一種硼酸硅膠前處理材料的制備方法技術

本發明專利技術屬于分析化學領域，更具體地涉及一種硼酸硅膠前處理材料的制備方法。具體步驟如下：（1）在氮氣保護中，將功能單體4?巰基苯硼酸與適量催化劑溶于溶劑中，磁力攪拌混合均勻；（2）加入炔基修飾的硅膠并在65℃溫度下，恒溫反應10?70小時。反應結束以后，將產物采用砂芯漏斗抽濾，并分別用甲醇，水，甲醇三種溶劑進行沖洗。洗滌后產物干燥，即得本發明專利技術的硼酸硅膠前處理材料。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于分析化學領域，具體地涉及一種硼酸硅膠前處理材料的制備方法。
技術介紹
糖蛋白作為一類重要的翻譯后修飾蛋白，在信號轉導、免疫及腫瘤發生等生物學過程中發揮著重要的作用。因此，糖蛋白和糖肽的發現與鑒定在疾病的診斷和蛋白質組學領域意義重大。目前，用于N 連接糖肽富集的主要方法有凝集素、酰肼、親水作用色譜、硼酸親和色譜等。對于具有1,2- 順式二醇化學結構的糖型，苯硼酸可以與其形成可逆的五元或者六元環的酯，同時苯硼酸具有親水性，能夠與糖肽選擇性結合。硼酸材料對糖肽的富集選擇性集親和和親水作用力為一體，不僅能夠避免糖鏈結構遭到破壞，而且所富集的產物與質譜兼容，對于研究糖蛋白糖基化位點信息及糖型結構歸屬較為方便。因此，硼酸在糖肽的選擇性富集領域受到了人們的關注。而由硼酸為鍵合相開發的親和材料也在糖蛋白或糖肽選擇性富集中起到了越來越重要的作用。點擊化學指的是一類轉化率高，產率高，操作簡便，綠色環保的化學反應，廣泛的應用在生物，藥物等領域。我們課題組曾經將點擊化學(Click Chemistry)用于合成硅膠基質的色譜固定相，相應的文章發表在國際知名期刊上（Journal of Chromatography A 2009, 1216: 257-263；Chemical Communications 2007, 2491-2493；Chemical Communications 2006, 4512-4514；Analytical and Bioanalytical Chemistry, 2011，399，3359-3365; Talanta, 78 (2009) 916-921; Journal of separation science, 33:9 (2010) 1224-1230; Analytical Method, 2012，4, 1244-1251）。這些方法采用的均是銅催化的點擊化學反應，雖然得到較高的反應效率，但是反應過程中引入銅這個重金屬，會給色譜分離帶來影響，因此有必要加以改進。無銅催化的點擊化學以其高轉化率，高產率，以及避免銅的引入，引起了研究人員的重視。以2,2’-偶氮二異丁腈催化的炔基和巰基反應的點擊化學方法就是一種無銅催化的點擊化學反應（J. AM. CHEM. SOC. 2009, 131, 14673–14675），相比較而言，合成轉化率高，且沒有銅離子的引入，是一種理想的化學反應。然而這種方法目前沒有引入到色譜填料制備中，而且用于硼酸硅膠前處理材料的制備也未見報道。
技術實現思路
本專利技術的一個目的在于提供一種基于無銅催化的硼酸硅膠前處理材料制備方法，具體步驟如下：（1）氮氣保護下，將2,2’-偶氮二異丁腈加入功能單體4-巰基苯硼酸的甲醇溶液中磁力攪拌混合均勻；（2）在攪拌的溶液中加入炔基修飾的硅膠，并在65℃條件下將樣品反應10-70小時；（3）反應結束以后，將產物采用砂芯漏斗抽濾，并分別用甲醇，水，甲醇等溶劑進行沖洗。洗滌后產物干燥，即得本專利技術的硼酸硅膠前處理材料。在本專利技術的一個實施方案中，步驟2中所述的材料為炔基硅膠材料，為實驗室自制，制備和表征方法均參照文獻（Chem. Commun. 2007, 2491-2493）；溶劑為甲醇。在本專利技術的另一個實施方案中，炔基硅膠材料、4-巰基苯硼酸與溶劑的重量比為1：0.2～5：5～100，優選為1：0.8：20。在本專利技術再一個實施方案中，步驟（2）中所述催化劑為2,2’-偶氮二異丁腈，4-巰基苯硼酸與催化劑的重量比為24：1，反應溫度優選為65℃，反應時間為48小時。具體實施方式下面將進一步的來舉例說明本專利技術。需要指出的是，以下說明僅僅是對本專利技術要求保護的技術方案的舉例說明，并非對這些技術方案的任何限制。本專利技術的保護范圍以所附權利要求書記載的內容為準。實施例1（1）氮氣保護下，將2,2’-偶氮二異丁腈(160 mg)加入功能單體4-巰基苯硼酸(3.8 g)的甲醇溶液(50 mL)中磁力攪拌混合均勻；（2）在攪拌的溶液中加入炔基修飾的硅膠，并在65℃條件下將樣品反應24小時；（3）反應結束以后，將產物采用砂芯漏斗抽濾，并分別用甲醇（500mL），水(500mL)，甲醇(200mL)進行順序沖洗。洗滌后產物干燥，即得本專利技術的硼酸硅膠前處理材料。另外，本專利技術還設定了以下對比例，具體如下：對比例1：不采用氮氣保護，其他同實施例1；對比例2：炔基硅膠材料、4-巰基苯硼酸與溶劑甲醇的重量比為1：0.2：20，其他同實施例1；對比例3：炔基硅膠材料、4-巰基苯硼酸與溶劑的重量比為1：5：50，其他同實施例1；對比例4：催化劑為光催化，紫外可見光波長為254-470 nm，其他同實施例1；實施例2將實施例1制備的硼酸硅膠前處理材料1.5mg和50%乙腈/0.1%甲酸水溶液以一定比例（1:1.5，v:v）混合后超聲分散5 min，裝填于GE Loader小柱中，并用50%乙腈/0.1%甲酸水溶液（50 uL）清洗。備用。實施例3進行糖肽選擇性富集實驗，采用基質輔助激光解吸（MALDI）質譜以辣根過氧化物酶（HRP）酶解物作為分離對象，進行糖肽選擇性富集，富集條件為：將實施例2中所制備的裝有填料的GE Loader小柱，先用80%ACN（乙腈）/ 0.1%甲酸溶液（50 uL）清洗，棄除流出液。采用糖蛋白酶解物HRP作為對象進行親水富集：取HRP酶解液（1mg/mL）（2 μL）旋干后，加入80%ACN（乙腈）/0.1%甲酸溶液（20uL）重溶解，上樣GE Loader小柱。分別用上樣緩沖液80%ACN（乙腈）/0.1%甲酸水溶液（40 μL）清洗，淋洗緩沖液50%ACN（乙腈）/ 0.1%甲酸溶液（20 μL）洗脫。所得的樣品冷凍濃縮干燥以后，用70% ACN/0.5%TFA（20 μL）重溶，用MALDI質譜進行分析，采用DHB作為基質。并歸納實施例和對比例從HRP中富集出的糖肽數目，考察材料的糖肽富集選擇性。具體結果如下表顯示表1 實施例和對比例的糖肽選擇性富集結果本
技術實現思路
僅僅舉例說明了要求保護的一些具體實施方案，其中一個或更多個技術方案中所記載的技術特征可以與任意的一個或多個技術方案相組合，這些經組合而得到的技術方案也在本申請保護范圍內，就像這些經組合而得到的技術方案已經在本專利技術公開內容中具體記載一樣。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種硼酸硅膠前處理材料的制備方法，具體步驟如下：（1）氮氣保護下，將2,2’?偶氮二異丁腈加入功能單體4?巰基苯硼酸的甲醇溶液中磁力攪拌混合均勻；（2）在攪拌的溶液中加入炔基修飾的硅膠，并在65℃條件下將樣品反應10?70小時；（3）反應結束以后，將產物采用砂芯漏斗抽濾，并分別用甲醇，水，甲醇進行順序沖洗；洗滌后產物干燥，即得本專利技術的硼酸硅膠前處理材料。

