本發明專利技術屬醫藥技術領域，具體涉及一種維吾爾藥沙棘果抗腫瘤提取物及其組合物的醫藥用途和制備方法以及它在制備預防及治療乳腺癌、肺癌、胃癌、結腸癌、胰腺癌、宮頸癌、腦膠質瘤、肝癌等惡性腫瘤藥物中的應用。所述的提取物通過如下方法獲得：先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:10，體積比）洗脫，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:17，體積比）洗脫，洗脫得到的二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:10-100:17，體積比）洗脫液經回收有機溶劑，干燥，即為抗腫瘤活性提取物。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬醫藥
，具體涉及一種維吾爾藥沙棘果抗腫瘤提取物及其組合物的醫藥用途和制備方法以及它在制備預防及治療肝癌、肺癌、胃癌、結腸癌、胰腺癌、乳腺癌、宮頸癌、腦膠質瘤等惡性腫瘤藥物中的應用。
技術介紹
沙棘果為胡頹子科沙棘屬植物沙棘(Hippophae rhamnoides L.)的果實，又名醋柳果，酸刺果。沙棘果是一種小漿果植物，落葉灌木或小喬木。產河北、內蒙古、山西、陜西、甘肅、青海、四川西部。落葉灌木或喬木，高l-5米，棘刺較多，粗壯，頂生或側生；嫩枝褐綠色，老枝灰黑色，粗糙；芽大，金黃色或銹色。單葉通常近對生，與枝條著生相似，長30-80毫米，寬4-10(-13)毫米，兩端鈍形或基部近圓形，基部最寬，上面綠色，下面銀白色或淡白色，被鱗片，無星狀毛；葉柄極短，幾無或長1-1.5毫米。果實圓球形，直徑4-6毫米，橙黃色或桔紅色。沙棘具有很高的藥用價值。《中藥大字典》記載，沙棘具有活血散淤、化痰寬胸、補脾健胃、生津止渴、清熱止瀉之效，同時對多種疾病都有一定的治療作用。本專利技術通過系統地篩選研究，意外地發現松香提取物具有顯著抗腫瘤活性，即松香提取物對乳腺癌、宮頸癌、肝癌、肺癌、胃癌、結腸癌、胰腺癌、腦膠質瘤等惡性腫瘤的具有很好的預防及治療作用，可以應用于癌癥的預防和治療。但是，對其抗腫瘤的有效成分一直不清楚，本專利技術通過系統地篩選研究，發現了沙棘果的有效提取提取物，可以應用于腫瘤的預防和治療。
技術實現思路
本專利技術所解決的技術問題是提供一種提取物。本專利技術還提供了以提取物為主要活性成分的組合物。本專利技術同時提供了沙棘果提取物及其組合物的制備和在制備抗腫瘤藥物中的應用。本專利技術是通過如下技術方案實現的：維吾爾藥沙棘果經溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，用二氯甲烷：甲醇混合溶劑梯度洗脫(二氯甲烷：甲醇，具體比例見表1)，各二氯甲烷：甲醇比例混合溶劑洗脫液，濃縮，干燥后，利用體外抗腫瘤活性篩選體系測試其抗腫瘤活性，意外地發現先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑(二氯甲烷：甲醇，100:0-100:10，體積比)洗脫，繼
用二氯甲烷：甲醇混合溶劑(二氯甲烷：甲醇，100:12-100:17，體積比)洗脫，二氯甲烷：甲醇100:12-100:17洗脫液干燥后，具有顯著地抗腫瘤活性，優選地，先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑(二氯甲烷：甲醇，100:10，體積比)洗脫，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑(二氯甲烷：甲醇，100:17，體積比)洗脫，二氯甲烷：甲醇100:17洗脫液干燥即得抗腫瘤活性的化合物，可以通過以上方法，得到富集，從而與其他雜質類成分分離開。該活性提取物從未見文獻報道，其100:17洗脫液TLC分析表征如圖1，色譜條件：GF254硅膠板，展開系統：石油醚：乙酸乙酯：丙酮＝6:1:1，顯色方法：香草醛濃硫酸顯色。具體，發現過程如下：1、沙棘果經甲醇超聲提取物的制備取維吾爾藥沙棘果20g，經100ml甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取物SN0202A：6.5231g留樣：2.1201g，1.8936g。2、二氯甲烷：甲醇混合溶劑梯度洗脫方法和結果取維吾爾藥沙棘果20g，經100ml甲醇超聲提取15min，提取液濃縮后，得提取物SN0202A：6.5231g留樣：2.1201g 1.8936g。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅膠柱色譜，拌樣硅膠3.2g,空白硅膠10g,玻璃柱內徑2.0cm，二氯甲烷：甲醇系統梯度洗脫(二氯甲烷：甲醇，體積比，見表1)，柱體積25ml，每個梯度洗脫200ml，得到，各個濃度提取洗脫液的洗脫物，回收溶劑，即得，二氯甲烷：甲醇梯度洗脫提取物，TLC分析結果見圖2，圖3，色譜條件：GF254硅膠板，展開系統：石油醚：乙酸乙酯：丙酮＝6:1:1，顯色方法：香草醛濃硫酸顯色。色譜條件：GF254硅膠板，展開系統：石油醚：乙酸乙酯：丙酮＝3:1:1，顯色方法：香草醛濃硫酸顯色。表13、抗腫瘤活性篩選方法和結果1)實驗條件a)細胞株信息大鼠腦膠質瘤細胞株C6購于中國典型培養物保藏中心細胞庫。b)藥品及試劑樣品無菌條件下，DMSO溶解配置成母液濃度為100mg/mL，使用時用RPMI-1640培養液稀釋至所需濃度(DMSO≤1‰)。RPMI Medium 1640培養基干粉購于美國GIBCO公司。