免疫層析檢測試紙以及試劑盒制造技術(shù)

免疫層析檢測試紙以及試劑盒，包括檢測區(qū)域以及校準(zhǔn)區(qū)域；所述檢測區(qū)域設(shè)置檢測線，當(dāng)樣品中存在目標(biāo)檢測物時(shí)，其中的納米金標(biāo)記物顆粒發(fā)生免疫層析反應(yīng)聚集在檢測線上；所述校準(zhǔn)區(qū)域設(shè)置校準(zhǔn)顏色塊，所述校準(zhǔn)色塊位于所述納米金標(biāo)記物顆粒的顯色范圍，通過對(duì)于所述校準(zhǔn)色塊的檢測對(duì)于檢測結(jié)果進(jìn)行修正并且確定是否需要進(jìn)一步的修正。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及免疫層析檢測
，尤其是涉及免疫層析檢測試紙以及試劑盒。
技術(shù)介紹
膠體金溶液是指分散相粒子直徑在l—150nm之間的金溶膠，屬于多相不均勻體系，顏色呈桔紅色到紫紅色。膠體金可以作為探針進(jìn)行細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)多糖、蛋白質(zhì)、多肽、抗原、激素、核酸等生物大分子的精確定位，也可以用于日常的免疫診斷。由于膠體金作為標(biāo)記物有很多優(yōu)點(diǎn)，因此自該技術(shù)問世以來在國內(nèi)外的許多研究領(lǐng)域中得到了迅速的發(fā)展。現(xiàn)已廣泛用于電鏡、流式細(xì)胞儀、免疫印跡、蛋白染色、體外診斷試劑的制造等領(lǐng)域。目前在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用主要是免疫層析法。金標(biāo)免疫層析技術(shù)(gold—labeled immunochromatography assay，GICA)是一種將膠體金標(biāo)記技術(shù)、免疫檢測技術(shù)和層析分析技術(shù)等多種技術(shù)結(jié)合在一起的固相標(biāo)記免疫檢測技術(shù)。因其操作簡便、快速，且具有很高的特異性和敏感性，近幾年來在臨床診斷、床邊檢測方面的應(yīng)用發(fā)展迅速，已經(jīng)在體液檢測中得到了廣泛應(yīng)用。金標(biāo)免疫層析檢測試紙是應(yīng)用膠體金技術(shù)及抗體、抗原特異性規(guī)律進(jìn)行檢測的，當(dāng)待測試液（根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目不同，試樣可取病人血清、唾液或尿）滴入試紙時(shí)，試液通過毛細(xì)作用，將膠體金帶到吸附有抗體的測試線上，若試液中的抗原與此抗體相對(duì)應(yīng)，則產(chǎn)生特異性結(jié)合，膠體金滯留在測試線上，呈特定顏色。利用具有光源和光電探測器的對(duì)檢測試紙進(jìn)行即時(shí)判讀，能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)目標(biāo)被檢物定量檢測。常規(guī)的技術(shù)方案，通過LED光源在金免疫層析檢測試紙表面形成照射光，使用光電二極管陣列接收金免疫層析檢測試紙的散射光，通過對(duì)納米金顆粒的定量測量，實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)金標(biāo)試紙條的快速定量檢測。但是，常規(guī)的技術(shù)方案中沒有考慮系統(tǒng)部件老化導(dǎo)致的影響，為了克服現(xiàn)有技術(shù)的上述缺陷，201210185414.7的專利技術(shù)專利提出了一種金標(biāo)免疫層析試紙條檢測系統(tǒng)的性能校正方法，通過檢測系統(tǒng)出廠時(shí)金標(biāo)條比色卡的數(shù)據(jù)信息，根據(jù)此數(shù)據(jù)信息建立與檢測物濃度相對(duì)應(yīng)的最佳響應(yīng)曲線；在特定的時(shí)間周期，重新檢測比色卡對(duì)應(yīng)的數(shù)據(jù)信息，將其與校正標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，從而計(jì)算出修正系數(shù)，通過該修正系數(shù)修正系統(tǒng)部件老化的結(jié)果。但是，該專利技術(shù)的技術(shù)方案還存在如下缺陷：一方面，其需要間隔特定周期才能夠進(jìn)行修正，無法實(shí)時(shí)判斷是否需要進(jìn)行修正；另一方面，其修正僅僅是數(shù)值修正，不考慮具體的物理過程，其結(jié)果是非線性的，準(zhǔn)確性不足。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)提供了改進(jìn)的技術(shù)方案，能夠解決現(xiàn)有技術(shù)的上述問題，并且提高修正的準(zhǔn)確性。