從海洋低值貝類中分離純化得到的核苷類成分及其制備方法與應(yīng)用技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種從海洋低值貝類(四角蛤蜊、菲律賓蛤仔、文蛤、毛蚶、青蛤、竹蟶、西施舌等)中分離純化核苷類化學(xué)成分的方法，該方法包括(1)貝類軟體水提醇沉上清液的制備；(2)大孔吸附樹脂柱粗分離；(3)陽離子交換樹脂的分離純化。本發(fā)明專利技術(shù)提供的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，工藝設(shè)計合理，可操作性強(qiáng)，生產(chǎn)周期短，成本低，環(huán)保性強(qiáng)，制備得到的核苷類成分純度高，具有很好的保肝護(hù)肝功效，本發(fā)明專利技術(shù)可充分利用四角蛤蜊、菲律賓蛤仔、文蛤等低值貝類資源，具有重要的經(jīng)濟(jì)價值。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及一種海洋低值貝類，具體涉及一種從海洋低值貝類(四角蛤蜊、菲律賓蛤仔、文蛤、毛蚶、青蛤、竹蟶、西施舌等)中分離純化得到的核苷類化學(xué)成分及其制備方法。
技術(shù)介紹
江蘇沿海面積廣闊，在潮間帶具有豐富的海洋生物資源，尤其以低值貝類資源如四角蛤蜊、菲律賓蛤仔、文蛤等產(chǎn)量巨大。海洋貝類蛤蜊藥用歷史悠久，在古代文獻(xiàn)中多有其功效的記載，現(xiàn)代研究表明具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血糖、抗氧化等功效。核苷類成分不僅是構(gòu)成RNA、DNA的基本組成，也是生物氧化和能量代謝中的能源物質(zhì)和抗病毒、抗腫瘤藥物的中間體，特別是維持生物體的抗氧化，保持正常免疫功能，抗感染等方面具有重要的生理活性。目前關(guān)于低值貝類資源如四角蛤蜊、菲律賓蛤仔、文蛤等中的核苷類化學(xué)成分研究報道較少。現(xiàn)有技術(shù)中主要存在的問題是：分離過程步驟較為繁瑣，生產(chǎn)周期較長，生產(chǎn)成本較高，并且分離所用氯仿等萃取劑或洗脫劑，環(huán)保性差，且分離得到核苷類物質(zhì)的種類少，純度低，價值低。因此，為了充分利用四角蛤蜊、菲律賓蛤仔、文蛤等低值貝類資源，很有必要在現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)之上，深度開發(fā)研究其活性成分，開發(fā)其新的應(yīng)用價值。
技術(shù)實現(xiàn)思路
專利技術(shù)目的：本專利技術(shù)的目的是為了解決上述技術(shù)問題，提供一種操作簡便、綠色環(huán)保、綜合成本低、生產(chǎn)周期短的從海洋低值貝類中純化分離核苷類成分的方法。本專利技術(shù)另一個目的是提供從海洋低值貝類中純化分離核苷類成分的應(yīng)用。技術(shù)方案，為了實現(xiàn)以上目的，本專利技術(shù)采取的技術(shù)方案為：一種從海洋低值貝類中分離純化得到的核苷類成分，它包括肌苷、次黃嘌呤、黃嘌呤、鳥苷、胸腺嘧啶和2-脫氧鳥苷、腺嘌呤、鳥嘌呤、腺苷、2-脫氧肌苷、尿苷、胸苷、2-脫氧尿苷、胞嘧啶、胞苷、鳥苷酸、尿苷酸、肌苷酸、腺苷酸、胞苷酸。一種從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，包括以下步驟：(1)貝類軟體水提醇沉上清液的制備：取新鮮的貝類軟體，洗凈瀝干后，稱重，加水煎煮，濾過，合并濾液，濃縮，離心去沉淀，得上清液，加入乙醇，靜置，抽濾得上清液，上清液濃縮至無醇味，采用電滲析進(jìn)行脫鹽處理；(2)大孔吸附樹脂柱粗分離：將步驟(1)制備得到的貝類軟體水提醇沉上清液，上大孔吸附樹脂柱進(jìn)行層析，先用水進(jìn)行洗脫除雜，再用體積濃度為5％乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，得大孔吸附樹脂分離物；(3)陽離子交換樹脂的進(jìn)一步分離：將步驟(2)制備得到的大孔吸附樹脂分離物，上陽離子交換樹脂柱，先用水洗雜，再用體積濃度為3％的氨水和體積濃度30％乙醇混合溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，即得核苷類成分。