一種快速測定飼料用植酸酶酶活力的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種快速測定飼料用植酸酶酶活力的方法。該測定飼料用植酸酶酶活力的方法，包括如下步驟：將用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩加入到含有待測飼料用植酸酶的液體中，獲得酶解反應(yīng)液；將所述酶解反應(yīng)液進(jìn)行酶解反應(yīng)，測定所述酶解反應(yīng)產(chǎn)生的游離無機(jī)磷的含量，得到所述待測飼料用植酸酶的酶活力；以干重計(jì)，所述用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩中淀粉的質(zhì)量百分含量為≤0.01％。該方法既可以快速檢測飼料用植酸酶在緩沖溶液中的酶活力，又可以快速檢測飼料用植酸酶在離體動物消化液中的酶活力。飼料生產(chǎn)企業(yè)和養(yǎng)殖戶可以參照本發(fā)明專利技術(shù)的方法對植酸酶的酶活力進(jìn)行分析和比較，適用于飼料用植酸酶的研究、生產(chǎn)和應(yīng)用。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及飼料領(lǐng)域中一種快速測定飼料用植酸酶酶活力的方法。
技術(shù)介紹
植酸酶是目前飼料工業(yè)中應(yīng)用最廣的單體酶，也是一種很成熟的飼料酶，約占整個(gè)飼料酶產(chǎn)值的30％左右。植酸酶可水解飼料中的植酸，使其釋放出可利用的磷，從而減少單胃動物飼料中無機(jī)磷的使用量，也可以減少動物糞便中的磷對環(huán)境的污染。因此無論從社會效益和經(jīng)濟(jì)效益來看，植酸酶都是一種很好的飼料添加劑，也是一種極有發(fā)展前途的飼料用酶。隨著植酸酶在飼料中的廣泛應(yīng)用，對植酸酶酶活力評價(jià)方法的需求也越來越迫切。長期以來，植酸酶酶活力的分析測定一直是飼料工業(yè)領(lǐng)域中很有爭議的話題，現(xiàn)有分析方法所提供的分析數(shù)據(jù)的實(shí)用性和重復(fù)性都不理想。目前，植酸酶酶活力的評價(jià)主要以植酸鈉為底物，所用植酸鈉純度高而且易溶于水，但是飼料成分相對比較復(fù)雜，所含植酸鹽基本上都是不溶于水的化合物，而且這些化合物通常與飼料原料中的其它成分(主要是蛋白、纖維和金屬離子)相互交聯(lián)在一起，組成結(jié)構(gòu)復(fù)雜的鰲合物，因此純化的植酸鈉不能模擬植酸酶在體內(nèi)作用時(shí)所面對的復(fù)雜底物成分。動物飼養(yǎng)試驗(yàn)雖然直觀，可靠性也比較好，但是試驗(yàn)的時(shí)間太長(至少需要2個(gè)月)，成本很高，在實(shí)際生產(chǎn)過程中很難推廣，與科研過程中的快速分析要求相差甚遠(yuǎn)。另外，植酸酶還有很多同工酶，它們對酸堿環(huán)境的適應(yīng)性、對溫度的耐受性以及對動物消化道環(huán)境的抗逆性都有差異，用目前標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室分析方法是很難區(qū)別的，而實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用卻很需要這些數(shù)據(jù)。因此，探索并建立一種更為科學(xué)、客觀和簡便評價(jià)植酸酶酶活力的體外檢測方法是迫切需要的。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)所要解決的技術(shù)問題是如何快速、更符合實(shí)際地測定飼料用植酸酶的酶活力。為解決上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)首先提供了一種測定飼料用植酸酶酶活力的方法。本專利技術(shù)所提供的一種測定飼料用植酸酶酶活力的方法，包括如下步驟：將用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩加入到含有待測飼料用植酸酶的液體中，獲得酶解反應(yīng)液；將所述酶解反應(yīng)液進(jìn)行酶解反應(yīng)，測定所述酶解反應(yīng)產(chǎn)生的游離無機(jī)磷的含量，得到所述待測飼料用植酸酶的酶活力；以干重計(jì)，所述用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩中淀粉的質(zhì)量百分含量為≤0.01％(如0.01％)。上述方法中，所述含有待測飼料用植酸酶的液體可為含有待測飼料用植酸酶的緩
