一種那西肽的提取方法技術

本發明專利技術涉及一種那西肽提取方法，其工藝步驟包括：將那西肽發酵液經噴霧干燥,復合溶媒浸提，離心，大孔樹脂吸附，酸水解析，鹽水沉淀，洗滌、減壓干燥得到那西肽成品。本發明專利技術利用復合溶媒浸提，大孔樹脂脫色純化提取那西肽工藝，該方法可提高提取收率6.5%以上，產品純度達到96%以上，有利于經濟效益提高。本方法減少廢水排放量，有利于環保處理。本方法采用溶媒腐蝕性小、毒性小，有利于設備維護，有利于職業健康。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于抗生素提取
，特別是涉及一種那西肽粗品的制備方法。
技術介紹
那西肽（Nosiheptide）是由活躍鏈霉菌（Streptomy?ces actuosus）產生的一種含硫多肽類抗生素，是次級代謝產物，屬硫鏈絲菌素（Thiostrepton）類。因它能明顯的促進畜禽生長、改善飼料的利用率，同時用量低，在機體內無殘留, 對環境影響小,無交叉耐藥性，而被稱為環保型飼料添加劑。那西肽是一種酯溶性抗生素，主要存在菌體細胞內，僅有少量分泌到細胞外。那西肽常溫下呈結晶性粉狀末，顏色為淡黃色至淡褐色，可溶于氯仿、吡啶、二甲基甲酰胺，微溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯和苯，對水和石油醚表現為不溶，其熔點為310～320 ℃，溶解時伴隨分解。對于那西肽粗品的制備，現有技術中公開的報道有：1、乙醇浸提法，該方法采用首先將那西肽發酵液離心分離菌絲體，然后用乙醇浸提，正丁醇反萃，正丁醇萃取液濃縮得到那西肽粗品。該工藝中，正丁醇萃取液進行濃縮過程，需較高溫度，易造成那西肽高溫分解，影響那西肽提取產量和質量。2、二氯甲烷浸提法，該方法采用首先將那西肽發酵液離心分離菌絲體，用二氯甲烷反復3次浸提，得到的浸提液進行減壓濃縮得到那西肽粗品的工藝。該工藝中，浸提過程繁瑣，二氯甲烷易腐蝕設備，高溫下易分解，溶媒損耗較大。
技術實現思路
本專利技術的目的在于克服上述現有技術的缺陷，提供一種有效提高那西肽收率及產品質量，工藝簡單，溶媒腐蝕小、損耗少，同時可降低環境污染的那西肽的提取方法。為實現上述目的所采取的技術方案為：一種那西肽的提取方法，其特征在于其工藝步驟為：首先將那西肽菌絲粉用復合溶媒浸提，離心分離，所得浸提液經大孔樹脂吸附，酸水解析，鹽水沉淀后洗滌、減壓干燥即可得到那西肽成品；所述復合溶媒組成為：二甲基甲酰胺：乙醇：水=2.5～3.5：4.5～5.5：1.5～2.5，以體積比計。所述那西肽菌絲粉是將那西肽發酵液經噴霧干燥后所得。所述復合溶媒的用量為那西肽菌絲粉質量的2～3倍，浸提時間4～6hr，浸提溫度25～35℃。所述大孔樹脂吸附時，控制進料溫度20～25℃，進料速度2.0～6.0BV/h。所述酸水解析過程為：在大孔樹脂吸附結束后，先用90～95%（w/w）乙醇頂洗至無色，再僅限使用乙酸（50～55%，w/w）進行洗脫，洗脫速度1.5～3.5BV/h，高效液相檢查那西肽峰出現后，收集洗脫液，液相檢測那西肽濃度小于30ug/ml時，停止洗脫，合并洗脫液。所述鹽水沉淀過程為：將酸水解析所得的洗脫液，在攪拌狀態下，僅限加入碳酸鈉溶液（35～40%，w/w），攪拌2.0～2.5hr，靜置6～8 hr。所述碳酸鈉的用量為洗脫液體積的3～5倍。所述攪拌轉速60～80轉/min 。所述洗滌是指將那西肽沉淀液母液抽干后，得到那西肽濕品，按濕品體積，加入1～1.5倍體積丙酮，使丙酮浸透那西肽沉淀，將那西肽沉淀翻洗若干遍后，抽濾得到那西肽濕品，經減壓干燥，得到那西肽成品。本專利技術的技術優勢體現在：1 本專利技術提供了一種利用復合溶媒浸提，大孔樹脂脫色純化提取那西肽的工藝，該方法可提高提取收率6%以上，產品純度達到96%以上。2本專利技術用鹽水沉淀那西肽洗脫液，避免高溫濃縮造成那西肽的降解，產品質量好、產量高。3本專利技術操作流程簡捷，可操作性強。4 本專利技術廢水量少，減輕環保處理強度。5 本專利技術采用溶媒腐蝕性小、毒性小，有利于設備維護，有利于職業健康。具體實施方法下面用實例予以說明本專利技術，應該理解的是，實例是用于說明本專利技術而不是對本專利技術的限制。本專利技術的范圍與核心內容依據權利要求書加以確定。下述實施例中的那西肽發酵液來源：依據以下工藝流程得到：冷凍管斜面孢子種子液發酵液。采用二級發酵模式生產那西肽，其生產菌種為活躍鏈霉菌，培養基中的碳源主要是淀粉和葡萄糖，氮源是豆餅粉、玉米漿、酵母膏，經240h的發酵培養，其效價一般在1500ug/ml左右。準備那西肽發酵液500L（效價1200u/ml、菌絲濃度38%，發酵十億0.6×109u），進行噴霧干燥，進風溫度140±5℃，出風溫度55±2℃，得到那西肽菌絲粉207kg（水份8.2%）,均分成5份，每份41.4 kg（水份8.2%，總億0.12×109u），備用。實施例1取那西肽菌絲粉41.4 kg（堆密度0.6t/m3,總億0.12×109u），用138L復合溶媒（二甲基甲酰胺（V）：乙醇（V）：水（V）=2.5：4.5：1.5）浸提，浸提時間4hr，浸提溫度25℃，離心分離，得到浸提液137.6L（效價865 u/ml，0.119×109u），收率99.21%。將以上浸提液，進大孔樹脂LSA-700吸附脫色，進料溫度20℃，進料速度2.0BV/h，至料液進完。料液進完后，先用90%（w/w）乙醇頂洗至無色，再用50%（w/w）乙酸進行洗脫，洗脫速度以1.5BV/h進行，高效液相檢查那西肽峰出現后，收集洗脫液，液相檢測那西肽濃度小于30ug/ml時，停止洗脫，得到洗脫液206L（效價560 u/ml，0.115×109u），收率96.64%。洗脫液在攪拌下加入35%（w/w）碳酸鈉溶液，加量618L，攪拌2.0hr，攪拌轉速60轉/min，靜置6 hr，析出那西肽沉淀，抽濾，加入0.6L丙酮，使溶媒浸透那西肽沉淀，將那西肽沉淀翻洗若干遍后，抽濾得到那西肽濕品，經減壓干燥，得到那西肽成品162g，產品純度96.61%，收率96.59%。提煉收率92.59%。實施例2取那西肽菌絲粉41.4 kg（堆密度0.6t/m3,總億0.12×109u），用172.5L復合溶媒（二甲基甲酰胺（V）：乙醇（V）：水（V）=3：5：2）浸提，浸提時間4.5hr，浸提溫度30℃，離心分離，得到浸提液170.8L（效價690 u/ml，0.119×109u），收率98.20%。將以上浸提液，進大孔樹脂LSA-700吸附脫色，進料溫度21℃，進料速度3.0BV/h，至料液進完。料液進完后，先用92%（w/w）乙醇頂洗至無色，再用52%（w/w）乙酸進行洗脫，洗脫速度以2.0BV/h進行，高效液相檢查那西肽峰出現后，收集洗脫液，液相檢測那西肽濃度小于30ug/ml時，停止洗脫，得到洗脫液256L（效價450u/ml，0.115×109u），收率97.75%。洗脫液在攪拌下加入36%（w/w）碳酸鈉溶液，加量896L，攪拌2.2hr，攪拌轉速65轉/min，靜置6.5 hr，析出那西肽沉淀，抽濾，加入0.72L丙酮，使溶媒浸透那西肽沉淀，將那西肽沉淀翻洗若干遍后，抽濾得到那西肽濕品，經減壓干燥，得到那西肽成品164g，產品純度96.56%，收率96.56%。提煉收率92.68%。實施例3取那西肽菌絲粉41.4 kg（堆密度0.6t/m3,總億0.12×109u），用207L復合溶媒（二甲基甲酰胺（V）：乙醇（V）：水（V）=3.5：5.5：2.5）浸提，浸提時間5hr，浸提溫度35℃，離心分離，得到浸提液205L（效價580 u/ml，0.119×109u），收率99.29%。將以上浸提液，進大孔樹脂LSA-700吸附脫色，進料溫度22℃，進料速度4.0BV/h，至料液進完。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種那西肽的提取方法，其特征在于其工藝步驟為：首先將那西肽菌絲粉用復合溶媒浸提，離心分離，所得浸提液經大孔樹脂吸附，酸水解析，鹽水沉淀后洗滌、減壓干燥即可得到那西肽成品；所述復合溶媒組成為：二甲基甲酰胺：乙醇：水=2.5～3.5：4.5～5.5：1.5～2.5，以體積比計。

