三羥基根皮素糖苷化衍生物和提取方法技術

本發明專利技術公開了三羥基根皮素的糖苷化衍生物和這類化合物的提取方法，三羥基根皮素的糖苷化衍生物包括單糖、雙糖和寡糖的糖苷化衍生物，其提取方法包括粗提和進一步分離獲得提取物兩個部分，最終得到的提取物中三羥基根皮素糖苷化衍生物的純度高，且該方法成本可控產率可觀。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術一般涉及三羥基根皮素糖苷化衍生物和用于提取三羥基根皮素糖苷化衍生物的方法。
技術介紹
研究表明，三羥基根皮素糖苷化衍生物可以有效抑制晚期糖基化終末產物（AGEs）的形成，AGEs是糖與蛋白質結合的一類產物，它可以與人體的各種組織細胞相結合并破壞這些組織細胞，從而導致衰老、糖尿病、阿爾茨海默病、動脈粥樣硬化等一系列慢性疾病，而對于AGEs形成的過程進行抑制，可以在一定程度上預防和緩解由AGEs引發的慢性疾病。科學研究證實，一種三羥基根皮素糖苷化衍物（三羥基三葉苷，英文名：Sieboldin）對于AGEs的形成的抑制作用遠遠優于氨基胍（常用AGEs抑制劑）。但是包括Sieboldin在內的三羥基根皮素糖苷化衍生物在自然界分布較少，大量獲得困難，從而限制這類化合物的應用，本專利技術創造性地從植物組織材料中大量的獲得三羥基根皮素糖苷化衍生物，從而在源頭上解決了這類化合物的應用限制，且獲得的三羥基根皮素糖苷化衍生物純度高，產量可觀。
技術實現思路
根據下面詳細的說明、附圖和權利要求，本專利技術的其他目標、特征和優勢是明顯的。除非另外定義，否則本文使用的所有技術術語、縮寫和科學術語、縮寫具有與本專利技術所屬領域普通技術人員通常理解相同的含義。雖然類似于或等同于本文描述的三羥基根皮素糖苷化衍生物和三羥基根皮素糖苷化衍生物的提取方法可以用于本專利技術的實踐，但是描述了合適的三羥基根皮素糖苷化衍生物和方法，且不期望任何本專利技術中所述的化合物和提取方法限制本專利技術。本專利技術描述了一類三羥基根皮素糖苷化衍生物和這類化合物的提取方法。本專利技術所述的三羥基根皮素糖苷化衍生物具有如下結構：其中R1和R2至少一個為糖苷，R1和R2可以分別為氫（H）、單糖形成的糖苷、雙糖形成的糖苷或寡糖形成的糖苷。其中上述單糖至少包括：阿拉伯糖苷（arabinoside）、木糖苷（xyloside）、葡萄糖苷（glucoside），半乳糖苷（galactoside）和鼠李糖苷（rhamnoside），上述二糖至少包括：蕓香糖苷（rutinoside），木糖葡萄糖苷（xyloglucoside），桑布雙糖苷（sambubioside）和槐糖苷（sophoroside）。本領域普通技術人員應當理解，上述的糖苷與三羥基根皮素形成的糖苷鍵均包括α構型和β構型兩種構型情況，且糖苷均包含D構型和L構型兩種構型的糖苷，除非另外標明，否則本文所述的三羥基根皮素糖苷化衍生物均應包含所有合適的構型。具體地，本專利技術所述的三羥基根皮素糖苷化衍生物，其中應含有不少于50%的三羥基根皮素糖苷化衍生物，并且其中可能含有其他多酚類化合物，包含但不限于一種或多種成分，例如根皮苷、三葉苷、兒茶素、綠原酸、花色苷、蘆丁及各種槲皮素的糖苷化衍生物和山萘酚的糖苷化衍生物等。特別地，本專利技術所述的提取材料取自蘋果屬（Malus）植物和石柯屬(Lithocarpus)植物，包括原生種、品種和使用任意種通過轉基因技術育成的新品種。本文涉及的提取方法包括提取并獲得粗提物和進一步分離并得到提取物兩個過程。