胎牛血清購于北京元亨圣馬生物技術研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴鹽(MTT)。c)儀器CO2培養箱(SANYO，日本)垂直層流潔凈工作臺(上海上凈凈化設備有限公司)倒置生物顯微鏡(重慶光電儀器有限公司)低/高速臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)電子天平(奧豪斯儀器有限公司)酶標儀(伯樂生命醫學產品有限公司)立式壓力蒸汽滅菌器(上海申安醫療器械廠)鼓風干燥箱(上海躍進醫療器械廠)PH計(SARTORIUS，德國)2)實驗方法和過程大鼠腦膠質瘤細胞株C6以4000/孔的密度鋪于96孔板，每孔100ul，12h后使用。各組分以DMSO溶解為100mg/mL儲存液，保存于-20℃待用。鋪板后12h，觀察細胞匯合率約為40％，加藥，濃度均為100μg/mL，每個組分3個復孔。每板細胞設立二個對照組(培養基+細胞；含0.1％DMSO培養基+細胞)，3個空白孔(只有培養基)。加入藥物24小時后，加入20μl
四甲基偶氮唑鹽化學名為3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(3-(4,5-dimethyl-2thiazolyl)-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide，MTT)，繼續培養4小時。完全棄去上清液，加入100μl DMSO，混勻使MTT完全溶解，去氣泡。490nm測定OD值。3)實驗結果表2結果發現：維吾爾藥沙棘果經溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑(二氯甲烷：甲醇，100:10，體積比)洗脫，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑(二氯甲烷：甲醇，100:17，體積比)洗脫，二氯甲烷：甲醇100:17洗脫液經回收有機溶劑，干燥，得到高活性提取物，即為該抗腫瘤的提取物。優選地，先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑(二氯甲烷：甲醇，100:10，體積比)洗脫，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑(二氯甲烷：甲醇，100:17，體積比)洗脫，二氯甲烷：甲醇100:17洗脫液干燥即得抗腫瘤活性的化合物，可以通過以上方法，得到富集，從而與其他雜質類成分分離開。該活性提取物從未見文獻報道，其100:17洗脫液TLC分析表征如圖1。4、抗腫瘤有效提取物的提取方法研究1)提取溶劑的種類研究分別用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、乙醇水混合溶劑等有機溶劑提取，并測試提取物的對C6細胞的抗腫瘤活性，結果如下：表3研究結果表明：提取用有機溶劑可以為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑、乙醇水混合溶劑。2)提取溶劑的用量研究分別用1、2、5、10、20、30、40、50倍(重量/體積比)有機溶劑提取，并測試提取物對C6細胞的的抗腫瘤活性，結果如下：表4提取物提取用有機溶劑用量為藥材重量的2-50倍(重量/體積比)。3)干燥方法的研究分別用真空干燥法、冷凍干燥法、本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種維吾爾藥沙棘果提取物，其特征為，維吾爾藥沙棘果經溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比為100:0?100:10的二氯甲烷：甲醇混合溶劑洗脫，繼用體積比100:12?100:17的二氯甲烷：甲醇混合溶劑洗脫，用體積比為100:12?100:17的二氯甲烷：甲醇混合溶劑洗脫的洗脫液經回收溶劑，干燥即為該提取物。
【技術特征摘要】
1. 一種維吾爾藥沙棘果提取物，其特征為，維吾爾藥沙棘果經溶劑超聲提取，提取液濃縮后，用硅膠柱分離，上樣后的硅膠柱，先用體積比為100:0-100:10的二氯甲烷：甲醇混合溶劑洗脫，繼用體積比100:12-100:17的二氯甲烷：甲醇混合溶劑洗脫，用體積比為100:12-100:17的二氯甲烷：甲醇混合溶劑洗脫的洗脫液經回收溶劑，干燥即為該提取物。2. 如權利要求1所述的維吾爾藥沙棘果提取物，其特征為，提取用溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、甲醇水混合溶劑或乙醇水混合溶劑，優選甲醇或95%乙醇。3. 如權利要求1所述的維吾爾藥沙棘果提取物，其特征為，先用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:10，體積比）洗脫，繼用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:17，體積比）洗脫，用二氯甲烷：甲醇混合溶劑（二氯甲烷：甲醇，100:17，體積比）洗脫的洗脫液經回收溶劑，干燥即為該提取物。4. 如權利要求1所述的維吾爾藥沙棘果提取物，其特征為，先用體積比為100:10的二氯甲烷：甲醇混合溶劑2-50倍洗脫，繼用體積比100:17的二氯甲烷：甲醇混合溶劑2-50倍洗脫，優選先用體積比為100:10的二氯甲烷：...
【專利技術屬性】
技術研發人員：王金輝，黃健，
申請(專利權)人：沈陽藥科大學，
類型：發明
國別省市：遼寧;21
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