microRNA 100的應用制造技術

本發明專利技術公開了一種microRNA?100的應用。本發明專利技術公開抑制microRNA?100活性或表達的物質在制備抑制腫瘤發展的產品中的應用。本發明專利技術的實驗證明，microRNA?100過表達可抑制大腸癌細胞的生長、增殖，但卻能顯著促進其垂直及水平遷移擴散能力，高度提示其在大腸癌發生發展中發揮重要功能，既能發揮抑癌基因的功能抑制腫瘤增殖、生長，又有促進腫瘤發展的功能促進腫瘤轉移。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種microRNA的應用；特別涉及microRNA 100的應用，屬于生物

技術介紹
micro RNAs(miRNAs)，是一種大小約21-23個堿基的單鏈小分子RNA，通過和靶基因mRNA堿基配對引導沉默復合體(RISC)降解mRNA或抑制mRNA的翻譯，通常在轉錄后水平調控蛋白表達(最近發現micro RNA也能在轉錄水平調控基因表達)。隨著對micro RNA研究的不斷深入，越來越多的證據表明micro RNA分子在腫瘤發生發展的各個環節中發揮著原癌基因或抑癌基因的作用。MiR-100(microRNA100，GenBank number:NR_029515.1，mir編號：MI0000102)定位于11號染色體，與miR-99a、miR-99b同屬于miR-99家族。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是提供預防和/或治療大腸癌的一種microRNA。為了解決以上技術問題，本專利技術提供一種抑制microRNA 100活性或表達的物質在制備抑制腫瘤發展的產品中的應用；所述microRNA 100的序列如SEQ ID No.1所示。為了解決以上技術問題，本專利技術還提供如下1)-7)任一所述的物質在制備具有促進腫瘤發展功能的產品中的應用：1)microRNA 100；2)microRNA 100的編碼基因；3)含有microRNA 100的編碼基因的重組載體；4)含有microRNA 100的編碼基因的表達盒；5)含有microRNA 100的編碼基因的轉基因細胞系；6)含有microRNA 100的編碼基因的重組菌；7)含有microRNA 100的編碼基因的重組病毒；所述microRNA 100的序列如SEQ ID No.1所示。為了解決以上技術問題，本專利技術還提供如下1)-7)任一所述的物質作為靶點在篩選和/或制備具有抑制腫瘤發展功能的產品中的應用：1)microRNA 100；2)microRNA 100的編碼基因；3)含有microRNA 100的編碼基因的重組載體；4)含有microRNA 100的編碼基因的表達盒；5)含有microRNA 100的編碼基因的轉基因細胞系；6)含有microRNA 100的編碼基因的重組菌；7)含有microRNA 100的編碼基因的重組病毒；所述microRNA 100的序列如SEQ ID No.1所示。上述任一所述的應用中，所述腫瘤發展體現為腫瘤細胞遷移和/或擴散；所述腫瘤細胞遷移和/或擴散具體可為A和/或B：A、腫瘤細胞的水平遷移和/或擴散；B、腫瘤細胞的垂直遷移和/或擴散。為了解決以上技術問題，本專利技術還提供如下1)-7)任一所述的物質在制備抑制腫瘤細胞的生長和/或增殖的產品中的應用：1)microRNA 100；2)microRNA 100的編碼基因；3)含有microRNA 100的編碼基因的重組載體；4)含有microRNA 100的編碼基因的表達盒；5)含有microRNA 100的編碼基因的轉基因細胞系；6)含有microRNA 100的編碼基因的重組菌；7)含有microRNA 100的編碼基因的重組病毒；所述microRNA 100的序列如SEQ ID No.1所示。上述任一所述的應用中，所述腫瘤為大腸癌；所述大腸癌的癌細胞可為HCT-8細胞。本專利技術的實驗證明，microRNA 100過表達后抑制大腸癌細胞的生長和/增殖，但可顯著增強其遷移能力，在大腸癌轉移過程中起重要作用。microRNA 100在大腸癌的預防和/或治療領域具有重要應用。附圖說明圖1為HCT-8high細胞系和HCT-8(NC)細胞系的熒光顯微鏡觀察結果。圖2為細胞生長曲線。圖3為microRNA 100對HCT-8細胞遷移能力的影響。圖4為microRNA 100對HCT-8劃痕愈合能力的影響。