本發(fā)明專利技術(shù)提供一種竹節(jié)參總皂苷在制備預(yù)防及治療肝臟衰老的藥物上的應(yīng)用。竹節(jié)參總皂苷在制備預(yù)防及治療肝臟衰老表現(xiàn)在隨著年齡的增長，降低IL?1β、TNF?α蛋白和IL?1β、IL?6、1L?12、IL?17α、TNF?α、IFN?γmRNA的表達(dá)。所述的竹節(jié)參總皂苷包括人參皂苷Re、竹節(jié)參皂苷V、竹節(jié)參皂苷IV、竹節(jié)參皂苷IVa、竹節(jié)參皂苷2。本發(fā)明專利技術(shù)的竹節(jié)參總皂苷對自然衰老大鼠肝臟有保護(hù)作用，可能與其對抗肝臟炎癥有關(guān)。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)提供一種竹節(jié)參總皂苷在制藥中的應(yīng)用，具體為制備預(yù)防及治療肝臟衰老的藥物上的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
衰老是生物體普遍的生理現(xiàn)象，是一個及其復(fù)雜和多因子的過程，以許多器官漸進(jìn)的退行性變化為其主要特征。研究顯示隨著衰老的進(jìn)行體內(nèi)穩(wěn)態(tài)并不能良好維持，而肝臟是最容易受到影響的器官之一。在人和實(shí)驗(yàn)動物肝臟中，與衰老相關(guān)的形態(tài)學(xué)和功能學(xué)的變化包括肝血流量，脂質(zhì)積累，儲存脂肪和產(chǎn)生細(xì)胞外基質(zhì)的肝星狀細(xì)胞的減少、腫脹以及炎性因子的增加。慢性炎癥已經(jīng)被提議作為潛在的衰老以及與衰老相關(guān)的疾病的主要分子機(jī)制，炎癥細(xì)胞因子在肝臟疾病中的作用受到密切關(guān)注。其中包括Th1類炎癥因子：IL-1β、IL-12、IL-6、TNF-α、IFN-γ和Th17類炎癥因子：IL-17α，這些炎癥因子直接反映了肝臟內(nèi)的炎癥狀態(tài)。竹節(jié)參為五加科人參屬植物竹節(jié)參Panaxjaponicas C.A.Mey的干燥呈竹鞭狀根莖，具有滋補(bǔ)強(qiáng)壯、散瘀止痛、止血祛痰的功效。竹節(jié)參總皂苷是從竹節(jié)參塊根中提取分離而得，是竹節(jié)參的主要活性成分之一。竹節(jié)參總皂苷(total saponins ofPanax japonicas，TSPJ)包括人參皂苷Re、竹節(jié)參皂苷V、竹節(jié)參皂苷IV、竹節(jié)參皂苷IVa、竹節(jié)參皂苷2等，多以齊墩果烷型五環(huán)三萜為主，達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜(原人參二醇、原人參三醇型)相對較少。現(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示，竹節(jié)參總皂苷具有抗炎、抗腫瘤、降血脂等多種藥理活性。前期研究顯示，竹節(jié)參總皂苷可以保護(hù)異煙肼、利福平、酒精以及四氯化碳所致的小鼠肝損傷，竹節(jié)參對D-半乳糖所致的衰老具有保護(hù)效應(yīng)。基于此，本研究建立大鼠自然衰老模型，初步探討竹節(jié)參總皂苷對自然衰老大鼠肝臟炎癥的干預(yù)作用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)提供一種探討竹節(jié)參總皂苷干預(yù)自然衰老大鼠肝臟炎癥作用的實(shí)驗(yàn)研究。以自然衰老大鼠為對象，將SPF級SD大鼠按月齡分為3月齡組(3M組)、9月齡組(9M組)、15月齡組(15M組)、24月齡組(24M組)、及24月齡的竹節(jié)參總皂苷(TSPJ)低、中、高劑量組，每組12只大鼠。TSPJ低、中、高劑量組的大鼠從18M開始，分別給予竹節(jié)參總皂苷10mg/kg、30mg/kg、60mg/kg灌胃至24個月，每周停藥一天，連續(xù)6個月。
采用HE染色觀察病理形態(tài)學(xué)變化，肝臟生化指標(biāo)檢測，Western Blotting檢測肝臟白介素1-β(IL-1β)、腫瘤壞死因子(TNF-α)的蛋白表達(dá)，RT-PCR檢測肝臟IL-1β、白介素-6(IL-6)、白介素-12(1L-12)、白介素17α(IL-17α)、TNF-α、干擾素-γ(IFN-γ)mRNA的表達(dá)。隨著大鼠年齡的逐漸增長，HE染色觀察發(fā)現(xiàn)肝組織中肝索及肝血竇的排列紊亂加重，脂肪空泡和炎癥細(xì)胞增多，血清ALT、膽固醇、甘油三酯明顯增高，TSPJ(10mg/kg、30mg/kg、60mg/kg)各劑量組均能在一定程度上改善其病變情況，恢復(fù)肝功能，降低血糖血脂；IL-1β、TNF-α蛋白和IL-1β、IL-6、1L-12、IL-17α、TNF-α、IFN-γmRNA的表達(dá)隨著年齡的增長逐漸升高，TSPJ各劑量組均在一定程度上的降低其表達(dá)。竹節(jié)參總皂苷對自然衰老大鼠肝臟有保護(hù)作用，與其對抗肝臟炎癥有關(guān)。因此本專利技術(shù)提供一種竹節(jié)參總皂苷在制備預(yù)防及治療肝臟衰老的藥物上的應(yīng)用。所述的竹節(jié)參總皂苷包括人參皂苷Re、竹節(jié)參皂苷V、竹節(jié)參皂苷IV、竹節(jié)參皂苷IVa、竹節(jié)參皂苷2。附圖說明圖1為不同年齡段及不同處理的大鼠肝臟圖。圖2為不同年齡段及不同處理的大鼠肝臟重量圖。圖3為TSPJ對自然衰老大鼠肝臟HE染色的影響。圖4為TSPJ對自然衰老大鼠肝臟IL-1β、TNF-α蛋白表達(dá)的影響。圖5為TSPJ對自然衰老大鼠炎癥因子基因的影響。