【技術特征摘要】
1.一種那西肽的提取方法，其特征在于其工藝步驟為：首先將那西肽菌絲粉用復合溶媒浸提，離心分離，所得浸提液經大孔樹脂吸附，酸水解析，鹽水沉淀后洗滌、減壓干燥即可得到那西肽成品；所述復合溶媒組成為：二甲基甲酰胺：乙醇：水=2.5～3.5：4.5～5.5：1.5～2.5，以體積比計。2.按照權利要求1所述的那西肽的提取方法，其特征在于所述那西肽菌絲粉是將那西肽發酵液經噴霧干燥后所得。3.按照權利要求1所述的那西肽的提取方法，其特征在于所述復合溶媒的用量為那西肽菌絲粉質量的2～3倍，浸提時間4～6hr，浸提溫度25～35℃。4.按照權利要求1所述的那西肽的提取方法，其特征在于所述大孔樹脂吸附時，控制進料溫度20～25℃，進料速度2.0～6.0BV/h。5.按照權利要求1所述的那西肽的提取方法，其特征在于所述酸水解析過程為：在大孔樹脂吸附結束后，先用90～95%乙醇頂洗至...

【專利技術屬性】
技術研發人員：裴立忠，王勇平，
申請(專利權)人：寧夏泰益欣生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：寧夏;64