包含修飾的合成信使RNA和遞送劑的制劑。修飾的合成信使RNA編碼瘦蛋白蛋白質(zhì)，是不復(fù)制的并且是翻譯?準(zhǔn)備好的。可以向患有先天性瘦蛋白缺乏、脂肪代謝障礙或其中循環(huán)中的瘦蛋白水平是低的其它病況的受試者遞送制劑。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】本專利
本專利技術(shù)一般地涉及影響生命或身體吃的多核苷酸組合物，并且具體地涉及通過向受試者施用編碼人瘦蛋白蛋白質(zhì)的修飾的、合成的、非復(fù)制的信使核糖核酸(mRNA)來治療患有先天的瘦蛋白缺乏、脂肪代謝障礙或其中循環(huán)中的瘦蛋白水平低的其它病況的受試者。專利技術(shù)背景瘦蛋白是由白色脂肪組織生產(chǎn)并且分泌到個體的循環(huán)系統(tǒng)中的激素。循環(huán)的瘦蛋白進(jìn)入個體的大腦，在那里它與瘦蛋白受體結(jié)合而通過激活幾個信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)來調(diào)節(jié)食欲(飽食的感覺)、能量代謝和神經(jīng)內(nèi)分泌的功能。先天性瘦蛋白缺乏是由瘦蛋白基因的突變所引起的。患有先天性瘦蛋白缺乏的個體貪得無厭地吃并且變成病態(tài)地肥胖的，遭受肥胖的結(jié)果，包括性腺機(jī)能減退和糖尿病。患有引起一般化的脂肪代謝障礙(接近完全的缺少脂肪組織)的瘦蛋白突變或單基因突變的個體也具有不足的瘦蛋白水平。這些患有脂肪代謝障礙和低瘦蛋白水平的個體是瘦的，但是發(fā)展飲食過多、嚴(yán)重的脂質(zhì)異常和糖尿病。采用重組的瘦蛋白蛋白質(zhì)治療逆轉(zhuǎn)這些效果。Licinio J等人(2004)Proc.Natl.Acad.Sci.USA101(13):4531-6顯示在遵照瘦蛋白蛋白質(zhì)治療的缺乏瘦蛋白的肥胖成人中重量減輕。用美曲普汀(metreleptin)(重組瘦蛋白蛋白質(zhì))以皮下方式治療患者持續(xù)18個月，導(dǎo)致增加的物理活動、II型糖尿病和性腺機(jī)能減退兩者的解決和體重指數(shù)的減小。Ebihara K等人(2007)J.Clin.Endocrinol.Metab.92 532–541在患有一般化脂肪代謝障礙的患者中顯示:采用美曲普汀通過每日注射兩次治療40個月在1個星期之內(nèi)開始改善了空腹葡萄糖和甘油三酯水平。瘦蛋白替代療法減小了胰島素抗性并且增加了胰島素分泌。美曲普汀療法對糖尿病和脂肪代謝障礙并發(fā)癥有益處。Chan JL等人(2011)Endocr.Pract.17(6):922-932顯示:美曲普汀療法使在脂肪代謝障礙患者中的代謝異常正常化。特別地，Chan等人(2011)顯示:在貫穿3年的治療期間，美曲普汀療法減小血紅蛋白A1c和甘油三酯水平。然而，瘦蛋白蛋白質(zhì)難以生產(chǎn)并且具有短的半衰期、需要每日皮下(SC)給藥一次或兩次。因此，在本領(lǐng)域中存在著對于通過把瘦蛋白給藥方案從每日兩次減少到每幾天一次或甚至更小的頻度而改善患者護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)的需要。專利技術(shù)概述本專利技術(shù)提供可用于矯正受試者瘦蛋白缺乏的制劑。該制劑可以有利地每幾天施用給受試者一次，在體內(nèi)以最低的免疫活化并且以瘦蛋白蛋白質(zhì)的受控表達(dá)。所述制劑的一種組分是修飾的合成瘦蛋白信使核糖核酸(mRNA)。對mRNA的修飾提供改善的mRNA穩(wěn)定性和減小的免疫原性。修飾的合成瘦蛋白mRNA的合成可以借助于包括體外轉(zhuǎn)錄在內(nèi)的幾種方法中的任何一種。在一種實施方式中，在瘦蛋白mRNA的體外轉(zhuǎn)錄期間，通過采用假尿嘧啶核苷(Ψ)取代瘦蛋白mRNA中的尿嘧啶核苷而在其合成期間修飾瘦蛋白mRNA。在具體的實施方式中，瘦蛋白mRNA中所有的尿嘧啶核苷被假尿嘧啶核苷取代。在一種實施方式中，修飾的合成瘦蛋白具有在自然界中發(fā)現(xiàn)的編碼序列。在備選的實施方式中，修飾的合成瘦蛋白具有密碼子優(yōu)化的編碼序列。在一種實施方式中，修飾的合成瘦蛋白具有編碼序列，其編碼在功能上與天然人瘦蛋白蛋白質(zhì)等同的蛋白質(zhì)。