具體實(shí)施方式實(shí)施例1實(shí)驗(yàn)動物SPF級雄性SD大鼠，購自三峽大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，動物分籠飼養(yǎng)于空調(diào)室內(nèi)，室溫(22±2)℃，濕度(60±5)％，喂標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料，自由飲水和攝食。實(shí)驗(yàn)藥物和試劑竹節(jié)參的塊根購于湖北省恩施椿木營竹節(jié)參種植基地，經(jīng)湖北省天然產(chǎn)物研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室鄒坤教授鑒定其為五加科人參屬植物竹節(jié)參Panaxjaponicas C.A.Mey。竹節(jié)參總皂苷(total saponins ofP.japonicas，TSPJ)是由本研究團(tuán)隊(duì)提取分離，其提取分離方法參照前期研究方法(袁丁,張長城,何毓敏,王洪武,胡遠(yuǎn)浪,孫志偉,趙海霞,李玉洲.一種竹節(jié)參皂苷和多糖的提取分離方法[P].湖北：CN101838338A,2010-09-22.)；總RNA提取試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和PCR擴(kuò)增試劑盒，大連寶生物科技有限公司；PCR引物，生工生物工程(上海)股份有限公司；羊抗β-actin、白介素-1β(IL-1β),兔抗腫瘤壞死因
子-α(TNF-α)抗體，美國Santa Cruz公司，批號依次為：sc-4778，sc-13968，sc-1351。羊抗兔及兔抗羊IgG-HRP，武漢科瑞有限公司；化學(xué)發(fā)光劑ECL，碧云天生物技術(shù)研究所。儀器AL104型電子分析天平(梅特勒-托利多國際貿(mào)易有限公司)；TP1020脫水機(jī)(Leica公司)；ZB-J0020樣品旋轉(zhuǎn)浸透器(北京中興百瑞技術(shù)有限公司)；ULTRACUTR型超薄切片機(jī)(奧地利萊卡公司)；CS-V1型攤片烤片機(jī)(孝感市宏業(yè)醫(yī)用儀器有限公司)；DMIRB熒光倒置生物顯微鏡(德國Leica公司)；CT15RT高速冷凍離心機(jī)(上海天美生化儀器設(shè)備工程有限公司)；HH.S21-6-S恒溫水浴鍋(上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司)；WD-9405D脫色搖床(北京市六一儀器廠)；DYY-6C電泳儀(北京市六一儀器廠)；902PCR擴(kuò)增儀(新加坡AB Applied Biosystems)；Gene Genius凝膠分析系統(tǒng)(美國SYNGNE公司)。方法 分組和給藥不同時間點(diǎn)購買3M大鼠，在三峽大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心常規(guī)喂養(yǎng)至不同月齡進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。其中3M大鼠12只、9M大鼠12只、15M大鼠12只、18M大鼠48只，將18M大鼠分為4組，每組12只，分別是衰老對照組，竹節(jié)參總皂苷(TSPJ)低、中、高劑量組。18M衰老對照組每天灌胃生理鹽水，每周灌六天停一天至24個月；TSPJ低、中、高劑量組分別給與竹節(jié)參總皂苷10mg/kg、30mg/kg、60mg/kg灌胃至24個月，每周灌六天停一天。實(shí)驗(yàn)前12小時禁食，飲水不限制。實(shí)驗(yàn)過程、實(shí)驗(yàn)研究均遵循中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)會動物倫理委員會制定的指導(dǎo)原則和要求。血清生化指標(biāo)測定：全自動生化儀測定肝臟HE染色大鼠處死后，完整取出肝臟組織，稱重后用0.9％氯化鈉注射液沖洗，予濾紙盡量沾干，快速切取肝中葉標(biāo)本，置入4％多聚甲醛中固定，統(tǒng)一進(jìn)行脫水，石蠟包埋、切片，按標(biāo)準(zhǔn)操作進(jìn)行HE染色，光鏡下觀察結(jié)果。肝臟電鏡觀察取新鮮大鼠肝組織，放入裝有預(yù)冷的生理鹽水的玻璃培養(yǎng)皿中，經(jīng)漂洗，除去肝臟表面血液，用手術(shù)刀片迅速在肝右頁距邊緣1cm處，切取兩塊肝組織，大小為1×1×1mm，迅速放入裝有3％戊二醛固定液的玻璃小瓶中，4℃固定，于12h內(nèi)送至三峽大學(xué)醫(yī)學(xué)院電鏡室做進(jìn)一步處理，制作成電鏡觀察標(biāo)本，在H-7500型投射電鏡(日立公司本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種竹節(jié)參總皂苷在制備預(yù)防及治療肝臟衰老的藥物上的應(yīng)用。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種竹節(jié)參總皂苷在制備預(yù)防及治療肝臟衰老的藥物上的應(yīng)用。2.權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，竹節(jié)參總皂苷在制備預(yù)防及治療肝臟衰老表現(xiàn)在隨著年齡的增長，降低IL-1β、TNF-α蛋白和IL-1β、IL...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：袁丁，張長城，劉朝奇，王婷，周志勇，頓耀艷，趙海霞，何毓敏，向婷婷，
申請(專利權(quán))人：三峽大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：湖北;42
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