作為本專利技術(shù)的一個(gè)方面，提供了一種免疫層析檢測試紙，包括檢測區(qū)域以及校準(zhǔn)區(qū)域；所述檢測區(qū)域設(shè)置檢測線，當(dāng)樣品中存在目標(biāo)檢測物時(shí)，其中的納米金標(biāo)記物顆粒發(fā)生免疫層析反應(yīng)聚集在檢測線上；所述校準(zhǔn)區(qū)域設(shè)置校準(zhǔn)顏色塊，所述校準(zhǔn)色塊位于所述納米金標(biāo)記物顆粒的顯色范圍，通過對(duì)于所述校準(zhǔn)色塊的檢測對(duì)于檢測結(jié)果進(jìn)行修正并且確定是否需要進(jìn)一步的修正。優(yōu)選的，所述校準(zhǔn)色塊包括顏色相同的第一色塊以及第二色塊，所述第一色塊表面覆蓋特定透光率的透光層，所述第二色塊表面不覆蓋透光層。優(yōu)選的，所述透光層的透光率為70％～90％。優(yōu)選的，所述透光層的透光率為80％。優(yōu)選的，在檢測前分別通過檢測光源和標(biāo)準(zhǔn)光源照射所述第一色塊以及第二色塊，根據(jù)光電探測器的響應(yīng)確定檢測光源的修正。優(yōu)選的，所述修正包括如下步驟：1、根據(jù)計(jì)算修正系數(shù)k和b，其中L標(biāo)1為使用標(biāo)準(zhǔn)光源照射第一色塊時(shí)光電探測器檢測的信號(hào)強(qiáng)度，L標(biāo)2為使用標(biāo)準(zhǔn)光源照射第二色塊時(shí)光電探測器檢測的信號(hào)強(qiáng)度；L檢1為使用檢測光源照射第一色塊時(shí)光電探測器檢測的信號(hào)強(qiáng)度，L檢2為使用檢測光源照射第二色塊時(shí)光電探測器檢測的信號(hào)強(qiáng)度；2、檢測時(shí)通過檢測光源照射檢測區(qū)域，將光電探測器檢測的信號(hào)強(qiáng)度修正為L修＝kL測+b。優(yōu)選的，還包括第三色塊以及第四色塊，所述第三色塊以及第四色塊分別為不同顏色，其中第三色塊顏色靠近所述納米金標(biāo)記物顆粒的顯色范圍的下限，第四色塊顏色靠近所述納米金標(biāo)記物顆粒的顯色范圍的上限。優(yōu)選的，通過最佳響應(yīng)曲線，計(jì)算第三色塊以及第四色塊的期待信號(hào)強(qiáng)度，L期3＝k1X1+b1和L期4＝k1X2+b1，其中k1和b1為最佳響應(yīng)曲線的斜率和截距，X1和X2分別為第三色塊和第四色塊的色階梯度數(shù)值；通過檢測光源測定第三色塊以及第四色塊的信號(hào)強(qiáng)度L測3和L測4，分別計(jì)算修正后的信號(hào)強(qiáng)度L修3＝kL測3+b和L修4＝kL測4+b，然后根據(jù)L期3－L修3和L期4－L修4的絕對(duì)值判斷是否需要進(jìn)一步的修正。優(yōu)選的，所述在系統(tǒng)出廠時(shí)通過光電探測器記錄檢測比色卡的數(shù)據(jù)信息，根據(jù)此數(shù)據(jù)信息建立比色卡色度與光電探測器信號(hào)強(qiáng)度相對(duì)應(yīng)的最佳響應(yīng)曲線。優(yōu)選的，如果L期3－L修3和L期4－L修4中任意一個(gè)的絕對(duì)值大于特定閾值，進(jìn)行進(jìn)一步的光電探測器響應(yīng)系數(shù)的修正。優(yōu)選的，光電探測器響應(yīng)系數(shù)的修正值通過如下步驟計(jì)算:(1)使用檢測光源作為光源，光電探測器依次獲取比色卡各個(gè)梯度區(qū)域的數(shù)據(jù)信息；（2）進(jìn)行檢測光源的修正，得到各個(gè)梯度區(qū)域修正后的信號(hào)強(qiáng)度L修i；（3）通過最佳響應(yīng)曲線，分別計(jì)算各個(gè)梯度區(qū)域的期待信號(hào)強(qiáng)度L期i；（4）計(jì)算各個(gè)梯度區(qū)域的響應(yīng)系數(shù)的修正值εi＝L期i/L修i。優(yōu)選的，對(duì)于檢測區(qū)域測量的光源修正后的信號(hào)強(qiáng)度L修，其修正步驟為：(1)獲取其色度對(duì)應(yīng)梯度區(qū)域端點(diǎn)的響應(yīng)系數(shù)的修正值ε1和ε2；（2）通過對(duì)于ε1和ε2進(jìn)行插值計(jì)算出該色度的修正值ε修；（3）計(jì)算該信號(hào)強(qiáng)度L修的最終修正Lf＝L修×ε修。優(yōu)選的，根據(jù)光源修正以及光電探測器響應(yīng)系數(shù)修正后的信號(hào)強(qiáng)度，確定樣品的目標(biāo)檢測物濃度。作為本專利技術(shù)的另外一個(gè)方面，提供一種免疫層析檢測試劑盒，包括上述權(quán)利要求之一所述的免疫層析檢測試紙，以及比色卡，所述比色卡標(biāo)識(shí)目標(biāo)檢測物濃度與顏色梯度的關(guān)系。附圖說明圖1是本專利技術(shù)實(shí)施例的免疫層析檢測試紙示意圖。