本發明專利技術公開了一種與棉花抗黃萎病主效QTLvw1位點連鎖的分子標記，所述主效QTLvw1位點位于棉花D4染色體上，并且與所述主效QTLvw1位點連鎖的分子標記為ZHX8、ZHX53和NAU3791。本發明專利技術所述分子標記在篩選或鑒定抗黃萎病棉花品種、克隆或精細定位QTL中包含的抗病相關基因中有重要應用價值。本發明專利技術可以應用于標記輔助育種，有助于解決我國棉花黃萎病抗性育種進展緩慢的問題，同時也可以克服棉花黃萎病抗性鑒定中存在的時間長、穩定性低、準確性差和易受環境影響的問題，加快棉花抗黃萎病育種的進程。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及棉花分子標記
，具體涉及一種與抗棉花黃萎病主效QTLvw1位點連鎖的分子標記及其應用。
技術介紹
棉花是我國主要的經濟作物，棉花生產在我國國民經濟中始終占有舉足輕重的地位。棉花的病害比較多，特別是黃萎病，給棉花生產造成巨大損失。棉花黃萎病是Carpenter于1914年在美國弗吉尼亞州發現并報道的，它是由大麗輪枝菌引起的一種真菌性病害。我國棉花黃萎病是由于1935年引進美國斯字棉4B棉種傳入我國的，以后隨著棉種的繁殖和調運，棉花黃萎病在我國各主要產棉區逐漸傳播開來。1973年普查結果顯示，全國枯、黃萎病面積36.98萬hm2，占統計棉田的10％，1979年增至71.17萬hm2，占統計棉田的18.2％(全國棉花枯、黃萎病綜合防治研究協作組，1976)。1982年農牧漁業部對全國棉花枯、黃萎病發生狀況進行普查，其發生面積達148.2萬hm2，占當年植棉面積的31.26％，其中純黃萎病田面積13萬hm2，占病田面積的8.7％(馬存，2007)。20世紀90年代以來，我國棉花黃萎病擴展蔓延迅猛，其中1993年棉花黃萎病爆發成災，發病面積達266.67萬hm2，損失皮棉1億公斤以上。1995年、1996年棉花黃萎病在全國范圍內連續大發生，給棉花生產造成極大的損失。2000年棉花黃萎病在新疆危害嚴重，其中農五師2.67萬hm2棉田中有0.67萬hm2重病田。2002和2003年棉花黃萎病在北方棉區再次連續大發生，給棉花生產造成重大損失。到目前為止，由于缺少棉花抗黃萎病的栽培材料，通過常規的育種手段來解決棉花對黃萎病的抗性進展緩慢(Caietal.，2009)。我國棉花科技界公認的海島棉抗黃萎病品種海7124具備抗枯斑型、黃斑型黃萎病特點。陸地棉是世界棉花的主要栽培種，但其遺傳基礎狹窄，缺乏對多種病、蟲害的抗性。所以通過回交將海島棉抗黃萎病相關的功能基因向陸地棉轉移是提高陸地棉抗黃萎病的一個方向。但是由于棉花黃萎病菌在全國主產棉區存在著大量不同的生理小種，迄今尚未選育出能經受住生產實踐檢驗的陸地棉抗黃萎病新品種。同時在每輪回交中，都要對黃萎病抗性進行檢測，成本較高，時間相對較長，同時抗性鑒定還容易受到溫度、濕度等環境因素的影響。因此，抗病育種的時間較長、成本較高，難度相對較大。目前，隨著分子標記技術的不斷進步，研究者通過構建棉花遺傳連鎖圖譜來定位抗病性狀，研究取得很大的進展，檢測到許多與抗性相關的QTLs(Boleketal.，2005；Yangetal.，2008；蔣鋒等2009)。到目前為止，在10條染色體或連鎖群上共定位至少60個抗病相關QTLs(Wangetal.，2008；Zhaoetal.，2014)。如Bolek等(2005)利用海島棉抗黃萎病品種PimaS-7與陸地棉感病品種Acala44作為實驗材料，對其F2代單株多個表型數據分析表明，抗性受多基因控制。單標記分析和區間分析，檢測出與抗黃萎病相關的QTL，其中，CM12，STS1和NEJ6與黃萎病抗性位點小于15cM，這三個標記都定位于11號染色體。蔣鋒等(2009)利用抗黃萎病品系60182和感黃萎病品種軍棉1號為親本配制雜交組合，用F2作為作圖群體，將抗病相關QTLs主要定位在D7和D9染色體上。Ning等(2013)使用陸地棉Prema和86-1構建重組自交系群體對黃萎病抗性QTL進行定位，通過混合人工病圃接菌鑒定，共檢測到7個顯著的QTLs；利用溫室接菌鑒定，共檢測到5個顯著的QTLs，分別位于A9、D3、D11和D9染色體上，其中一個位于D9染色體上的QTL在四個不同的環境中均能被檢測到。在D4染色體上也定位了部分與抗病相關的QTLs。Wang等(2012)在D4染色體定位抗根癌線蟲QTL，解釋表型變異7.7％。Yang等(2008)利用海島棉海7124和陸地棉軍棉1號配制的F2和BC1群體，在D4染色體檢測到抗病QTL，且與標記NAU3392連鎖，解釋表型變異20.3％。可見分子標記對于從分子水平上研究棉花的抗黃萎病機理具有十分重要的意義。
