一種唇癌特異性檢測的試劑盒制造技術

本發(fā)明專利技術公開了一種特異性檢測唇癌的試劑盒。本發(fā)明專利技術提供的核酸適體，與人富含半脫氨酸分泌蛋白1具有較好的親和能力。利用本發(fā)明專利技術的核酸適體，可以捕獲唾液中的富含半脫氨酸分泌蛋白1蛋白，通過其含量的變化來檢測唇癌，將其制備成為相應的試劑盒，將用于唇癌的篩查。利用本發(fā)明專利技術的試劑盒，具有高靈敏、成本低的好處。

【技術實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術涉及一種用于檢測唇癌的試劑盒及其檢測方法。
技術介紹
唇癌是指發(fā)生于上下口唇的惡性腫瘤為口腔常見惡性腫瘤之一，在口腔癌中占第立位，占全身惡性腫瘤的0.1％～0.5％，占口腔惡性腫瘤的7.1％～15.0％，歐美國家唇癌患者較多，占口腔癌的20％～30％。一般下唇比上唇易受累，約90％～95％發(fā)生在下唇紅緣部，而且W下唇的外1/3處為多見。男性患者居多，男女之比為7:1。高發(fā)年齡為50～70歲。唇癌絕大多數(shù)為高分化之鱗狀細胞癌，多在良性費生物的病變基礎上發(fā)生，其生長速度較慢，預后較好，一般5年生存率為70％W上，本病的病因可能與局部長期受異物刺激，強烈的紫外線照射有關。口唇上皮角化、白斑、巧費、肉芽腫及裂口等長期不愈，亦可導致癌變。現(xiàn)有技術已知，唾液富含半脫氨酸分泌蛋白1濃度為10-40ng即可診斷為唇癌。因此，檢測半脫氨酸分泌蛋白1的濃度變得極為重要。核酸適體(Aptamer,又稱適配體,適配子)是能高親和性、高特異性的結合某種生物革El標的單鏈寡核酸分子(ssDNA或ssRNA)。核酸適體是通過指數(shù)富集配體系統(tǒng)進化技術(Systemat1c Evolut1on of L1gands by Exponent1al enr1chment,SELEX)從人工合成的DNA/RNA文庫中篩選得到的能夠高度特異性結合靶標分子的單鏈DNA/RNA。已報道核酸適體的靶標包括金屬離子、有機小分子、多肽、蛋白質(zhì)、細胞甚至組織等。核酸適體的分子識別功能與抗體類似，具有與抗體分子相當甚至更強的靶標識別能力，但與抗體相比具有很多優(yōu)良的特性，如分子量小，能批量生產(chǎn)，不易失活，無免疫原性、容易合成與標記、快速的穿透組織、良好的代謝動力學、不同批次之間產(chǎn)品不會存在差異和具有很好化學穩(wěn)定性，在生物檢測、疾病診斷治療等領域具有重要的應用前景。
技術實現(xiàn)思路
本專利技術的目的是提供一種特異結合CRISP1的核酸適體及其試劑盒。本專利技術提供的核酸適體，是序列表的序列1-15所示的單鏈DNA。所述核酸適體與CRISP1蛋白具有較好的親和能力。還可將所述核酸適體進行修飾或改造，得到所述核酸適體的衍生物。所述核酸適體的衍生物可為如下任意一種：a)將所述核酸適體刪除部分或增加部分互補的核苷酸，得到的與所述核酸適體具有相同功能的核酸適體的衍生物；b)將所述核酸適體進行核苷酸取代或部分修飾，得到的與所述核酸適體具有相同功能的核酸適體的衍生物；c)將所述核酸適體的骨架改造為硫代磷酸酯骨架，得到的與所述核酸適體具有相同功能的核酸適體的衍生物；d)將核酸適體改造為肽核酸，得到的與所述核酸適體具有相同功能的核酸適體的衍生物；e)將所述核酸適體連接上熒光、放射性和治療性物質(zhì)后，得到的與所述核酸適體具有相同功能的核酸適體的衍生物。所述核酸適體可用于制備檢測CRISP1的試劑盒。利用本專利技術的核酸適體，可以捕獲中唾液中的中的CRISP1，從而用于相關口腔癌篩查。利用本專利技術的核酸適體，具有高靈敏、成本低、易制備、易保存的優(yōu)點。本專利技術具有很高的應用價值。具體實施方式以下的實施例便于更好地理解本專利技術，但并不限定本專利技術。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。實施例1、CRISP1蛋白的獲得將Genbank：EAX04350所示的CRISP1基因通過本領域常規(guī)的真核表達方式進行表達，獲得了相應的目的多肽蛋白。實施例2核酸適體的篩選和制備設計兩端包含大約20個核苷酸、中間包括41個核苷酸的隨機核酸文庫如下：5‘-TGGCACCTACGATCTAAGGCA(N41)GGACTACCAATGCAACGTCAC-3’；N41代表41個隨機核苷酸。將單鏈DNA文庫擴增為雙鏈DNA,產(chǎn)物經(jīng)2％瓊脂糖凝膠電泳并切膠回收純化；以回收的雙鏈DNA為模板，體外轉錄出單鏈RNA隨機文庫，轉錄產(chǎn)物經(jīng)PAGE純化。75μg RNA文庫經(jīng)硝酸纖維素膜反篩去除與膜結合的RNA分子，然后與2ug
