本發(fā)明專利技術(shù)涉及三七總皂苷提取物的醫(yī)藥用途。本發(fā)明專利技術(shù)的試驗(yàn)例表明：三七總皂苷提取物具有促進(jìn)淋巴管生成作用；三七總皂苷提取物可以加快細(xì)胞遷移，與VEGF?C(淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，50ng/ml)效果類似；三七總皂苷提取物呈劑量依賴性刺激淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞成管，效果與VEGF?C類似，而VEGFR3抑制劑可以減少三七總皂苷提取物的促成管作用；三七總皂苷提取物可以促進(jìn)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF?C的蛋白表達(dá)。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及三七總皂苷提取物的新的醫(yī)藥用途。
技術(shù)介紹
現(xiàn)有技術(shù)公開了三七總皂苷是三七中的有效活性成分，主要成分為三七皂苷R1，人參皂苷Rb1,人參皂苷Rg1，人參皂苷Re及人參皂苷Rd等20多種皂苷活性物質(zhì)、17中微量元素、富含蛋白、維生素、多糖的混合物?，F(xiàn)有技術(shù)同時(shí)公開了三七總皂苷可降低機(jī)體的耗氧量，提高機(jī)體對缺氧的耐受性，可抑制由ADP引起的家兔血小板聚集，能擴(kuò)張腦血管，增加腦血流量，同時(shí)具有抗血栓和抗凝血作用，主要用于治療腦血管后遺癥，視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞及眼前房出血等血管系統(tǒng)疾患。腫瘤發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈逐年上升趨勢，手術(shù)切除病灶并進(jìn)行哨兵淋巴結(jié)的清理是腫瘤的主要治療手段之一。以乳腺癌為例，進(jìn)行腋窩淋巴結(jié)清掃的患者，發(fā)生上肢淋巴水腫概率為19.9％，進(jìn)行放療處理患者上肢水腫發(fā)生率為21.4％，進(jìn)行前哨淋巴結(jié)活檢患者，發(fā)生上肢水腫率為5.6％。在上肢水腫發(fā)生的同時(shí)，伴隨不同程度的脂質(zhì)代謝異常及免疫異常。臨床上，原發(fā)性淋巴管形態(tài)和功能異?？蓪?dǎo)致下肢、上肢、陰囊、面部等部位出現(xiàn)嚴(yán)重的畸形，致殘率、致死率。因此，如何盡快恢復(fù)淋巴管的形態(tài)和功能，促進(jìn)局部組織液的回流及脂質(zhì)代謝具有重要臨床意義及實(shí)用價(jià)值。目前普遍采用的治療方法為以切除病變區(qū)域富余脂肪為主的減容手術(shù)、淋巴管與靜脈吻合的淋巴管重建手術(shù)以及移植含有淋巴管(結(jié))的皮瓣進(jìn)行治療。手術(shù)創(chuàng)傷較大，適用于嚴(yán)重淋巴缺陷患者。但對病情相對較輕及早期患者尚無藥物可干預(yù)。一些臨床前實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)促進(jìn)淋巴管生成的治療有助于減輕淋巴水腫。很多細(xì)胞因子可以促進(jìn)淋巴管生成，但是血管生長因子VEGF-C是已知的最重要，也是最特別的淋巴管生長因子。VEGF-C與淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的VEGF受體3(VEGFR-3)結(jié)合主要刺激淋巴管生成。有研究發(fā)現(xiàn)VEGF-C缺乏的小鼠無法生成有功能的淋巴管系統(tǒng)，過表達(dá)VEGF-C有效的促進(jìn)淋巴管生成和減輕動物模型的淋巴水腫，因此VEGF-C是一種非常有價(jià)值的治療淋巴管生成和淋巴水腫的靶點(diǎn)，而有刺激VEGF-C表達(dá)作用的藥物有助于淋巴管生成和淋巴水腫的治療。淋巴管生成能力檢測目前體外實(shí)驗(yàn)主要通過淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞遷移(細(xì)胞學(xué)體外劃痕實(shí)驗(yàn))和成管功能來體現(xiàn)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)所要解決的技術(shù)問題是提出三七總皂苷提取物的醫(yī)藥新用途，尤其是在促進(jìn)淋巴管生長中的新用途。石氏傷科認(rèn)為局部淋巴形態(tài)和功能障礙屬“痰瘀”范疇，宜采用益氣化瘀的中藥進(jìn)行治療。專利技術(shù)人在進(jìn)行諸多中藥單體療效篩查后，發(fā)現(xiàn)三七總皂苷提取物具有促進(jìn)淋巴管生長作用，能有效改善局部“瘀滯”狀態(tài)。