制劑的另一種組分是遞送劑。在一種實施方式中，遞送劑是脂質(zhì)納米微粒。在一種實施方式中，陽離子脂質(zhì)納米微粒包括:(i)用于包裹和用于內(nèi)體脫逸的陽離子脂質(zhì)，(ii)用于穩(wěn)定化的中性脂質(zhì)，(iii)也用于穩(wěn)定化的輔助脂質(zhì)，和(iv)防止聚集的隱型脂質(zhì)(stealth lipid)。在更具體的實施方式中，陽離子脂質(zhì)可以是陽離子脂質(zhì)A、陽離子脂質(zhì)B、陽離子脂質(zhì)C或陽離子脂質(zhì)D；輔助脂質(zhì)是膽固醇；并且隱型脂質(zhì)是聚乙二醇(PEG)脂質(zhì)(“脂質(zhì)化的PEG”)。在另一種實施方式中，把改善的脂質(zhì)納米微粒用作遞送劑來在個體的細(xì)胞中提供改善的瘦蛋白蛋白質(zhì)的表達(dá)以及在個體的循環(huán)中提供增加的瘦蛋白。在另一種實施方式中，輔助脂質(zhì)是1，2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸膽堿(DSPC)。在又一種實施方式中，隱型脂質(zhì)是S024(進(jìn)一步在本文中描述)。在另一種實施方式中，陽離子脂質(zhì)與中性脂質(zhì)的摩爾比率在3:1和8:1之間。本專利技術(shù)也提供向患有瘦蛋白缺乏的受試者施用修飾的合成瘦蛋白mRNA制劑的方法。受試者可具有病況，例如先天性和獲得性一般化脂肪代謝障礙(其中具有非常低的瘦蛋白水平、獲得性HIV脂肪代謝障礙(其中具有低的瘦蛋白水平)、下丘腦性閉經(jīng)或肥胖(特別地，患有減少瘦蛋白水平的那些受試者)。可以向受試者體內(nèi)或向器官或組織離體施用修飾的合成瘦蛋白mRNA以在器官中或在脂肪組織中誘導(dǎo)瘦蛋白蛋白質(zhì)的外源性表達(dá)。因此，可以以最低的癌癥風(fēng)險把本專利技術(shù)修飾的合成瘦蛋白mRNA制劑用于類似于基因療法的目的，因為不能在哺乳動物細(xì)胞中逆轉(zhuǎn)錄mRNA而產(chǎn)生可能形成染色體插入風(fēng)險的DNA拷貝。在一種實施方式中，以靜脈內(nèi)方式向個體施用修飾的合成瘦蛋白mRNA制劑。在另一種實施方式中，以皮下方式施用修飾的合成瘦蛋白mRNA制劑。在又一種實施方式中，首先以靜脈內(nèi)方式施用，然后以皮下方式施用修飾的合成瘦蛋白mRNA制劑。可以以重復(fù)的劑量施用修飾的合成瘦蛋白mRNA制劑。在一種實施方式中，以至少0.2mg瘦蛋白mRNA/kg受試者的體重的劑量遞送本專利技術(shù)修飾的合成瘦蛋白mRNA制劑。在另一種實施方式中，以至少0.6mg瘦蛋白mRNA/kg受試者的體重的劑量遞送本專利技術(shù)修飾的合成瘦蛋白mRNA制劑。本專利技術(shù)具有幾個優(yōu)點(diǎn)。所述優(yōu)點(diǎn)中的一個是可以以比施用瘦蛋白蛋白質(zhì)所需要的給藥(它是每日皮下給藥一次或兩次)更小的頻度，向個體給藥制劑。在一種實施方式中，修飾的合成瘦蛋白mRNA制劑的施用可以是每三天一次。在另一種實施方式中，修飾的合成瘦蛋白mRNA制劑的施用可以是每個星期一次。在一種實施方式中，修飾的合成瘦蛋白mRNA被包裹在脂質(zhì)納米微粒復(fù)合體中，其向個體提供低的免疫原性。在另一種實施方式中，修飾的合成瘦蛋白mRNA被有利地包裹在可生物降解的遞送劑中。所述優(yōu)點(diǎn)中的一個是向受試者施用制劑，遞送足以在體內(nèi)導(dǎo)致藥學(xué)上活性的瘦蛋白水平的修飾的合成瘦蛋白mRNA。正如本文中描述的那樣，已經(jīng)測定了用于抑制食物攝取的本專利技術(shù)修飾的合成瘦蛋白在血漿中的EC50濃度值為1.4ng/mL(85pM)。在一種實施方式中，向受試者施用本專利技術(shù)修飾的合成瘦蛋白mRNA制劑，使得施用導(dǎo)致瘦蛋白蛋白質(zhì)的血漿濃度為至少2.8ng/毫升，該值是用于減少缺乏瘦蛋白的ob/ob小鼠體重的人瘦蛋白蛋白質(zhì)濃度的EC50的兩倍。在另一種實施方式中，遞送修飾的合成瘦蛋白mRNA制劑導(dǎo)致1.4ng/mL的瘦蛋白蛋白質(zhì)的血漿濃度。在又一種實施方式中，遞送修飾的合成瘦蛋白mRNA制劑導(dǎo)致185ng/mL的血漿濃度。在另一種實施方式中，遞送修飾的合成瘦蛋白mRNA制劑導(dǎo)致1300ng/mL的血漿瘦蛋白蛋白質(zhì)濃度。在一種實施方式中，以足以使血漿瘦蛋白蛋白質(zhì)濃度至少比施用以前受試者的基線瘦蛋白蛋白質(zhì)濃度高10ng/mL的數(shù)量，向受試者施用本專利技術(shù)修飾的合成瘦蛋白mRNA制劑。本專利技術(shù)給被施用了本專利技術(shù)修飾的合成瘦蛋白mRNA制劑的受試者提供了幾種了可測量的益處本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