具體實(shí)施方式為了更清楚地說明本專利技術(shù)的技術(shù)方案，下面將使用實(shí)施例對(duì)本專利技術(shù)進(jìn)行簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的僅僅是本專利技術(shù)的一個(gè)實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)性的前提下，還可以根據(jù)這些實(shí)施例獲取其他的技術(shù)方案，也屬于本專利技術(shù)的公開范圍。本專利技術(shù)實(shí)施例的免疫層析檢測試紙，參見圖1，包括加液口1，檢測區(qū)域2以及校準(zhǔn)區(qū)域3。其中，加液口1設(shè)置吸水墊，用于通過加液口1向試紙加入檢測樣品，檢測樣品可以是體液如血液等。檢測區(qū)域2內(nèi)設(shè)置檢測線，當(dāng)樣品中存在目標(biāo)檢測物時(shí)，樣品通過毛細(xì)作用，將納米金標(biāo)記物顆粒帶到吸附有抗體的測試線上，若樣品中的抗原與此抗體相對(duì)應(yīng)，則產(chǎn)生特異性結(jié)合，膠體金滯留在測試線上，呈特定顏色。通過檢測光源發(fā)出的光照射在試紙條卜，試紙條表面散射光由光電探測器接收。光強(qiáng)度反映物體對(duì)入射光的吸收程度，根據(jù)朗伯－比爾定律，光強(qiáng)度與樣品中目標(biāo)被檢物的濃度成線性關(guān)系，所以根據(jù)光電探測器的測量結(jié)果，能夠確定樣品中被檢測物的濃度。本專利技術(shù)的技術(shù)方案基于如下原理，檢測系統(tǒng)的老化包括光源系統(tǒng)的老化以及光電探測器的老化。其中光電系統(tǒng)的老化是由于光源例如發(fā)光二極管的發(fā)光性能退化，導(dǎo)致同樣的輸入?yún)?shù)，其發(fā)光強(qiáng)度減弱，由此導(dǎo)致檢測結(jié)果的誤差，其導(dǎo)致的誤差是線性的。而光電探測器例如光電二極管老化時(shí)，其光電響應(yīng)性能變化，導(dǎo)致對(duì)于色度光源的響應(yīng)系數(shù)變化，該變化導(dǎo)致的誤差是非線性的。現(xiàn)有技術(shù)如20本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種免疫層析檢測試紙，包括檢測區(qū)域以及校準(zhǔn)區(qū)域；所述檢測區(qū)域設(shè)置檢測線，當(dāng)樣品中存在目標(biāo)檢測物時(shí)，其中的納米金標(biāo)記物顆粒發(fā)生免疫層析反應(yīng)聚集在檢測線上；所述校準(zhǔn)區(qū)域設(shè)置校準(zhǔn)顏色塊，所述校準(zhǔn)色塊位于所述納米金標(biāo)記物顆粒的顯色范圍，通過對(duì)于所述校準(zhǔn)色塊的檢測對(duì)于檢測結(jié)果進(jìn)行修正并且確定是否需要進(jìn)一步的修正。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種免疫層析檢測試紙，包括檢測區(qū)域以及校準(zhǔn)區(qū)域；所述檢測區(qū)域設(shè)置檢測線，當(dāng)樣品中存在目標(biāo)檢測物時(shí)，其中的納米金標(biāo)記物顆粒發(fā)生免疫層析反應(yīng)聚集在檢測線上；所述校準(zhǔn)區(qū)域設(shè)置校準(zhǔn)顏色塊，所述校準(zhǔn)色塊位于所述納米金標(biāo)記物顆粒的顯色范圍，通過對(duì)于所述校準(zhǔn)色塊的檢測對(duì)于檢測結(jié)果進(jìn)行修正并且確定是否需要進(jìn)一步的修正。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的免疫層析檢測試紙，其特征在于：所述校準(zhǔn)色塊包括顏色相同的第一色塊以及第二色塊。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的免疫層析檢測試紙，其特征在于：還包括加液口，所述加液口設(shè)置吸水墊，用于通過加液口1向試紙加入檢測樣品。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的免疫層析檢測試紙，其特征在于：所述檢測區(qū)域設(shè)置檢測線和質(zhì)控線。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的免疫層析檢測試紙，其特征在...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：江翠珍，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：江翠珍，
類型：發(fā)明
國別省市：河北;13