提取并獲得粗提物的過程應使用醇的水溶液從經過處理的植物組織材料中進行提取，并提供適宜的溫度和壓力，以期獲得較高的提取效率，提取完畢后應分離液相和固相兩個部分，并回收液相組分，獲得粗提物。粗提物進一步分離獲得含有三羥基根皮素糖苷化衍生物的提取物的過程，應包括液液分配技術、液固分配技術、結晶技術、離心分離技術、冷凍干燥技術、真空干燥技術等本領域普通技術人員熟知的分離技術。最終獲得提取物使用高效液相色譜（HPLC）或超高效液相色譜（Ultra-High Performance Liquid Chromatography/Ultra Performance Liquid Chromatography）檢測純度和化合物，使用液相色譜-質譜聯用（LC-MS）和核磁共振（NMR）確定組合物中的三羥基根皮素糖苷化衍生物結構。附圖說明圖1是高效液相檢測實施例1中提取物的圖譜；圖2是高效液相檢測實施例2中提取物的圖譜。實施例為了使本專利技術的目的、技術方案、優勢及創新點更加清楚明白，以下結合附圖及實施例對本專利技術進一步詳細說明，但實施例并不限制本專利技術。并且，在本專利技術中可以做出多種改進和變型而不偏離本專利技術的精神或范圍，這對于本領域技術人員是顯而易見的。因此期望本專利技術涵蓋在所附權利要求和它們的等同要求的范圍內的這些改進和變形。實施例1提取用的原料經過處理后，使用醇的水溶液浸泡，為提高提取率可以使用加熱、加壓、攪拌、超聲等方法，提取完畢將固相與液相分離，并回收液相部分，可使用萃取、減壓蒸餾、常溫蒸餾、冷凍干燥、加熱干燥、離心分離等方法處理液相部分，以獲得粗提物，以利于隨后的操作。將粗提物使用聚酰胺柱層析和/或凝膠柱層析進一步分離，使用醇的水溶液洗脫，小心的調整醇的水溶液的比例，已獲得最佳分離效果，收集含有的三羥基根皮素糖苷化衍生物的組分，并從中回收的三羥基根皮素糖苷化衍生物。將獲得的三羥基根皮素糖苷化衍生物使用NMR和LC-MC確定結構，使用HPLC檢測純度，最終確定所得化合物為Sieboldin(CAS: 18777-73-6)，通過核磁共振和質譜確定結構如下： 該化合物的1H NMR和13C NMR數據如下表(500MHz DMSO-d6 )：該實施例的中對于三羥基根皮素糖苷化衍生物的高效液相檢測條件如下：使用Inertsil ODS-3色譜柱（5.0ml柱體積，4.6mm×250mm），Inertsil ODS-3保護柱(5.0μm，4.0mm×10mm)，使用島津公司（shimadzu）SPD-M20A二極管陣列DAD檢測器，用于分析的具體條件在下表中:HPLC檢測結果如圖1所示，結果表明提取物中Sieboldin含量達到99.78%。實施例2獲得粗提物的方法同實施例1，得到的粗提物使用制備液相進行進一步分離，制備液相使用十八烷基鍵合硅膠反相色譜柱，柱長應不小于15cm，使用醇的水溶液作為流動相，流速應不小于2ml/min，為了獲得更好的分離效果，可以調節醇的水溶液的比例，收集含有的三羥基根皮素糖苷化衍生物的組分，并從中回收三羥基根皮素糖苷化衍生物。將獲得的的三羥基根皮素糖苷化衍生物使用NMR和LC-MC確定結構，使用HPLC檢測純度，最終確定所得化合物為 3-Hydroxyphloretin 2'-xyloglucoside (CAS: 620165-48-2)，通過核磁共振和質譜確定結構如下：該化合物的1H NMR和13C NMR數據如下表(500MHz DMSO-d6 )：該實施例的中對于三羥基根皮素糖苷化衍生物的高效液相檢測條件如下：使用Inertsil ODS-3色譜柱（5.0ml柱體積，4.6mm×250mm），Inertsil ODS-3保護柱(5.0μm，4.0mm×10mm)，使用島津公司（Shimadzu）SPD-M20A二極管陣列DAD檢測器，用于分析的具體條件在下表中:HPLC檢測結果如圖2所示，結果表明提取物中3-Hydroxyphloretin 2'-xyloglucoside含量達到91.05%。