本發(fā)明專利技術(shù)涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種治療牙髓炎的靶向人JNK1基因的小干擾RNA序列及其應(yīng)用，所述的小干擾RNA包括正義鏈和反義鏈，所述的正義鏈的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示；所述的反義鏈的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:3所示。本發(fā)明專利技術(shù)獲得的小干擾RNA序列未見于以往公開的報道，能在JNK1基因的轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行干擾，降低炎癥牙髓干細(xì)胞中p?JNK的表達(dá)，特異性降低牙髓干細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)牙髓干細(xì)胞的成牙本質(zhì)分化，為牙髓炎提供新的治療方案。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物
，具體地說，是一種治療牙髓炎的靶向人JNK1基因的小干擾RNA序列及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
牙髓炎是最常見的口腔疾病之一，主要癥狀是疼痛，不及時治療可引起根尖周炎、頜骨囊腫等，影響患者的口腔功能、美觀、發(fā)音和心理狀態(tài)，甚至成為病灶，引起低熱、腎炎、心肌炎、虹膜睫狀體炎、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等多種疾病，影響全身健康。齲病是引起牙髓炎的主要病因之一，細(xì)菌感染及炎性細(xì)胞的浸潤造成牙本質(zhì)破壞，此時機(jī)體可形成修復(fù)性牙本質(zhì)避免牙髓受到細(xì)菌及其毒素的刺激，以維持牙體結(jié)構(gòu)的完整性，但是由于牙本質(zhì)的修復(fù)速度較牙本質(zhì)的破壞速度緩慢，從而導(dǎo)致牙體結(jié)構(gòu)破壞，最終導(dǎo)致牙髓炎的發(fā)生。根管治療是目前臨床上最常用的治療方法，但治療后的牙齒脆性增加、易折裂，限制其廣泛使用。因此，充分認(rèn)識炎癥狀態(tài)下修復(fù)性牙本質(zhì)的形成機(jī)理及調(diào)節(jié)機(jī)制，對于防治牙髓炎的發(fā)生和發(fā)展具有重要意義。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)又被稱為應(yīng)激活化蛋白激酶(stress-activated protein kinase,SAPK)是MAPK(mitogen-activated protein kinase，絲裂原活化蛋白激酶)家族主要部分，包括JNK1、JNK2和JNK3三個成員，在組織中廣泛表達(dá)。在MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中JNK可由上游激酶MKK4/SEK1和JNKK2/MKK7激活，活化的JNK可經(jīng)核轉(zhuǎn)位進(jìn)入細(xì)胞核，通過磷酸化調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子的活性，產(chǎn)生一系列廣泛而重要的生物學(xué)效應(yīng)，包括炎癥發(fā)生、細(xì)胞生長、增殖、分化、細(xì)胞周期阻滯及細(xì)胞凋亡等。先前的研究發(fā)現(xiàn)JNK激活與牙髓細(xì)胞的成牙本質(zhì)分化相關(guān)。重組人牙本質(zhì)涎蛋白(Recombinant human dentin sialoprotein，RH-DSP)能增強(qiáng)JNK的磷酸化，進(jìn)而導(dǎo)致牙髓細(xì)胞的成牙本質(zhì)分化增加。Luo等研究發(fā)現(xiàn)，JNK抑制劑SP600125能顯著降低牙髓干細(xì)胞(dental pulp stem cells，DPSCs)的成牙本質(zhì)分化能力(Luo Z,Kohli MR,Yu Q,Kim S,Qu T,and He WX,Biodentine induces human dental pulp stem cell differentiation through mitogen-activated protein kinase and calcium-/calmodulin-dependent protein kinase II pathways.J Endod.2014；40(7):937-942.)。胸腺素β-4活化的DPSCs中，JNK的磷酸化增強(qiáng)，當(dāng)加入JNK抑制劑后，成牙本質(zhì)分化水平降低。上述結(jié)果顯示JNK活化可以促進(jìn)DPSCs成牙本質(zhì)分化。JNK與炎癥和細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，在慢性牙周炎的牙齦組織中，JNK表達(dá)增加。在脂多糖(lipopolysaccharides，LPS)刺激的牙髓細(xì)胞中，茶多酚可通過抑制JNK的活化抑制炎癥反應(yīng)。在鎘誘導(dǎo)的H460細(xì)胞凋亡的過程中，JNK蛋白磷酸化水平明顯增高。臨床中洛伐他汀治療心血管疾病誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡是通過Rac/Cdc42/JNK通路完成的。另外JNK活化后可進(jìn)入線粒體，切割Bid蛋白，促進(jìn)其向線粒體轉(zhuǎn)移，激活Bax，促進(jìn)細(xì)胞色素C的釋放，從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。RNA干擾(RNA interference，RANi)是指在進(jìn)化過程中高度保守的、由雙鏈RNA(double-stranded RNA,dsRNA)誘發(fā)的、同源mRNA高效特異性降解的一種生物學(xué)現(xiàn)象，能特異干擾靶基因的表達(dá)。