作為優(yōu)選方案，以上所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，貝類軟體為四角蛤蜊、菲律賓蛤仔、文蛤、毛蚶、青蛤、竹蟶或西施舌。作為優(yōu)選方案，以上所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，步驟(1)加入3～10倍量水，加熱煎煮2～3次，每次20～60min。作為優(yōu)選方案，以上所述從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，步驟(1)電滲析方法為，電壓15-30V，上樣濃度為10-40g(固含)/L，脫鹽時間為1-4h。作為優(yōu)選方案，以上所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，步驟(2)中大孔吸附樹脂為型號為SP207型大孔吸附樹脂，上樣量是1-3倍柱體積，水洗倍數(shù)是2-6倍柱體積；乙醇洗脫液用量是5-20倍柱體積。作為優(yōu)選方案，以上所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，步驟(3)最大上樣量是10倍柱體積；水洗倍數(shù)是3-8倍柱體積；步驟(3)堿性乙醇的洗脫體積是3-8倍柱體積。作為優(yōu)選方案，以上所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，步驟(3)陽離子交換樹脂為型號001*7型強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂。作為優(yōu)選方案，以上所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，步驟(3)核苷類成分包括肌苷、次黃嘌呤、黃嘌呤、鳥苷、胸腺嘧啶和2-脫氧鳥苷、腺嘌呤、鳥嘌呤、腺苷、2-脫氧肌苷、尿苷、胸苷、2-脫氧尿苷、胞嘧啶、胞苷、鳥苷酸、尿苷酸、肌苷酸、腺苷酸、胞苷酸等。本專利技術(shù)制備得到的從海洋低值貝類中分離純化得到的核苷類成分在制備保肝、護(hù)肝、抗氧化的藥物或保健品中的應(yīng)用。有益效果：本專利技術(shù)制備得到的從海洋低值貝類中分離純化得到的核苷類成分含有純度高的肌苷、次黃嘌呤、黃嘌呤、鳥苷、胸腺嘧啶、2-脫氧鳥苷、腺嘌呤、鳥嘌呤、腺苷、2-脫氧肌苷、尿苷、胸苷、2-脫氧尿苷、胞嘧啶、胞苷、鳥苷酸、尿苷酸、肌苷酸、腺苷酸、胞苷酸等，實驗結(jié)果表明具有很好的保肝、護(hù)肝、抗氧化功效。本專利技術(shù)提供的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，工藝設(shè)計合理，可操作性強(qiáng)，生產(chǎn)周期短，成本低，環(huán)保性強(qiáng)，制備得到的核苷類成分純度高，可充分利用四角蛤蜊、菲律賓蛤仔、文蛤、青蛤等低值貝類資源，具有重要的經(jīng)濟(jì)價值。附圖說明圖1為核苷成分對CCl4致急性肝損傷模型小鼠血清ALT影響的柱狀圖。圖2為核苷成分對CCl4致急性肝損傷模型小鼠血清AST影響的柱狀圖。圖3為核苷成分對CCl4致急性肝損傷模型小鼠肝臟指數(shù)影響的柱狀圖。圖4為核苷成分對CCl4致急性肝損傷模型小鼠血漿中SOD影響的柱狀圖。圖5為核苷成分對CCl4致急性肝損傷模型小鼠肝臟中MDA影響的柱狀圖。具體實施方式實施例1一種從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，包括以下步驟：(1)四角蛤蜊醇沉上清液的制備：取新鮮的四角蛤蜊軟體，洗凈瀝干后，稱重，加3倍量水煎煮加熱回流2次，每次45min，濾過，合并濾液，濃縮，離心去沉淀，得上清液，加入乙醇使乙醇濃度為80％，靜置過夜，抽濾得上清液；上清液濃縮至無醇味，采用電滲析進(jìn)行脫鹽，電壓為30V，上樣濃度為30g(固含)/L，脫鹽時間為1.5h。