上述實施例中提取用原料應當經過適當處理，包括加熱、冷凍、干燥等。上述實施例中所述的提取完畢后的分離步本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種提取物及其提取方法，該提取物中至少應含有一種三羥基根皮素（3?Hydroxyphloretin）的糖苷化衍生物，其中三羥基根皮素的糖苷化衍生物具有如下結構：其中R1和R2至少一個為糖苷，R1和R2可以分別為氫（H）、單糖形成的糖苷、雙糖形成的糖苷或寡糖形成的糖苷；其中上述單糖的糖苷至少包括下列糖苷的D構型和L構型的異構體：阿拉伯糖苷（arabinoside）、木糖苷（xyloside）、葡萄糖苷（glucoside），半乳糖苷（galactoside）和鼠李糖苷（rhamnoside），上述二糖至少包括下列糖苷及其D構型和L構型的異構體：蕓香糖苷（rutinoside），木糖葡萄糖苷（xylolglucoside），桑布雙糖苷（sambubioside）和槐糖苷（sophoroside）。

【技術特征摘要】
1.一種提取物及其提取方法，該提取物中至少應含有一種三羥基根皮素（3-Hydroxyphloretin）的糖苷化衍生物，其中三羥基根皮素的糖苷化衍生物具有如下結構：其中R1和R2至少一個為糖苷，R1和R2可以分別為氫（H）、單糖形成的糖苷、雙糖形成的糖苷或寡糖形成的糖苷；其中上述單糖的糖苷至少包括下列糖苷的D構型和L構型的異構體：阿拉伯糖苷（arabinoside）、木糖苷（xyloside）、葡萄糖苷（glucoside），半乳糖苷（galactoside）和鼠李糖苷（rhamnoside），上述二糖至少包括下列糖苷及其D構型和L構型的異構體：蕓香糖苷（rutinoside），木糖葡萄糖苷（xylolglucoside），桑布雙糖苷（sambubioside）和槐糖苷（sophoroside）。2.根據權利要求1所述，提取物所含有的三羥基根皮素的衍生物，R1為氫（H），R2為單糖的糖苷時應有如下的化學結構的一種或多種：根據權利要求1所述，提取物所含有的三羥基根皮素的衍生物，當為R2氫（H），R1為單糖的糖苷時應有如下的化學結構的一種或多種：根據權利要求1所述，提取物所含有的三羥基根皮素的衍生物，當R1為單糖的糖苷， R2為單糖的糖苷時應有如下的化學結構的一種或多種：根據權利要求1所述，提取物所含有的三羥基根皮素的衍生物，R1為氫（H），R2為雙糖的糖苷時應有如下的化學結構的一種或多種：根據權利要求1所述，提取物所含有的三羥基根皮素的衍生物，R1為雙糖的糖苷，R2為氫（H）時應有如下的化學結構的一種或多種：根據權利要求1至6所述的分子結構，其中的糖苷鍵均應包含α和β兩種構型。3.根據權利要求1所述提取物，其中所述三羥基根皮素的衍生物具有大約50%以上的純度。4.根據權利要求1所述提取物，其中所述三羥基根皮素的衍生物具有大約75%以...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李鵬民，肖鄭操，
申請(專利權)人：李鵬民，肖鄭操，
類型：發明
國別省市：陜西;61