其作用機(jī)制是：核糖核酸酶III家族的Dicer酶，與dsRNA結(jié)合，將其剪切成21-25nt及3’端突出的小干擾RNA(Small interfering RNA,siRNA)，隨后siRNA與RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RNA-induced silencing complex，RISC)結(jié)合，解旋成單鏈，活化的RISC受已成單鏈的siRNA引導(dǎo)，序列特異性地結(jié)合到靶信使RNA(mRNA)上并將其切斷，引發(fā)靶mRNA的特異性分解，從而抑制相應(yīng)基因表達(dá)。目前已成為一門獨(dú)立的技術(shù)，作用靶點(diǎn)特異性高、對細(xì)胞毒性小、相對安全，引起生物醫(yī)學(xué)界所有研究領(lǐng)域的廣泛興趣。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于以最新的JNK1基因序列為靶點(diǎn)，提供一種治療牙髓炎的新的特異性抑制人JNK1基因表達(dá)的小干擾RNA序列及其應(yīng)用。本專利技術(shù)的第一方面，提供一種靶向人JNK1基因的小干擾RNA的靶標(biāo)基因，所述的靶標(biāo)基因的核苷酸序列為5’-GTCGGTTAGTCATTGATAG-3’，如SEQ ID NO:1所示。本專利技術(shù)的第二方面，提供一種靶向人JNK1基因的小干擾RNA，由下述正義鏈和反義鏈組成：正義鏈：5’-GAGUCGGUUAGUCAUUGAUAG-3’(SEQ ID NO:2)；反義鏈：5’-CUAUCAAUGACUAACCGACUC-3’(SEQ ID NO:3)。本專利技術(shù)的第三方面，提供上述靶向人JNK1基因的小干擾RNA的靶標(biāo)基因在制備治療牙髓炎藥物中的應(yīng)用。本專利技術(shù)的第四方面，提供上述靶向人JNK1基因的小干擾RNA在制備治療牙髓炎藥物中的應(yīng)用。所述的靶向人JNK1基因的小干擾RNA特異性降低牙髓干細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)牙髓干細(xì)胞成牙本質(zhì)分化。本專利技術(shù)的第五方面，提供一種治療牙髓炎的藥物組合物，所述的藥物組合物包括上述靶向人JNK1基因的小干擾RNA和藥學(xué)上可接受的載體。所述的藥學(xué)上可接受的載體為藥學(xué)上可接受的賦形劑，懸浮劑，填充劑和/或稀釋劑。本專利技術(shù)優(yōu)點(diǎn)在于：本專利技術(shù)獲得的小干擾RNA序列未見于以往公開的報道，能在JNK1基因的轉(zhuǎn)錄后進(jìn)行干擾，降低炎癥牙髓干細(xì)胞中p-JNK的表達(dá)，特異性降低牙髓干細(xì)胞的凋亡，促進(jìn)牙髓干細(xì)胞的成牙本質(zhì)分化，可為治療牙髓炎提供新的方案。附圖說明圖1是siRNA對牙髓干細(xì)胞JNK1蛋白的下調(diào)作用。(圖示為Western blot檢測JNK1蛋白表達(dá)量，依次為空白組，對照組和siRNA組；GAPDH為內(nèi)參。提示該siRNA能顯著降低JNK1蛋白的表達(dá)。)圖2是western blot檢測siRNA對牙髓干細(xì)胞在重度炎癥下成牙本質(zhì)分化的影響。結(jié)果表明：A為在不同濃度炎癥因子TNF-a作用下，牙髓干細(xì)胞的成牙本質(zhì)能力以濃度依賴方式降低，成牙本質(zhì)標(biāo)記物牙本質(zhì)涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1(dental matrix protein-1,DMP1)的表達(dá)以濃度依賴的方式降低。B為siRNA作用后能明顯恢復(fù)牙髓干細(xì)胞在炎癥刺激下的成牙本質(zhì)分化能力，特別是在100ng/mlTNF-a刺激下。提示該siRNA具有促成牙本質(zhì)分化能力。圖3是ALP染色檢測siRNA對牙髓干細(xì)胞成牙本質(zhì)分化能力的影響。結(jié)果顯示為A為牙髓干細(xì)胞在不同濃度TNF-a刺激下成牙本質(zhì)分化培養(yǎng)14天后ALP染色結(jié)果明顯降低。B高濃度炎癥100ng/ml TNF-a作用下，與對照組相比，給與siRNA后能更明顯恢復(fù)牙髓干細(xì)胞的成牙本質(zhì)分化能力。具體實施方式下面結(jié)合實施例對本專利技術(shù)提供的具體實施方式作詳細(xì)本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種靶向人JNK1基因的小干擾RNA的靶標(biāo)基因，其特征在于，所述的靶標(biāo)基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種靶向人JNK1基因的小干擾RNA的靶標(biāo)基因，其特征在于，所述的靶標(biāo)基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.一種靶向人JNK1基因的小干擾RNA，其特征在于，所述的小干擾RNA包括正義鏈和反義鏈，所述的正義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；所述的反義鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向人JNK1基因的小干擾RNA的靶標(biāo)基因在制備治療牙髓炎藥物中的應(yīng)用。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的靶向人JNK1基因的小干擾RNA在制備治療...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張冬梅，劉曉娟，肖靜雯，馮興梅，
申請(專利權(quán))人：南通大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：江蘇;32
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