。該活性提取物從未見文獻報道，其TLC分析表征如圖1所示。4、抗腫瘤有效提取物的提取方法研究1)提取溶劑的種類研究分別用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、乙醇水混合溶劑等有機溶劑提取，并測試提取物對C6細胞的抗腫瘤活性，結果如下：表3研究結果表明：提取用有機溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、乙醇水混合溶劑。2)提取溶劑的用量研究分別用1、2、5、10、20、30、40、50倍(重量/體積比)有機溶劑提取，并測試提取物對C6細胞的抗腫瘤活性，結果如下：表4提取物提取用有機溶劑用量為藥材重量的2-50倍(重量/體積比)。3)干燥方法的研究分別用真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風干燥、離心干燥、旋蒸干燥法等方法，對得到的抗腫瘤活性提取物進行干燥，以含水量、TLC、活性測試為指標，發現真空干燥法、冷凍干燥法、鼓風干燥、離心干燥、旋蒸干燥法適用于對C6細胞的抗腫瘤活性提取物進行干燥，其中，最優為真空干燥法、冷凍干燥法。表5樣品20g真空干燥法冷凍干燥法鼓風干燥法離心干燥法旋蒸干燥法含水量(％)108.89.75.56.5抑制率(％)71.272.360.869.766.2優選地，香青蘭抗腫瘤提取物的制備方法為：維吾爾藥香青蘭經超聲提取，提取液濃本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種維吾爾藥香青蘭提取物，其特征為，維吾爾藥香青蘭經溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比為100:0?100:8的石油醚?丙酮混合溶劑洗脫，繼用體積比為100:10的石油醚?丙酮混合溶劑洗脫，用體積比為100:10的石油醚?丙酮混合溶劑洗脫的洗脫液經回收溶劑，干燥即為該活性提取物。
【技術特征摘要】
1.一種維吾爾藥香青蘭提取物，其特征為，維吾爾藥香青蘭經溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比為100:0-100:8的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，繼用體積比為100:10的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫，用體積比為100:10的石油醚-丙酮混合溶劑洗脫的洗脫液經回收溶劑，干燥即為該活性提取物。2.如權利要求1所述的維吾爾藥香青蘭提取物，其特征為，提取用溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑或乙醇水混合溶劑，優選甲醇或95%乙醇。3.如權利要求1所述的維吾爾藥香青蘭提取物，其特征為，先用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:8，體積比）洗脫，繼用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10，體積比）洗脫，用石油醚-丙酮混合溶劑（石油醚：丙酮，100:10，體積比）洗脫的洗脫液經回收溶劑，干燥即為該提取物。4.如權利要求1述維吾爾藥香青蘭提取物，其特征為，先用體積比100:8石油醚-丙...
【專利技術屬性】
技術研發人員：王金輝，黃健，吳文熙，
申請(專利權)人：沈陽藥科大學，
類型：發明
國別省市：遼寧;21
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