沖溶液或含有待測飼料用植酸酶的離體動物消化液。所述含有待測飼料用植酸酶的緩沖溶液可用所述待測飼料用植酸酶和醋酸-醋酸鈉緩沖溶液配制，所述含有待測飼料用植酸酶的離體動物消化液可用所述待測飼料用植酸酶和所述離體動物消化液配制。所述離體動物消化液具體可為離體動物胃液或離體動物腸液，所述離體動物胃液具體可為離體豬胃液，所述離體動物腸液具體可為離體豬小腸液或離體雞小腸液。上述方法中，所述酶解反應(yīng)液中，所述植酸酶的濃度可為0.196-0.500mg/mL，具體可為0.196mg/mL或0.500mg/mL；所述麥麩的濃度可為19.6-25.0mg/mL，具體可為19.6mg/mL或25.0mg/mL；所述植酸酶與所述麥麩的質(zhì)量比可為1：(50-100)，具體可為1:100或1:50。上述方法中，所述酶解反應(yīng)的反應(yīng)溫度可為37-41.5℃，具體可為37℃。上述方法中，所述酶解反應(yīng)液的pH值可為2.4-5.8，具體可為5.3-5.8、2.4-5.5、2.4、5.3、5.5或5.8；所述酶解反應(yīng)時(shí)間可為10-100min，具體可為10-90min、90-100min、10min、20min、30min、40min、50min、60min、70min、80min、90min或100min。上述方法中，所述無機(jī)磷可為磷酸。上述方法中，所述用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩可按照下述用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩的制備方法制備。為解決上述技術(shù)問題，本專利技術(shù)還提供了上述用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩的制備方法。本專利技術(shù)所提供的用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩的制備方法，包括如下步驟：將麥麩進(jìn)行糊化反應(yīng)，獲得糊化后的麥麩；向所述糊化后的麥麩中加入淀粉酶得到淀粉酶反應(yīng)體系，進(jìn)行淀粉酶酶解反應(yīng)，獲得淀粉酶酶解后的麥麩；向所述淀粉酶酶解后的麥麩中加入糖化酶得到糖化酶反應(yīng)體系，進(jìn)行糖化酶酶解反應(yīng)，獲得糖化酶酶解后的麥麩；將所述糖化酶酶解后的麥麩進(jìn)行清洗，得到所述用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩。上述用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩的制備方法中，所述糊化反應(yīng)可為在95-100℃反應(yīng)10-15min，具體可為在98℃反應(yīng)12min。所述淀粉酶反應(yīng)體系中，所述淀粉酶可為α-淀粉酶；所述α-淀粉酶和所述糊化后的麥麩的配比可為40000Uα-淀粉酶：(8.74-12)kg以干重計(jì)的所述糊化后的麥麩，所述α-淀粉酶和所述糊化后的麥麩的配比具體可為40000Uα-淀粉酶：8.74kg以干重計(jì)的所述糊化后的麥麩；所述淀粉酶酶解反應(yīng)可為在65-70℃反應(yīng)25-30min，具體可為在65℃反應(yīng)30min。所述α-淀粉酶的一個(gè)酶活力單位是指在60℃和pH值為6.0的條件下，每小時(shí)水
解可溶性淀粉產(chǎn)生出1μmol麥芽糖所需要的α-淀粉酶的量。所述α-淀粉酶可為北京東華強(qiáng)盛生物工程有限公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為107658305。所述糖化酶反應(yīng)體系中，所述糖化酶和所述淀粉酶酶解后的麥麩的配比可為1600000U糖化酶：(8.74-12)kg以干重計(jì)的所述淀粉酶酶解后的麥麩，所述糖化酶和所述淀粉酶酶解后的麥麩的配比具體可為1600000U糖化酶：8.74kg以干重計(jì)的所述淀粉酶酶解后的麥麩；其中所述淀粉酶酶解后的麥麩的質(zhì)量以所述糊化后的麥麩的干重計(jì)；所述糖化酶酶解反應(yīng)可為在95-100℃反應(yīng)30-90min，具體可為在95℃反應(yīng)60min。所述糖化酶的一個(gè)酶活力單位是指在40℃和pH值為4.6的條件下，每小時(shí)水解可溶性淀粉產(chǎn)生1mg葡萄糖所需要的糖化酶的量。