CRISP1蛋白，37℃孵育30min，反應液經(jīng)硝酸纖維素膜濾過，洗滌濾膜；然后將濾膜剪碎，置于洗脫緩沖液(6mol/L尿素，0.55mol/L醋酸銨，l.5mmol/LEDTA,0.15％SDS)中煮沸5min，離心，取上清，無水乙醇沉淀RNA，并重新溶解于20μ1DEPC水中；以RNA為模板RT-PCR擴增雙鏈DNA，體外轉錄出RNA文庫用于下一輪篩選；每輪篩選過程中RT-PCR得到雙鏈DNA文庫，以該雙鏈DNA為模板體外轉錄出RNA適配子庫，篩選共進行12輪。得到了15個適配子，其序列分別為SEQ ID NO:1-15所示。具體序列如下所示：CRISP1-1：TGGCACCTACGATCTAAGGCAATCCCATATATGTTCCACACACTCGCAACTTATCCGCTACAGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-2：TGGCACCTACGATCTAAGGCATTCCGCCATAAATAAGATTCACATCACGACATCGATCACACGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-3：TGGCACCTACGATCTAAGGCACTTAATCAACATATCTCTTCTGTATTCTCTCCACGCATACAGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-4：TGGCACCTACGATCTAAGGCAACGTCTCCAATCCGCACTTATAATTATGTTCTTACCTAAGAGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-5：TGGCACCTACGATCTAAGGCACGCTCATCACCATCTCCTACCTATATACATCACCTTCGCCTGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-6：TGGCACCTACGATCTAAGGCACATATCATCCTCCATACACGACCAACCACTCCGTCTTCACTGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-7：TGGCACCTACGATCTAAGGCAAACAAACACTCTCGCACATTACCTTATTTATCAAGAATATAGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-8：TGGCACCTACGATCTAAGGCACCGCTTATCTACACTAAATACAATTTCCTCCTCACCCTCCAGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-9：TGGCACCTACGATCTAAGGCACACGCCTCCAATATCAACTTAATAATACACCACTAATTTCTGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-10：TGGCACCTACGATCTAAGGCACACACGCCACTTATACAACAATCCAACCGCCTACCACTACTGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-11：TGGCACCTACGATCTAAGGCATAGCATCACTACTCGCTATTTCCTATAATCCTAGCCTTATAGGACTACCAATGCAACGTCACCRISP1-12：TGGCACCTACGATCTAAGGCACTAGAAACTCCAACACATACACACACAGACCCGCTC本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】
一種用于唇癌檢測的試劑盒，其含有能特異性與CRISP1蛋白特異性結合的核酸適體。

【技術特征摘要】
1.一種用于唇癌檢測的試劑盒，其含有能特異性與CRISP1蛋白特異性結合的核酸適體。2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：陳博，
申請(專利權)人：陳博，
類型：發(fā)明
國別省市：江西;36