技術實現思路
本專利技術的目的之一是提供一種與棉花抗黃萎病主效QTLvw1位點連鎖的分子標記；本專利技術的另一目的是提供與棉花抗黃萎病主效QTLvw1位點連鎖的分子標記的應用。本專利技術采用如下技術方案：1、一種與棉花抗黃萎病主效QTLvw1位點連鎖的分子標記，所述主效QTLvw1位點位于棉花D4染色體上，在抗黃萎病株系蘇研VR025和蘇棉8號配制的F2群體中，QTLvw1能解釋13.99％-25.98％的表型變異，并且與所述主效QTLvw1位點連鎖的分子標記為ZHX8、ZHX53和NAU3791，各分子標記引物序列及在抗病品系蘇研VR025中擴增的目的條帶長度如下：ZHX8的正向引物序列為SEQIDNO.1，反向引物序列為SEQIDNO.2，在高抗黃萎病種質系蘇研VR025中可擴增出長度為225bp的DNA片段；ZHX53的正向引物序列為SEQIDNO.3，反向引物序列為SEQIDNO.4，在高抗黃萎病種質系蘇研VR025中可擴增出長度為460bp的DNA片段；NAU3791的正向引物序列為SEQIDNO.5，反向引物序列為SEQIDNO.6，在高抗黃萎病種質系蘇研VR025中可擴增出長度為230bp的DNA片段。與抗棉花黃萎病主效QTLvw1位點連鎖的分子標記的應用，包括：(1)在定位棉花抗黃萎病主效QTLvw1位點中的應用；(2)在鑒定棉花抗黃萎病性狀中的應用；(3)在篩選和鑒定棉花抗黃萎病品種中的應用。具體地，本專利技術提供的分子標記，通過以下方法獲得：(1)以陸地棉蘇棉8號為母本，海島棉H7124為父本雜交，雜交后代用蘇棉8號回交產生BC1，次年將BC1播于病圃，每個病圃同時播種蘇棉8號，在花鈴期前選擇抗病單株，與蘇棉8號回交產生BC2，次年將BC2播于病圃，每個病圃同時播種蘇棉8號，在花鈴期前選擇抗病單株，與蘇棉8號回交產生BC3，連續回交，鑒定產生BC6，自交2代，產生BC6F2。在黃萎病人工病池中鑒定，獲得一個抗黃萎病的種質系蘇研VR025。根據本方法，結合分子標記選擇，就可以獲得本研究中的種質系蘇研VR025。(2)該種質系經過連續三年兩地(江蘇農科院和中國棉花研究所)抗病性鑒定，都表現出對黃萎病的抗性，平均病指為10.5％。蘇棉8號由江蘇省太倉市棉花育種中心選育，高感黃萎病，平均病指為68.3％。通過標記分析，抗黃萎病株系蘇研VR025攜帶海島棉海7124染色體D4的一個片段?？裹S萎病株系蘇研VR025與蘇棉本文檔來自技高網...
【技術保護點】
與抗棉花黃萎病主效QTLvw1位點連鎖的分子標記，其特征在于，所述主效QTLvw1位點位于棉花第4染色體上，并且與所述主效QTLvw1位點連鎖的分子標記為ZHX8、ZHX53和NAU3791，各分子標記引物序列如下：ZHX8的正向引物序列為SEQ?ID?NO.1，反向引物序列為SEQ?ID?NO.2；ZHX53的正向引物序列為SEQ?ID?NO.3，反向引物序列為SEQ?ID?NO.4；NAU3791的正向引物序列為SEQ?ID?NO.5，反向引物序列為SEQ?ID?NO.6。
【技術特征摘要】
1.與抗棉花黃萎病主效QTLvw1位點連鎖的分子標記，其特征在于，所述主效QTLvw1位
點位于棉花第4染色體上，并且與所述主效QTLvw1位點連鎖的分子標記為ZHX8、ZHX53和
NAU3791，各分子標記引物序列如下：
ZHX8的正向引物序列為SEQIDNO.1，反向引物序列為SEQIDNO.2；
ZHX53的正向引物序列為SEQIDN...
【專利技術屬性】
技術研發人員：趙君，肖松華，劉劍光，吳巧娟，徐劍文，
申請(專利權)人：江蘇省農業科學院，
類型：發明
國別省市：江蘇;32
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