本專利技術(shù)所述三七總皂苷提取物，有效活性成分至少包括三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd五種皂苷，五種皂苷的總含量不低于60％。隨后的試驗(yàn)例中：本專利技術(shù)進(jìn)行了動物試驗(yàn)，結(jié)果顯示三七總皂苷提取物具有促進(jìn)淋巴管生成作用；本專利技術(shù)進(jìn)行了細(xì)胞學(xué)體外劃痕實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)三七總皂苷提取物可以加快細(xì)胞遷移，與VEGF-C(淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，50ng/ml)效果類似；本專利技術(shù)進(jìn)行了細(xì)胞學(xué)體外成管實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)三七總皂苷提取物呈劑量依賴性刺激淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞成管，效果與VEGF-C類似，而VEGFR3抑制劑可以減少三七總皂苷提取物的促成管作用；本專利技術(shù)進(jìn)行了細(xì)胞學(xué)體外實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)三七總皂苷提取物可以促進(jìn)淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF-C的蛋白表達(dá)?；陔S后的試驗(yàn)例，三七總皂苷提取物可改善淋巴管功能障礙；可促進(jìn)淋巴管新生，可治療因淋巴管結(jié)構(gòu)形態(tài)損傷所造成的的疾患，如腫瘤術(shù)后淋巴結(jié)清掃所造成的水腫；可治療先天淋巴管發(fā)育不良所造成的水腫、脂質(zhì)代謝異常及免疫功能缺失；可治療各種病理狀態(tài)下，淋巴管形態(tài)及功能障礙所造成的疾患，如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者中，淋巴管滲漏、畸形，三七總皂苷提取物可促進(jìn)淋巴管生長及成熟，可有效改善患者病情；可用于治療各種生理、病理狀態(tài)下，因淋巴管回流功能障礙而致的各種疾患，如淋巴液淤積、脂肪沉積及慢性炎癥及纖維化等；可用于治療各種原發(fā)性、繼發(fā)性以淋巴管為主的淋巴系統(tǒng)疾患。附圖說明圖1A、圖1B和圖1C是對照組及不同劑量的三七總皂苷提取物(PNS)對斑馬魚胸導(dǎo)管(淋巴管)生成的作用效果圖。圖2是體外劃痕實(shí)驗(yàn)檢測三七總皂苷提取物(PNS)對淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞遷移活性的影響圖。圖3是體外成管實(shí)驗(yàn)檢測三七總皂苷提取物(PNS)對淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞成管活性的影響圖。圖4是Westernblot檢測三七總皂苷提取物(PNS)對淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞VEGF-C的蛋白表達(dá)圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本專利技術(shù)。這些實(shí)施例應(yīng)理解為僅用于說明本專利技術(shù)而不用于限制本專利技術(shù)的保護(hù)范圍。在閱讀了本專利技術(shù)記載的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本專利技術(shù)作各種改動或修改，這些等效變化和修改同樣落入本專利技術(shù)權(quán)利要求所限定的范圍。實(shí)施例1(利用熱浸法提取三七總皂苷提取物)將三七粉碎為20-40目的粗粉，在50％的乙醇中浸泡12h，在60℃提取3
次，每次提取時(shí)間約1h，收集濃縮后進(jìn)行真空干燥。得到的粗制品水溶液加至已處理好的大孔樹脂層析柱的上端進(jìn)行純化，大孔樹脂用量為原料量的2-3倍。洗脫劑為6倍量的蒸餾水，再用6倍的25％乙醇洗脫，最后用8倍的75％乙醇洗脫，收集洗脫液。回收乙醇，獲得的三七總皂苷提取物樣品用真空干燥。多次重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)，并對獲得的三七總皂苷提取物樣品進(jìn)行檢測。如表1所示，經(jīng)檢測，利用熱浸法提取的三七總皂苷提取物樣品中均包含三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd五種皂苷，五種皂苷的總含量均不低于60％。