所述糖化酶可為北京東華強(qiáng)盛生物工程有限公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號為1003301。所述清洗用水進(jìn)行，所述清洗的次數(shù)可為3-4次，具體可為3次。上文中，所述麥麩為大麥麩。本專利技術(shù)所提供的上述方法在鑒別飼料用植酸酶酶活力中的應(yīng)用也屬于本專利技術(shù)的保護(hù)范圍。實(shí)驗(yàn)證明，本專利技術(shù)的測定飼料用植酸酶酶活力的方法能夠直觀、簡便，客觀全面地測定飼料用植酸酶的酶活力。本專利技術(shù)的測定飼料用植酸酶酶活力的方法，以淀粉含量≤0.01％的麥麩為底物，既可以快速檢測飼料用植酸酶在緩沖溶液中的酶活力，又可以快速檢測飼料用植酸酶在離體動物消化液中的酶活力。飼料生產(chǎn)企業(yè)和養(yǎng)殖戶可以參照本專利技術(shù)的方法對植酸酶的酶活力進(jìn)行分析和比較，適用于飼料用植酸酶的研究、生產(chǎn)和應(yīng)用。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式對本專利技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡明本專利技術(shù)，而不是為了限制本專利技術(shù)的范圍。下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。下述實(shí)施例中的植酸酶A為鞏義市益康生物科技有限公司的產(chǎn)品(5000型)，植酸酶B為河南集美化工產(chǎn)品有限公司的產(chǎn)品(PW5型)，植酸酶C為江蘇奕農(nóng)生物工程有限公司的產(chǎn)品(植酸酶5000)，植酸酶D為江蘇遠(yuǎn)方中匯生物科技有限公司的產(chǎn)品(植酸酶5000)，植酸酶X為上海紀(jì)亭實(shí)業(yè)有限公司本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種測定飼料用植酸酶酶活力的方法，包括如下步驟：將用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩加入到含有待測飼料用植酸酶的液體中，獲得酶解反應(yīng)液；將所述酶解反應(yīng)液進(jìn)行酶解反應(yīng)，測定所述酶解反應(yīng)產(chǎn)生的游離無機(jī)磷的含量，得到所述待測飼料用植酸酶的酶活力；以干重計(jì)，所述用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩中淀粉的質(zhì)量百分含量為≤0.01％。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種測定飼料用植酸酶酶活力的方法，包括如下步驟：將用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩加入到含有待測飼料用植酸酶的液體中，獲得酶解反應(yīng)液；將所述酶解反應(yīng)液進(jìn)行酶解反應(yīng)，測定所述酶解反應(yīng)產(chǎn)生的游離無機(jī)磷的含量，得到所述待測飼料用植酸酶的酶活力；以干重計(jì)，所述用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩中淀粉的質(zhì)量百分含量為≤0.01％。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶解反應(yīng)的反應(yīng)溫度為37-41.5℃。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述酶解反應(yīng)液的pH值為2.4-5.8。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述用于測定飼料用植酸酶酶活力的麥麩的制備方法包括將麥麩進(jìn)行糊化反應(yīng)，獲得糊化后的麥麩；向所述糊化后的麥麩中加入淀粉酶得到淀粉酶反應(yīng)體系，進(jìn)行淀粉酶酶解反應(yīng)，獲得淀...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：蔣慧，
申請(專利權(quán))人：北京晟亞育達(dá)生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：北京;11