【技術特征摘要】
1.一種硼酸硅膠前處理材料的制備方法，具體步驟如下：（1）氮氣保護下，將2,2’-偶氮二異丁腈加入功能單體4-巰基苯硼酸的甲醇溶液中磁力攪拌混合均勻；（2）在攪拌的溶液中加入炔基修飾的硅膠，并在65℃條件下將樣品反應10-70小時；（3）反應結束以后，將產物采用砂芯漏斗抽濾，并分別用甲醇，水，甲醇進行順序沖洗；洗滌后產物干燥，即得本發明的硼酸硅膠前處理材料。2.根據權利要求1所述的一種硼酸硅膠前處理材料的制備方法，其特征在于，步驟1中催化劑為2,2’-偶氮二異丁腈。3.根據權利要求1中所述的一種硼酸硅膠前處理材料的制備方法，其特征在于，步驟1需要在氮氣保護下進行反應。4.根據權利要求1所述的一種硼酸硅膠前處理材料的制備方法，其特征在于，步驟2中所述的材料為炔基修飾的硅膠。5.根據權利要求1所述的一種硼酸硅膠前處理材料的制備方法，其特征在...

【專利技術屬性】
技術研發人員：趙艷艷，張麗媛，王立恒，董佩佩，彭金詠，
申請(專利權)人：大連醫科大學，
類型：發明
國別省市：遼寧;21