(2)大孔吸附樹脂柱粗分離：取步驟(1)制備得到的四角蛤蜊軟體水提醇沉上清液1.6倍柱體積，上SP207型大孔吸附樹脂柱進(jìn)行層析，先用2-3倍柱體積水進(jìn)行洗雜，再用8-10倍柱體積的5％乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至一定體積，得大孔吸附樹脂分離物；(3)陽離子交換樹脂的進(jìn)一步分離：將10倍柱體積的大孔吸附樹脂分離物上001*7型強(qiáng)酸型陽離子交換樹脂，先用4～5倍柱體積水洗雜，再用4～5倍柱體積的3％氨水和30％乙醇混合液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，即得純度高的核苷類成分。(4)核苷類成分的含量測定：精密稱取肌苷標(biāo)準(zhǔn)品適量，加入甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。測定于260nm波長下的吸光度，以肌苷為對照品，計算總核苷的含量。另取核苷、核苷酸標(biāo)準(zhǔn)品適量，精密稱定，進(jìn)行HPLC分析，測定肌苷、次黃嘌呤、黃嘌呤鳥苷酸等主要成分的含量。具體色譜條件為：色譜柱：Waters XBridge C18(4.6×250mm,5μm)；柱溫：25℃；流動相：甲醇(A)-0.1％乙酸水(B)，梯度洗脫：0～8min，0-2％A；8～30min，2％-6％A；30～40min，6％-10％A；40～50min，10％-30％A；流速：0.5mL/min；檢測波長：254nm，進(jìn)樣體積：10μL。測量得到核苷成分含量(肌苷、次黃嘌呤、黃嘌呤、鳥苷、胸腺嘧啶、2-脫氧鳥苷)百分含量為79.8％。四角蛤蜊經(jīng)江蘇省海洋水產(chǎn)研究所萬夕和研究員鑒定為蛤蜊科動物四角蛤蜊Mactra veneriformisReeve的新鮮本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點】
一種從海洋低值貝類中分離純化得到的核苷類成分，其特征在于，它包括肌苷、次黃嘌呤、黃嘌呤、鳥苷、胸腺嘧啶、2?脫氧鳥苷、腺嘌呤、鳥嘌呤、腺苷、2?脫氧肌苷、尿苷、胸苷、2?脫氧尿苷、胞嘧啶、胞苷、鳥苷酸、尿苷酸、肌苷酸、腺苷酸、胞苷酸。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種從海洋低值貝類中分離純化得到的核苷類成分，其特征在于，它包括肌苷、次黃嘌呤、黃嘌呤、鳥苷、胸腺嘧啶、2-脫氧鳥苷、腺嘌呤、鳥嘌呤、腺苷、2-脫氧肌苷、尿苷、胸苷、2-脫氧尿苷、胞嘧啶、胞苷、鳥苷酸、尿苷酸、肌苷酸、腺苷酸、胞苷酸。2.一種從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)貝類軟體水提醇沉上清液的制備：取新鮮的貝類軟體，洗凈瀝干后，稱重，加水煎煮，濾過，合并濾液，濃縮，離心去沉淀，得上清液，加入乙醇，靜置，抽濾得上清液，上清液濃縮至無醇味，采用電滲析進(jìn)行脫鹽處理；(2)大孔吸附樹脂柱粗分離純化：將步驟(1)制備得到的貝類軟體水提醇沉上清液，上大孔吸附樹脂柱進(jìn)行層析，先用水進(jìn)行洗脫除雜，再用體積濃度為5％乙醇水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，得大孔吸附樹脂分離物；(3)陽離子交換樹脂分離純化：將步驟(2)制備得到的大孔吸附樹脂分離物，上陽離子交換樹脂柱，先用水洗雜，再用體積濃度為3％的氨水和體積濃度30％乙醇混合溶液洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，即得核苷類成分。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從海洋低值貝類中分離純化核苷類成分的方法，其特征在于，貝類軟體為四角蛤蜊、菲律賓蛤仔或文蛤。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的從海洋低值貝類中分離純化...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉睿，吳皓，程建明，張倩，王欣之，楊小林，邱韻縈，
申請(專利權(quán))人：南京中醫(yī)藥大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：江蘇;32