表1.三七總皂苷各樣品中各成分百分含量測定結(jié)果(單位：％)前述經(jīng)檢測的、五種皂苷的總含量均不低于60％的三七總皂苷提取物樣品1、2用于試驗(yàn)例1-4。試驗(yàn)例1(動物試驗(yàn))采用的是可在內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)eGFP基因及可在血管細(xì)胞表達(dá)DSRED基因的斑馬魚(fli1:egfp；gata1:dsred)，受精48小時(shí)后，將斑馬魚分為4組，每組10只置于12孔培養(yǎng)皿中(正常飲食及水環(huán)境，CAS No:88105-29-7,Lot No:110870-201002,purity>98.5,80mg/kg)，分別采用10ug/ml，50ug/ml，100ug/ml三七總皂苷提取物及0.2％DMSO作為對照組處理48小時(shí)后，采用激光共聚焦對淋巴管進(jìn)行觀察，發(fā)現(xiàn)三七總皂苷提取物對斑馬魚胸導(dǎo)管的形成呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系，其中10ug/ml劑量時(shí)對斑馬魚胸導(dǎo)管生成促進(jìn)作用最強(qiáng)，隨著濃度的增加，促進(jìn)作用呈下降趨勢。結(jié)果顯示三七總皂苷提取物具有促進(jìn)淋巴管生成作用(如圖1A、圖1B和圖1C所示)。試驗(yàn)例2(細(xì)胞學(xué)體外劃痕實(shí)驗(yàn))在12孔板培養(yǎng)小鼠淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞(2x105細(xì)胞/孔)。用一個(gè)黃色槍頭在單層培養(yǎng)的細(xì)胞中進(jìn)行劃痕，培養(yǎng)基被不同濃度的三七總皂苷提取物培養(yǎng)基(0，10，50，100μm)或VEGF-C(淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子，50ng/ml)取代。三七總皂苷提取物或VEGF-C處理24小時(shí)后，拍攝12孔板中傷口閉合的照片，并進(jìn)行分析，在擦傷區(qū)域的距離減少表明遷，細(xì)胞遷移距離＝0小時(shí)內(nèi)的劃痕寬度-24小時(shí)的劃痕寬度。發(fā)現(xiàn)三七總皂苷提取物可以加快細(xì)胞遷移，與VEGF-C效果類似(如圖2所示)。試驗(yàn)本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
三七總皂苷提取物在制備改善淋巴管功能障礙的藥物或保健品中的用途，前述三七總皂苷提取物含有三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd，且前述5種皂苷的總含量不低于60％。
【技術(shù)特征摘要】
1.三七總皂苷提取物在制備改善淋巴管功能障礙的藥物或保健品中的用途，前述三七總皂苷提取物含有三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd，且前述5種皂苷的總含量不低于60％。2.三七總皂苷提取物在制備治療因淋巴管結(jié)構(gòu)形態(tài)損傷所造成的疾患的藥物中的用途，前述三七總皂苷提取物含有三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd，且前述5種皂苷的總含量不低于60％。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用途，其特征是，因淋巴管結(jié)構(gòu)形態(tài)損傷所造成的疾患為腫瘤術(shù)后淋巴結(jié)清掃所造成的水腫。4.三七總皂苷提取物在制備治療先天淋巴管發(fā)育不良所造成的水腫、脂質(zhì)代謝異常及免疫功能缺失的藥物中的用途，前述三七總皂苷提取物含有三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd，且前述5種皂苷的總含量不低于60％。5...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：梁倩倩，施杞，王擁軍，李金龍，王瓊，徐浩，劉書芬，陳巖，李強(qiáng)，張利，王騰騰，趙永見，齊曉鳳，王怡茹，王曉濤，徐保平，
申請(專利權(quán))人：上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬龍華醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：上海;31
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