制劑，其包含:(a)核糖核酸(RNA)多核苷酸，(i)其中多核苷酸編碼瘦蛋白蛋白質(zhì)，并且(ii)其中多核苷酸包括假尿嘧啶核苷核苷酸；和(b)遞送劑。
【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】2013.12.19 US 61/918,161;2014.01.31 US 61/933,9641.制劑，其包含:(a)核糖核酸(RNA)多核苷酸，(i)其中多核苷酸編碼瘦蛋白蛋白質(zhì)，并且(ii)其中多核苷酸包括假尿嘧啶核苷核苷酸；和(b)遞送劑。2.權(quán)利要求1的制劑，其中編碼的瘦蛋白蛋白質(zhì)是人瘦蛋白蛋白質(zhì)。3.權(quán)利要求1-2中任意一項的制劑，其中核糖核酸多核苷酸不包括尿嘧啶核苷核苷酸。4.權(quán)利要求1-3中任意一項的制劑，其中核糖核酸多核苷酸包含編碼區(qū)，其與選自由SEQ ID NOS:17-20組成的組的序列具有至少78％的序列同一性。5.權(quán)利要求1-3中任意一項的制劑，其中核糖核酸多核苷酸包含編碼區(qū)，其與選自由SEQ ID NOS:17-20組成的組的序列具有至少90％的序列同一性。6.權(quán)利要求1-3中任意一項的制劑，其中核糖核酸多核苷酸包含選自由SEQ ID NOS:17-20組成的組的序列。7.權(quán)利要求1-3中任意一項的制劑，其中核糖核酸多核苷酸包含選自由SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:10組成的組的序列。8.權(quán)利要求1-7中任意一項的制劑，其中制劑是脂質(zhì)納米微粒(LNP)。9.權(quán)利要求1-8中任意一項的制劑，其中遞送劑包括陽離子脂質(zhì)、中性脂質(zhì)、輔助脂質(zhì)和隱型脂質(zhì)。10.權(quán)利要求9的制劑，其中陽離子脂質(zhì)與核糖核酸多核苷酸的摩爾比率在3:1和8:1之間。11.權(quán)利要求9-10中任意一項的制劑，其中陽離子脂質(zhì)選自由陽離子脂質(zhì)A、陽離子脂質(zhì)B、陽離子脂質(zhì)C和陽離子脂質(zhì)D組成的組。12.權(quán)利要求9-11中任意一項的制劑，其中中性脂質(zhì)是1，2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酸膽堿(DSPC)。13.權(quán)利要求9-12中任意一項的制劑，其中輔助脂質(zhì)是膽固醇。14.權(quán)利要求9-13中任意一項的制劑，其中隱型脂質(zhì)是聚乙二醇(PEG)脂質(zhì)。15.權(quán)利要求9-14中任意一項的制劑，其中隱型脂質(zhì)是S024。16.權(quán)利要求1-15中任意一項的制劑，其中遞送劑包括陽離子脂質(zhì)、膽固醇、中性脂質(zhì)和聚乙二醇(PEG)脂質(zhì)。17.權(quán)利要求1-16中任意一項的制劑，用作藥物。18.權(quán)利要求1-17中任意一項的制劑，用于治療瘦蛋白缺乏、脂肪代謝障礙或其中循環(huán)中的瘦...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：C·拜爾斯，S·L·卡普蘭，G·G·甘伯，S·哈姆，K·A·黑爾德魏因，I·斯普勞斯基，T·扎巴瓦，F·澤克里，
申請(專利權(quán))人：諾華股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：瑞士;CH
還沒有人留言評論。發(fā)表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。