具體實施方式下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。大腸癌細胞系HCT-8為ATCC產品,產品目錄號為CCL-244。GFP-MIR-100慢病毒表達系統為上海吉凱基因化學技術有限公司產品，貨號為PMUL209000102，其中外源基因為microRNA 100(GenBank號為NR_029515.1，序列如SEQ ID No.1所示)，該慢病毒表達系統為能表達microRNA 100的慢病毒顆粒。NC慢病毒表達系統(即為空載的GV209-EGFP)為上海吉凱基因化學技術有限公司產品，其與GFP-MIR-100慢病毒表達系統的區別僅在于沒有外源基因microRNA 100。實施例1、穩定高表達microRNA 100的轉移性大腸癌細胞系的獲得一、大腸癌細胞系的獲得(一)將大腸癌細胞系HCT-8在含有體積百分含量10％的胎牛血清(Hyclone)和體積百分含量1％的青鏈霉素溶液(Invitrogen，貨號10378-016)的RPMI-1640培養基(Invitrogen，11875-093)中，37℃，5％CO2的細胞培養箱中培養，根據細胞生長情況，每天或者隔天更換新鮮培養基，在細胞濃度約為培養瓶培養面積80％-90％時進行傳代。(二)倒掉培養基，加入37℃PBS輕輕洗滌細胞，吸出PBS，加入胰蛋白酶(25cm2培養瓶加500微升胰酶，75cm2培養瓶和10cm直徑培養皿加入1毫升胰酶)，在顯微鏡下觀察消化過程，直至HCT-8細胞變圓、細胞間連接斷開。(三)加入十倍于胰蛋白酶體積的PBS，用一次性吸管將HCT-8細胞輕輕吹打，制成HCT-8細胞懸液。(四)收集HCT-8細胞懸液于離心管中，離心(1000轉/分鐘，5分鐘)。(五)用新鮮培養基(含有體積百分含量10％的胎牛血清(Hyclone)和體積百分含量1％的青鏈霉素溶液(Invitrogen，貨號10378-016)的RPMI-1640培養基)重懸細胞，取1/2移入新的培養瓶或培養皿進行培養，得到傳代后的HCT-8細胞。二、細胞轉染 將GFP-MIR-100慢病毒表達系統進行細胞轉染：(一)分別將生長良好的步驟一得到的傳代后HCT-8細胞按照每孔100ul，每孔共5*103個HCT-8細胞的量于轉染前一天接種到96孔板中(正常培養，37℃，5％CO2培養箱)，轉染時細胞密度約30％。(二)每孔中棄去原培養液，加入90ul ENI.S(Enhanced Infection Solution，促轉染溶液，上海吉凱基因化學技術有限公司產品，產品目錄號為REVG0002)、10ul polybrene(聚凝胺，上海吉凱基因化學技術有限公司產品，產品目錄號為REVG0001)及1ul慢病毒試劑(GFP-MIR-100慢病毒表達系統，1*108U/mL)，溫和混勻。(三)37℃培養12小時后，換正常培養基(含有體積百分含量10％的胎牛血清(Hyclone)和體積百分含量1％的青鏈霉素溶液(Invitrogen產品，貨號為10378-016)的RPMI-1640培養基)終止轉染。(四)37℃培養72小時后，得到HCT-8high細胞系。采用上述同樣的方法將NC慢病毒表達系統轉染HCT-8細胞，本文檔來自技高網...

【技術保護點】
抑制microRNA?100活性或表達的物質在制備抑制腫瘤發展的產品中的應用。

【技術特征摘要】
1.抑制microRNA 100活性或表達的物質在制備抑制腫瘤發展的產品中的應用。2.如下1)-7)任一所述的物質在制備具有促進腫瘤發展功能的產品中的應用：1)microRNA 100；2)microRNA 100的編碼基因；3)含有microRNA 100的編碼基因的重組載體；4)含有microRNA 100的編碼基因的表達盒；5)含有microRNA 100的編碼基因的轉基因細胞系；6)含有microRNA 100的編碼基因的重組菌；7)含有microRNA 100的編碼基因的重組病毒。3.如下1)-7)任一所述的物質作為靶點在篩選和/或制備具有抑制腫瘤發展功能的產品中的應用：1)microRNA 100；2)microRNA 100的編碼基因；3)含有microRNA 100的編碼基因的重組載體；4)含有microRNA 100的編碼基因的...

【專利技術屬性】
技術研發人員：馬潔，袁偉，張善信，徐昌青，唐萬燕，
申請(專利權)人：中國醫學科學院腫瘤醫院，
類型：發明
國別省市：北京;11